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1、题号一二三四五六七八总成绩得分得分一、名词解释（共20分，每小题4分）1. 显微镜分辨力 指显微镜分辨被检物体细微结构的能力, 也就是判断两个物体点之间最短距离的本领, 以R表示. 计算公式为: R=/(2N.A)= /2nsin(/2)2. 鉴别培养基 一类含有某种代谢产物指示剂的培养基, 微生物在这类培养基上生长后, 分泌的代谢产物与指示剂起反应产生某种明显的特征性变化, 根据这种变化将该种微生物与其它微生物区分开来.3. 无菌操作 指用灭过菌的接种工具, 在无菌条件下, 接种含菌材料于灭过菌的培养基上, 这一过程叫无菌操作.4. 大肠菌群 大肠菌群系指一群在37, 24小时能发酵乳糖,
2、产酸, 产气, 需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌5. 细菌菌落总数 被检样品经过处理后, 在一定条件下培养后, 所得1克或1mL检样中所含细菌的菌落总数.得分二、填空题（共20分，每空0.5分）1. 根据显微镜物镜与标本之间的介质的性质不同, 物镜可分为 干燥系 物镜和油浸系物镜.前者是指物镜与标本之间的介质是 空气 。 后者是指物镜与标本之间的介质是一种和玻璃折光率相近的 香柏油 ，实验中使用油浸系物镜最常用的放大倍数是 100倍 。 利用油镜进行细菌的形态观察, 实验结束后, 要用擦镜纸蘸取 二甲苯 擦拭油镜镜头。2. 配制好的培养基要立即进行湿热灭菌 , 经灭菌的培养基要放入培养箱中
3、做 无菌检查 ， 以确定培养基是否可用。3. 培养基按其来源主要分为 天然 培养基, 合成 培养基和 半合成 培养基。4. 实验室中常用的干热灭菌方法有两种, 如接种工具一般采用 灼烧 灭菌法, 玻璃器皿常采用 干热 灭菌法, 具体做法是将玻璃器皿放入 干热灭菌箱 内。5. 微生物的接种方法有很多, 对于细菌来讲, 要在平板上获得单个的菌落, 通常使用接种方式为 三区划线 。 接种后的平板一般要倒置于培养箱中进行培养, 其倒置培养的原因是 防止冷凝水冲走菌落 。6. 革兰氏染色的一般过程主要包括制片 , 固定, 结晶紫初染 , 碘液媒染 , 乙醇脱色 , 番红复染 ，水洗和镜检等步骤。在操作过
4、程中, 最关键的步骤是 脱色 。 经革兰氏染色后, 大肠杆菌被染成 红 色, 八叠球菌被染成 紫 色。7. 请写出以下菌种的拉丁学名: 大肠杆菌 E.coli , 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis , 酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae 。8. 显微测微尺主要由 目镜 测微尺和 镜台 测微尺组成. 在进行细胞大小测定之前, 目镜 测微尺要先进行标定。9. 测定酵母细胞死亡率时, 所用的染料是 美蓝染液, 染色 2-3分钟, 于显微镜下观察, 其中变蓝的细胞为 死 细胞。10. 麦氏计数板的规格为 1625 ，在麦氏计数板一个滴加稀释10倍的样品, 按对角
5、线方位, 左上, 右上, 左下, 右下四个大格的细胞数分别为64个, 100个, 80个, 96个. 则本次检测的酵母细胞浓度为 1.4107个/mL 。11. 霉菌菌丝观察主要利用 乳酸苯酚油 作介质。12. 在显微镜下易于观察到霉菌的无性孢子, 其中毛霉和根霉的无性孢子是 孢子囊孢子 , 青霉和曲霉的无性孢子是 分生孢子 。13. 在细菌生理生化实验中, 三糖铁高层琼脂中含有的糖主要有葡萄糖, 蔗糖, 乳糖三种糖. 其中, 葡萄糖 是另外两种糖含量的1/10倍. 其斜面含有指示剂酚红, 它在pH小于6.8时为黄色, 大于8.4时为红色, 伤寒沙门氏菌在该培养基中生长一定时间后, 其斜面的颜
6、色为 红 色, 大肠杆菌为 黄 色。14. 在进行酵母菌细胞出芽率测定的时候, 芽体数10个, 酵母细胞数为40个, 则该样品中酵母细胞的出芽率为 25% 。得分三、选择题（共8分 每题1分）1.配制固体培养基时所用凝固剂含量一般为（ A ），半固体培养基常用凝固剂含量一般为（ C ）。A1.5%-2% B. 5%-7% C. 0.6%-0.8% D. 15%-20%2.干热灭菌常用的灭菌温度是（C ）， 灭菌时间为4-6小时。A. 120 B. 121 C. 140 D. 1153.下列培养基中， 哪种培养基不是培养酵母常用的培养基（ D ）？A. 麦芽汁培养基 B. 马铃薯葡萄糖琼脂培养基
7、C. YEPD培养基 D. 牛肉膏蛋白胨培养基 4. 下列最适于霉菌生长的培养温度为（ A ）。A28 B. 35C. 25 D. 375. 实验过程中， 霉菌的接种工具一般为（ B ）， 接种方式为（ D ）。A. 接种针 B. 接种钩 C. 划直线 D. 点接6. 明胶液化实验， 明胶的水解是由于细菌所产生的（ C ）的作用。A. 脂肪酶 B. 纤维素酶 C. 蛋白酶 D. 淀粉酶7. 斜面试管的标签应贴在斜面的正上方， 距管口（ D ）处。A. 1cm-1.5cm B. 1.5cm-2cm C. 2cm-2.5cm D. 2.5cm-3cm8. 下列霉菌中有足细胞的霉菌为（ D ）。A.
8、 毛霉 B. 青霉 C. 根霉 D. 曲霉得分四、问答题（共52分）1. 简要说明湿热灭菌为什么比干热灭菌更加有效?(6分) 在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低（2分），二是湿热的穿透力比干热大（2分）；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100时，由气态变为液态时可放出226kJ（千焦）的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力（2分）。3.以大肠杆菌和产气肠杆菌为例，说明其在VP实验与MR实验中的结果为什么刚好相反（7分） 多数细菌能够分解葡萄糖, 但分解葡萄糖的途径和产物却
9、不完全相同。（2分） 例如大肠杆菌能够利用分解葡萄糖产生丙酮酸, 丙酮酸继续代谢可进一步生成其它的有机酸, 大肠杆菌所产生的酸能使培养基的pH降到4.2或更低, 从而使甲基红指示剂变成红色, 显示MR试验阳性（2分）. 而产气肠杆菌在在利用葡萄糖生成丙酮酸后, 一部分丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇, 在强碱性环境中, 被空气中氧气氧化, 生成双乙酰, 双乙酰与蛋白胨中的精氨酸胍基作用生成红色化合物, V-P试验结果为阳性（2分）. 而大肠杆菌不能生成中性化合物, 因此V-P试验阴性（1分）, 而产气肠杆菌中的丙酮酸不能进一步分解生成大量的有机酸, 因此MR试验阴性（1分）. 4. 在啤酒生产
10、过程中, 常需要检测发酵液中的酵母细胞浓度, 简述不同的计数方法, 过程, 并说明其优缺点（10分）直接计数法（1分）, 主要利用血球计数板进行计数, 计数结果即包括活细胞数, 也包括死细胞数（2分）. 优点: 快速, 简便; 缺点: 难以确切知道活细胞数（2分）.间接计数法（1分）, 也称活细胞计数法, 主要是将样品稀释, 利用倾注法倒平板, 先将稀释过的样品倒在平皿内, 然后将冷却至45的培养基注入平皿, 轻轻摇匀, 使之混和（2分）. 优点是反映真实, 缺点是耗时太长, 且易有人为误差（2分）.5. 简述目镜测微尺的标定过程 （10分） (1) 把接目镜的上透镜旋开，将目镜测微尺轻轻放入
11、接目镜中隔板上，使有刻度的一面朝下。(2) 将镜台测微尺放在显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上。(3) 先用低倍镜观察，对准焦距，待看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度相平行，并使二尺左边的一条线重合，向右寻找另外二尺相重合的直线。(4) 记录两条重合刻度间的目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。(5) 目镜测微尺每格长度的计算：按下面的公式计算。两条重合线间镜台测微尺的格数10目镜测微尺每格长度(m) =两条重合线间目镜测微尺的格数（每步2分）6. 以假丝酵母为例, 说明小室培养的操作过程.(7分) 取一培养皿, 内放一层吸20%的甘油或水的滤纸, 其上放一
12、玻璃U形管;（1分） 从酒精浸泡的干净载玻片中有镊子夹取一块, 燃烧灭菌, 放在U形管上;（1分） 首先将PDA半固体培养基溶化, 冷却至45并保温, 取假丝酵母一环按液体接种方式接种于其内, 用酒精消毒的玻璃棒蘸取一滴已接种假丝酵母的PDA, 迅速滴到已灭过菌的载玻片上, 侍凝固后, 用火焰烧过的盖玻片轻盖于其上, 轻压, 要求中央培养基直径不大于0.5cm, 盖玻片和载玻片之间的距离不超过0.5mm. 制好片后, 盖好皿盖.（4分） 于28培养, 培养过程中使滤纸湿润.（1分）7. 现有绿茶一瓶, 简要说明该样品的大肠菌群测定程序. (12) 将样品稀释,取其中的三个稀释度接乳糖胆盐发酵管 乳糖胆盐发酵实验 将被检样品接种于乳糖胆盐发酵管中, 如果不产气, 则用为肠菌群阴性, 如果产气, 则继续进行检验. 分离培养 将产气的发酵管分别划线接种到EMB平板上, 置37培养24小时, 挑取紫红色, 具有金属光泽的可疑菌落进行革兰氏染色, 同时将对应的菌落接种到乳糖复发酵管进行复发酵. 复发酵证实实验 将复发酵管置37培养24小时, 观察产气情况, 凡是在乳糖发酵管产气, 革兰氏染色为无芽孢杆菌, 即报告为大肠菌群阳性. （每步3分）
