银耳多糖水浸提取

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1、武汉工商学院生物制药工程技术论文学院专业:生物工程年级:2012级学生:夏继承学号 1204011104指导教师：乐薇职称:副教授题目:水浸提银耳多糖的关键技术研究2015年4月5日目录水浸提银耳多糖的关键技术研究1摘要1Abstract.12. 实验试剂及仪器22.1实验试剂22.2实验仪器33. 实验部分33.1标准曲线的制作33.2实验材料预处理43.3单因素试验43.3.1料水比单因素试验43.3.2温度单因素试验43.3.3pH值比单因素试验43.3.4时间单因素试验43.4单因数试验结果与讨论43.5正交试验63.6正交试验结果与讨论73.7验证性试验74. 结论7致谢9水浸提银耳

2、多糖的关键技术研究摘要为充分利用提取银耳多糖，探讨银耳多糖的水浸提的关键技术。本设计用正 交分析法研究了温度、pH值、料水比、时间等四个因数对银耳多糖的水浸提法的 效率影响，并获得的最佳的提取条件为温度50C, pH值12,料水比1:50,时间 2h。关键词：水浸提取；银耳多糖；关键技术Key techniques of water extraction oftremella polysaccharideAbstractTo make full use of tremella polysaccharide extracted, this paper discusses the key tech

3、nology of tremella polysaccharide water leaching. This design for the four factor of water extraction of tremella polysaccharide extraction efficiency was studied, and obtain the best extraction conditions for temperature is 50 C, the pH value is 12, the ratio of material to water is 1:50, time is 2

4、 hKey words: water immersion extraction; Tremella polysaccharide; The key technology1. 前言银耳，生长于温带和亚热带地区，是有隔担子菌亚纲银耳科银耳的子实体， 又称白木耳1。银耳银耳子实体纯白至乳白色，胶质，半透明，柔软有弹性，由数 片至10余片瓣片组成，形似菊花形、牡丹形或绣球形，直径3-15cm。干后收缩， 角质，硬而脆，白色或米黄色。子实层生瓣片表面。担子近球形或近卵圆形，纵 分隔，10-12x9-10nt夏秋季生于阔叶树腐木上。银耳具有丰富的药用价值，其中银耳多糖具有相当大的研究意义。银耳多糖 对体液

5、免疫有所影响3，腹腔注射银耳多糖200mg/kg能使正常小鼠脾脏重量增 加。100mg/ k银耳多糖g能使环磷酰胺处理和正常小鼠经绵羊红细胞（SRBC）免疫 所致溶血素生成分别增加112.9%和92. 9%，这表明银耳多糖可改善免疫功能低下 小鼠及增强正常小鼠的体液免疫功能囹，银耳多糖能延长果蝇的平均寿命，使其 脂褐质含量降低23. 95 %。银耳多糖还可降低小鼠心肌组织的脂褐质含量，能抑制 脑中MAO-B活性，增强小鼠肝组织和脑中超氧化物歧化酶（SOD）活性，延长小鼠 在缺氧情况下的生存期6 7。此外，银耳多糖还可以通过促进蛋白质及核酸的合成、 增加肝微粒体细胞色素P-4 5 0含量、增强机

6、体免疫功能而发挥抗衰老的作用。周 慧萍等8报道，银耳多糖可对抗环磷酰胺引起的小鼠骨髓微核率增加，同时还可防 止受照射动物的淋巴细胞染色体发生畸变。基于银耳多糖如此丰富的价值，如何经济高效的提取银耳多糖成为了研究的 重要方向。目前，银耳多糖的提取主要有热水浸提取法、碱提取法以及酶解提取 法等910。由于热水提取法最为经济实用，故笔者对热水浸提取法的关键技术（提 取温度，料水比，pH值，时间）11 进行了相关研究。并取得了相应的数据，经正 交实验分析和验证性实验得出结论。2. 实验试剂及仪器2.1实验试剂银耳，于白沙洲青菱寺菜市场购买；发烟硫酸（A.R），天津市百世化工有限 公司；苯酚（A. R）

7、，天津纵横兴工贸公司化工试剂分公司；葡萄糖（A. R）， 天津风船化工剂化科技有限公司；氢氧化钠（A. R），天津市天力化学试剂有限公 司。2.2实验仪器DG120型四两装中药材粉碎机，浙江省瑞安市飞达药材器械厂；DK-98-IIA 型电热恒温水浴锅，天津泰斯特仪器有限公司；722E型分光光度计，上海光谱仪 器有限公司制造；AUY120型电子天平；TD25-WS型离心机，湘麓离心机。3. 实验部分3.1标准曲线的制作精密称取千燥恒重的葡萄糖99.7mg，用水溶解并稀释至100ml，备用。精密 吸取备用液10ml加水稀释至100ml定容，得葡萄糖标准液。取5只试管，精密吸 取标准液 0ml，0.

8、2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，水 1ml，0.8ml，0.6ml，0.4ml，0.2ml， 再分别各加5%苯酚试剂1.0ml，各管迅速滴加浓硫酸5.0ml，立刻摇匀。室温放置 30分钟，迅速冷却，用紫外可见分光光度计在490nm处测定吸光度。以吸光度为 纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程。吸光值Ay = 0.0093x R2 = 0.99822040标糖浓度6080表3-1标准曲线C (u g/ml)019.9439.8859.8279.76A00.2050.3770.5660.732图3-1标准曲线3.2实验材料预处理将市场买回的银耳于烘箱50。烘干至衡重，剪刀初碎

9、，用四两装中药材粉碎机 DG120型粉碎，16目筛过滤，备用。3.3单因素试验对料水比，温度，pH值，时间四个单因素进行探索性试验。3.3.1料水比单因素试验称取1g16目过筛银耳粉，于圆低烧瓶提取，用恒温水浴锅恒温，并辅助回流 装置，维持提取体系稳定。在料水比分别为1:20，1:40，1:60，1:80的情况下，于 50r，pH为12，提取时间为2h的试验条件下，所得提取液3000rmp离心10min， 稀释50陪，取1.0ml，加入5%苯酚试剂1.0ml，迅速滴加浓硫酸5.0ml，立刻摇匀。 室温放置30分钟，迅速冷却，用紫外可见分光光度计在490nm处测定吸光度，查 标准曲线算出糖含量。

10、3.3.2温度单因素试验在温度分别为20r，40r，60r，80r的情况下，于料水比为1:50，pH为12， 提取时间为2h的实验条件下，按照3.3.1的方法试验。3.3.3pH值比单因素试验在pH分别为8, 12, CNaOH=1M，CNaOH=2M，于料水比为1:50，温度为50r， 提取时间为2h的实验条件下，按照3.3.1的方法试验。3.3.4时间单因素试验在时间分别为0.5h，1.5h，2.5h，3.5h，于料水比为1:50，温度为50r，pH为 12的实验条件下，按照3.3.1的方法试验。3.4单因数试验结果与讨论表3-2料水比单因素料水比1:201:401:601:80A0.41

11、10.5390.3220.209糖含量(mg)44.19115.91103.8789.89从表3-2中可以看出料水比在1:40到1:60之间提取效率较佳。表3-3温度单因素温度。C20406080A0.2090.5220.5090.382糖含量(mg)56.18140.32136.83102.69从表3-3中可以看出温度在40r到60r之间提取效率较佳。表3-4pH值比单因pH812CeWCNaOH=2MA0.3750.5340.4510.422糖含量(mg)100.81143.55121.24113.44从表3-4中可以看出pH值在12左右提取效率较佳。表3-5时间单因素时间h0.51.52

12、.53.5A0.3020.5110.5030.483糖含量(mg)81.18137.37135.22129.84从表3-5中可以看出时间在1.5h到2.5h之间提取效率较佳。3.5正交试验在单因数试验结果讨论与分析的基础上，设计正交实验，以提取时间料水质 量比（A）,提取温度（B），pH（C）,提取时间（D）为影响因素，设计四因素 三水平的正交试验优化提取工艺。得到9组试验样品后，按照标准曲线绘制的方 法处理，并在490nm处测吸光值，查标准曲线算出糖含量，选取最佳提取工艺。表3-6正交试验设计因素与水平水平因素A料水比B ；温度。CC pHD时间h14050111.525060122.036

13、070132.5表3-7正交试验表序号料水比温度pH时间糖含量/mg1111168.6021222112.043133352.9042123138.7152231123.6662312130.6573132111.618321393.5593321142.58K1233.55318.92292.80334.84K2393.01329.25393.33354.30K3347.74326.13288.17285.163.6正交试验结果与讨论根据正交表可得出料水比下K1, K2, K3的值K2最大，即料水比中第二个水 平(料水比为1:50)为最适条件，同理得最佳的提取温度为50C，最佳的提取pH 值

14、为12,最佳的提取时间2h。3.7验证性试验由正交实验表中K1, K2, K3的比较，得到A2B2C2D2为最佳条件，即料水 比1:50，温度60C， pH=12，时间为2h。基于以上最佳条件设计平行的三组实验，即料水比1:50，温度60C，pH=12,时间为 2h。提取液离心处理后稀释50倍，490nm处测定吸光值，查标准曲线，并计算出糖含量。表3-8验证平行实验试验组123平均A0.5830.5940.5770.585糖含量(U g)156.72159.68155.11157.174.结论银耳多糖有丰富的价值，通过单因素试验，正交试验和验证性试验，得到热 水浸提法关键技术为：料水比1:50，温度60C，pH=12，时为2h。在此条件下，得到 初糖提取率为：初糖提取得率 % = .初糖量 x 100% = 157.17 x 100% = 15.72%银耳干重1000由此可见，该试验取得了理想的效果。参考文献1 魏国志，李国光，金梅红.银