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1、第三章 药物的杂质检查药物的检查包括四大方面，分别是有效性、均一性、安全性和纯度要求。药物的纯度是 指药物的纯净程度，药物中的杂质是影响药物纯度的主要因素。因此，药物的纯度检查即是 指药物的杂质检查。根据药物中杂质的来源可分为一般杂质及特殊杂质。一般杂质是在多数 药物的生产和贮藏过程中都容易引入的杂质，如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、炽 灼残渣、残留溶剂等，而特殊杂质是各个药物中可能存在的原料、中间体、降解物、异构体、 副反应产物等，是该药在生产和贮藏过程中有可能引入的仅属该药特有的一些杂质。对于药物中所存在的杂质，在不影响疗效、不产生毒性和保证药物质量的前提下，允许 药物中含有一定量的
2、杂质。杂质的限量一般根据杂质的安全性、生产的可行性、产品的稳定 性等综合考虑而定。药物中杂质限量的控制方法一般分两种：一种为限量检查法（limit test）,另一种是对杂 质进行含量测定。限量检查法通常不要求测定其准确含量，只需检查杂质是否超过限量。进 行限量检查时，多数采用标准溶液对照法，此外，还可采用灵敏度法和比较法。对照法系指 取一定量的被检杂质标准溶液和一定量供试品溶液，在相同的条件下试验，比较结果，以确 定杂质含量是否超过限量。由于供试品（S）中所含杂质的最大允许量可以通过杂质标准溶液的浓度（C）和体积（V）的乘积表达，所以，杂质限量（L）的计算公式为:杂质限量杂质标准溶液（浓度x
3、体积）供试品量x100CxV或 L =x 100%S采用对照法须注意平行操作原则，即供试溶液和对照溶液应在完全相同的条件下反应，如加入的试剂、反应的温度、放置的时间等均应相同，这样检查结果才有可比性。灵敏度法系指在供试品溶液中加入一定量的试剂，在一定反应条件下，不得有阳性结果 出现，从而判断供试品中所含杂质是否符合限量规定。该法不需用杂质标准品溶液对比。如 乳酸（lactic acid）中枸橼酸、草酸、磷酸或酒石酸的检查：取本品0.5g加水适量使成5ml, 混匀，用氨试液调至微碱性，加氯化钙试液1ml,至水浴中加热5min，不得产生浑浊。比较法系指取供试品一定量依法检查，测定特定待检杂质的参数
4、（如：吸光度等）与规 定的限量比较，不得更大。如维生素b2中检查感光黄素，利用维生素b2几乎不溶于氯仿, 而感光黄素溶于氯仿的性质，用无醇氯仿提取供试品中的感光黄素，在440 nm波长处测定氯仿液的吸光度，不得超过0.016。实验二 药物的一般杂质检查五种无机杂质的检查一、实验目的1掌握氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属和砷盐限量检查的基本原理和方法。2掌握杂质的限量计算方法。3了解无机杂质检查的意义。二、基本原理无机杂质可能来源于生产过程，如生产过程中使用的仪器、原料、干燥试剂、过滤辅助 器，反应试剂、催化剂、助滤剂、活性炭等，它们一般是已知的和确定的。由于许多无机杂 质直接影响药品的安全性和稳定
5、性，并可反映生产工艺本身的情况，了解药品中无机杂质的 存在状况对评价药品的生产工艺、保证药品安全、稳定具有重要意义。1氯化物检查药物中微量的氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银作用，生成的氯化银胶体微粒而显白色 浑浊，与一定量标准氯化钠溶液（10聘Cl-/ml）与硝酸银在同样条件下生成的氯化银浑浊程 度相比较，判定供试品中氯化物是否符合限量规定。Cl- + Ag +T AgCl / （白）2硫酸盐检查药物中微量的硫酸盐在稀盐酸酸性溶液中与氯化钡反应，生成的硫酸钡微粒显白色浑浊， 与一定量标准硫酸钾溶液（100聘SO42-/m 1）在相同条件下产生的硫酸钡浑浊程度比较，判 定供试品硫酸盐是否符合限量规
6、定。SO 2- + Ba2+ t BaSO J （白）443铁盐检查中国药典和美国药典均采用硫氰酸盐法。铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸盐作用生成红 色可溶性的硫氰酸铁配离子，与一定量标准铁溶液（硫酸铁铵，FeNH4 （S04）212H2O）用 同法处理后进行比色。Fe3+ + nSCN- Fe（SCN） n - 3（n=1 6）n在酸性条件下反应，可防止Fe3+的水解。加入氧化剂过硫酸铵既可氧化供试品中Fe2+成Fe3 +,同时可防止由于光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。某些药物（如葡萄糖、糊精、硫酸镁等）在检查过程中需加硝酸处理，硝酸也可将Fe2+氧化成F e3+，因此这些药物的铁盐检查可在硝酸酸
7、性溶液中进行。因硝酸中可能含亚硝酸，它能与硫氰酸根离子作用，生成红色亚硝酰硫氰化物，影响比色，所以剩余的硝酸必须加热煮沸除去。HNO + SCN-+ H+tNO-SCN + HO224重金属检查重金属系指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫代钠作用而显色的金属杂质，如银、铅、 汞、铜、镉、铋、锑、锡、砷、锌、钴、镍等。因为在药品生产中遇到铅的机会较多，且铅 易积蓄中毒，故作为重金属的代表，以铅的限量表示重金属限度。中国药典收载了四种重金 属检查方法。其中，硫代乙酰胺法的原理如下：硫代乙酰胺在弱酸性条件下（pH 3.03.5）水解，产生硫化氢，与重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，与一定量标准硝
8、酸铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，判定供试 品中重金属是否符合限量规定。CH CSNH + H O t CH CONH + H S322322Pb 2+ H S t PbS 1+2H+25砷盐检查中国药典收载的古蔡氏（Gutzeit）法检查砷盐的原理是：金属锌与酸作用产生新生态的 氢，与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑， 与一定量标准砷溶液所生成的标准砷斑比较，判断供试品中重金属是否符合限量规定。As 3+ + 3 Zn + 3 H + t 3 Zn 2 + + AsH T3AsO 3- + 3Zn + 9H + t 3Zn 2 + + 3H O +
9、AsH T323AsH + 3HgBr t 3HBr + As （ HgBr ）（黄色）3232As（HgBr） +AsH t3AsH（HgBr） （棕色）332As （HgBr ） +AsH t3HBr +As Hg （黑色）3323五价砷在酸性溶液中也能被金属锌还原为砷化氢，但生成砷化氢的速度较三价砷慢，故 在反应液中加入碘化钾及氯化亚锡将五价砷还原为三价砷，碘化钾被氧化生成的碘又可被氯 化亚锡还原为碘离子，后者与反应中产生的锌离子能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化 氢的反应不断进行。AsO 3- + 21 - + 2H + t AsO 3- +1 + H O4322AsO3-+Sn2+
10、2H+ tAsO3-+Sn4+H O432I + Sn 2 + t 2 I - + Sn 4 +24I - + Zn2+ t ZnI 24氯化亚锡与碘化钾还可抑制锑化氢的生成，因锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑。在试验条件下，100 “锑存在也不致干扰测定。氯化亚锡又可与锌作用，在锌粒表面形成锌 锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续地发生。锌粒及供试品中可能含有少量硫化物，在酸性液中能产生硫化氢气体，与溴化汞作用生 成硫化汞的色斑，干扰试验结果，故用醋酸铅棉花吸收硫化氢。用醋酸铅棉花60 mg,装管 高度约60 mm80 mm,以控制醋酸铅棉花填充的松紧度，使既能免除硫化氢的干扰（100
11、 gg 硫化物存在也不干扰测定），又可使砷化氢以适宜的速度通过。三、实验方法葡萄糖中五种无机杂质的检查。1氯化物取本品0.30 g,加水溶解使成12.5 ml （溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀 硝酸5 ml；溶液如不澄清，应滤过；置25 ml纳氏比色管中，加水使成约20 ml,摇匀，即 得供试品溶液。另取标准氯化钠溶液（10卩g CI-/ml） 3.0 ml,置25 ml纳氏比色管中，加稀 硝酸5 ml,加水使成约20 ml,摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入 硝酸银试液0.5 ml,用水稀释使成25 ml,摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从 比色管上方向
12、下观察、比较，供试品溶液不得比对照溶液更浓（0.010%）。2硫酸盐取本品1.0 g，加水溶解使成约20 ml （溶液如显碱性，可滴加盐酸使成为中性）；溶液 如不澄清，应滤过；置25 ml纳氏比色管中，加稀盐酸1ml,摇匀，即得供试溶液。另取标 准硫酸钾溶液（100卩g SO42-/ml） 1.0 ml,置25 ml纳氏比色管中，加水使成约20 ml,加稀 盐酸1 ml,摇匀，即得对照溶液，于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液2.5 ml,用水稀释使成25 ml,充分摇匀，放置10分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下 观察、比较、供试溶液不得比对照溶液更浓（0.010%）。3铁盐
13、取本品1.0 g,加水10 ml溶解后，加稀硝酸2滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释 使成22.5 ml,加硫氰酸铵溶液（30100） 2.5 ml,摇匀，如显色，与标准铁溶液（10 gg Fe3+/ml） 1.0 ml经相同方法制成的对照溶液比较，不得更深（0.001%）。4重金属取25 ml纳氏比色管3支，甲管中加入一定量标准铅溶液（10卩g Pb2+/ml）与醋 酸盐缓冲液（pH3.5） 2 ml后，加水稀释至25 ml。取本品4.0 g,置于乙管中，加水适 量使溶解，加醋酸盐缓冲液（pH 3.5） 2 ml,再加水稀释至25 ml。丙管中加入与乙管相 同量的供试品，加水适量使溶解，再加
14、与甲管相同量的标准铅溶液与醋酸盐缓冲液（pH3.5） 2 ml后，用水稀释成25 ml。再在甲、乙、丙3管中分别加新鲜配制的硫代 乙酰胺试液各2 ml,摇匀，放置2 min，同置白纸上，自上向下透视，当丙管中显出 的颜色不浅于甲管时，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。如丙管中显出的颜色 浅于甲管，应取样按中国药典第二法重新检查。（含重金属不得过百万分之五） 5砷盐取本品2.0 g置试砷瓶中，加水5 ml溶解后，加稀硫酸5 ml与溴化钾溴试液0.5 ml，置 水浴上加热约20分钟，使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾溴试液适量，并随 时补充蒸散的水分，放冷，加浓盐酸5 ml （可改为加
15、稀盐酸（1： 1） 10 ml）与水适量使成 28 ml，加碘化钾试液5 ml与酸性氯化亚锡试液5滴。在室温放置10分钟后，加锌粒2 g （锌 粒和锌粉各1 g），迅速用试砷管塞紧瓶塞（试砷管上已置装有醋酸铅棉花及溴化汞试纸）， 并在2540 C的水浴中反应45分钟，取出溴化汞试纸，将生成的砷斑与一定量标准砷溶液 制成的标准砷斑进行比较，颜色不得更深，应符合规定（0.0001%）。标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液（1卩g/ml） 2 ml,置试砷瓶中，加浓盐酸5 ml 与蒸馏水21 ml （可改为：加稀盐酸（1： 1） 10 ml和蒸馏水16 ml），再加碘化钾试液5 ml 与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2 g （锌粒和锌粉各1 g），迅速用 试砷管塞紧瓶塞（试砷管上已置装有醋酸铅棉花及溴化汞试纸），并在2540 C的水浴中反 应 45 分钟，取出溴化汞试纸，观察标准砷斑。四、实验指导1纳氏比色管的选择与洗涤：比色或比浊操作，一般均在纳氏比色管中进行，因此在 选用比色管时，必须注意使样品管与标准管的体积相等，玻璃色质一致，最好不带任何颜色， 管上的刻度均匀，如有差别，不得相差2 mm。比色管洗涤时避免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁划出条痕影响比色或比浊。2平行原则：比色、比浊
