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1、 XXXXX公司建立医用产品灭菌剂量验证报告送检单位： 公司日 期： 年 月 日目 录序言2试验前准备工作2方法3实施内容4结果5结论6附注6参考资料6初始污染菌检测规范7确定灭菌剂量9无菌检查10序言本实验是对医用产品公司的一次性医疗用品进行了辐射灭菌剂量设定和验证。实验原理是基于ISO11137-2：2006的方法，即先对辐照前产品的初始污染菌进行测定，然后选择验证剂量。再用验证剂量对产品进行辐照，并测定辐照后存活微生物的样品件数，以此来确定所确定的验证剂量能够满足10-6的灭菌保证水平。本实验从 年 月 日开始至 年 月 日结束。试验前准备工作一、样品1样品：医用产品，三个批号：生产企业
2、： 公司。2器具及试剂2.1器材试管容量瓶三角烧瓶酒精灯灭菌剪刀、镊子灭菌平皿（9cm）75乙醇棉灭菌刻度吸管(1ml、5ml)紫外可见分光光度计立式压力蒸汽灭菌器电热鼓风干燥箱酸度计恒温培养箱电热恒温水浴锅生化培养箱电热恒温干燥箱2.2培养基及试剂：a)流体硫乙醇酸盐培养基b)改良马丁培养基c)营养琼脂培养基2.3稀释液、冲洗液及其制备方法 a)质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液b)0.1蛋白胨水溶液 取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.10.2，分装，灭菌。c)pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋
3、白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。 二、实验前准备2.1培养基要求：用于培养需（厌）气菌和真菌的培养基的制备、培养基灵敏度检查及其他各项要求应符合中国药典（二部）附录中无菌检查法的规定。培养基使用按中国药典方生产的符合规定的脱水培养基。制备后采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基保存在225、避光的环境。2.2器具灭菌：与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸气灭菌器内12130min，或置电热干燥箱内1602h。2.3无菌室要求：无菌室操作台局部符合洁净度100级单向流空气区域要求。无菌室在消毒处理完毕后，检查空气中的菌落数，方法如下：取直径约90mm
4、培养皿数支，无菌操作注入融化的营养琼脂培养基约20mL，在3035培养48h证明无菌后，取3只培养皿在无菌室操作台或超净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好，置3035培养48h后取出检查，3只培养皿上生长的菌落数平均不得超过1个。无菌试验过程中检查空气中的菌落数，方法同上。在试验开始进行时打开平皿盖，至试验结束盖好照上法培养，符合上述要求。2.4阳性对照：选择金黄色葡萄球菌为对照菌，接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，2328培养2448小时，将上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。阳性对照试验的菌液制备方法验证试验，加菌量小于1
5、00cfu，供试品用量同供试品无菌检查每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养4872小时应生长良好。2.5阴性对照：取相同稀释液、冲洗液同上法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。方法客户提供生产的医用产品，每件医用产品均是一个独立的单元产品，其样品份额为1。具体步骤如下：1. 随机抽取连续三批常规生产的产品，每批10件，共30件做生物负载检测。另从其中一批随机取5件样品，做回收率实验。2. 当每个批平均生物负载都不超过三批总平均生物负载的2倍时，根据三批的总平均负载的检测结果，选择灭菌保证水平为10-2的灭菌剂量作为验证剂量。3. 对以上三批抽样产品连续生产的110件产品实施验证剂量，实
6、际吸收剂量应在验证剂量的3%之内。4. 对用验证剂量辐照过的100件产品做无菌实验，其余的10件产品做无菌试验的验证实验。5. 根据无菌实验的结果，确定验证剂量是否被接受，即确定的验证剂量是否能够满足10-6的灭菌保证水平。实施内容一、回收率测定取5ml洗脱液洗脱5支产品，分别洗脱四次，然后将样品用营养琼脂做琼脂覆盖，于37培养箱中，培养482h，记录结果并得出修正系数。二、初始污染菌测定将随机抽取的30件样品中生物负载进行评估，编号后，分别用5ml 洗脱液洗脱，吸取1ml置于9ml稀释液中，振摇均匀后分别取1ml样品液于两个平皿中，记录编号为101，102，代表五十倍样，取1ml置于9ml稀
7、释液，振摇均匀后分别取1ml样品液于两个平皿中，记录编号为1001，1002，代表五百倍样。依次取第二件样品，至30件样品。倾注营养琼脂，于37培养箱中，培养482h，记录结果。三、 确定验证剂量ISO 11137：2006 医疗器械灭菌的有效性确认和常规控制的要求中规定，若批次平均生物负载的每一个生物负载数值 总的平均生物负载*2，则用总的平均生物负载，若一批或更多批次的平均生物负载总的平均生物负载*2，则用最高批次。本次试验采用总平均初始污染菌120（cfu/SIP）确定验证剂量。查ISO11137：2006 表格得出对应的验证剂量为8.2kGy，该试验剂量下的无菌保证水平SAL为10-2
8、。四、验证剂量辐照结果从产品的单个批次中选出110个单元产品的样本，暴露在XXXXX公司的电子加速器传送带上辐照，使辐射剂量落在8.25% kGy 范围内。辐照后进行无菌试验。五、无菌试验5.1供试液制备及接种取样品按容器内表面积每10cm2加入浸提介质1ml的比例，振摇数次。收集上述冲洗液或浸提介质于无菌容器中。5.2无菌检验培养温度硫乙醇酸盐流体培养基，置3035培养。改良马丁培养基，置2328培养。5.3接种采用直接接种法每管培养基的最低用量硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml，改良马丁培养基每管装量不少于10 ml。5.4培养、观察上述含培养基的容器分别置规定温度的恒温培养箱中，
9、除阳性对照管和阴性对照管培养4872小时外，其余管培养14天。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。结果对三批医用产品进行初始污染菌测试后，修正系数为1.08，结果如下：批 号初始污染菌平均数（cfu/件）总平均数因此，根据ISO11137-2：2006建立灭菌剂量的规定，选用总平均生物负载为120（cfu/件）来确定验证剂量。根据以上数据查表得验证剂量为 kGy,对以上 批次110件，实测剂量为 kGy（见辐照证明书）。经观察，100件样品经验证剂量辐照后的无菌检查阳性数为零。结论依据ISO 11137 ：2006 规定，当SAL=10-6时，医用产品的灭菌剂量为 kGy。在随后的常规辐照灭
10、菌过程中，应通过剂量计监测，证明每一个产品的最小吸收剂量能够达到 kGy 的灭菌剂量，使灭菌保证水平为10-6SAL。依据ISO 11137 ：2006 标准，为了确保作为10-6SAL的灭菌剂量持续有效，必须按照规定的周期进行验证剂量审核，通常每三个月进行一次。附注1、 试验样品不可替代批量产品。2、 当批量产品辐照时的剂量确定，必须随机抽取该批量部分产品作初始污染菌验证。参考资料1、 ISO11137-1：2006医疗保健产品的灭菌-辐照-第一部分：医疗器械灭菌过程的发展、确认和常规控制要求2、 ISO11137-2：2006医疗保健产品的灭菌-辐照-第二部分：建立灭菌剂量3、 ISO11
11、137-3：2006医疗保健产品的灭菌-辐照-第三部分：剂量指南4、 ISO11737-1：1995医用器材灭菌-微生物学方法-第1部分：产品上微生物总数量的测定5、 ISO11737-2：1998医用器材灭菌-微生物学方法-第2部分：灭菌过程确认中的无菌试验初始污染菌检测规范试验方法：1、初始污染菌检测按ISO11737-2006医疗器械的灭菌-微生物方法第一部分产品上微生物总数的测定-MRC初始污染菌的测定2、菌落总数回收率的测定方法同（一）回收率测定结果样品名称： 医用产品 生产企业： 生产批号： 型号规格： 样品数量： 样本号洗脱次数每次洗脱的细菌数（cfu/SIP）平均菌落数1234
12、51234琼脂覆盖全部菌落数回收率%平均回收率修正系数初始污染菌检测生产批号： 型号规格： 样品数量： 样本号批号样本号批号样本号批号需氧菌（cfu/SIP）需氧菌（cfu/SIP）需氧菌（cfu/SIP）111212122231323414245152561626717278182891929102030SIP 平均初始污染菌SIP 平均初始污染菌SIP 平均初始污染菌校正后批平均初始污染菌（*1.08）校正后批平均初始污染菌（*1.08）校正后批平均初始污染菌（*1.08）校正后平均初始污染菌确定灭菌剂量每批产品初始污染菌如下：批号平均初始污染菌数（cfu/件）总平均数剂量确定：按照ISO
13、11137-2：2006中关于建立灭菌剂量验证方式1查得120cfu/件的验证剂量为 kGy。再按要求对A03批次110件医用产品采用 kGy的验证剂量进行辐照处理，经无菌检查，阳性数为零。这表明， kGy能够满足医用产品10-6的灭菌保证水平。无菌检查试验方法:1、样品接种均应按无菌操作法进行；2、无菌打开包装用灭菌剪刀、镊子，将产品转移至胰酪胨大豆肉汤中；3、将置有样品的培养基放30+0.5的培养箱中的培养14天；观察有无细菌生长；结果：无菌试验的验证试验检验结果生产批号试验样品数量培养基温度（）培养天数阳性数阴性数110胰胳蛋白胨大豆肉汤300.521010结论：经测试，所有验证试验的结果均为阳性，表明样品中无抑制细菌生长的释出物，说明无菌试验的结果有效。无菌试验检验结果生产批号试验样品数量培养基温度（）培养天数阳性数1100硫乙醇酸盐流体培养基300.5140改良马丁培养基
