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1、医学分子生物学实验课程教学大纲山东大学医学院医学分子生物学实验课程实验教学大纲课 程 名 称： 医学分子生物学实验 英 文 名 称： Practice of Medical Molecular Biology课 程 编 号： 实 验 课 性 质： 融合创新性实验课 程 负 责 人： 胡晓燕 开放实验项目数：大 纲 主 撰 人： 辛华，刘奇迹，任桂杰，徐霞，张鹏举 苑辉卿大 纲 审 核 人： 苑辉卿 一、学时、学分课程总学时： 40 实验学时：40 课程总学分： 实验学分：二、适用专业及年级基础、临床、预防、口腔医学、护理学、药学专业的五、六、七年制三、实验教学目的与基本要求通过医学分子生物学融
2、合性实验教学，将细胞生物学、生物化学与分子生物学、医学遗传学学科的基础理论知识、实验技能操作、学科的前沿进展以及疾病的分子机理及治疗原则等知识进行归纳、融合，形成系统化的知识结构。通过实验教学，使学生熟悉实验室的常用仪器，培养学生动手能力、发现问题，并从单独学科知识体系对问题进行综合分析，从而解决问题。通过资料查阅、总结，学生自己找出问题，并设计实验进行验证及探索，培养学生的科研能力、创新意识及团队精神。四、主要仪器设备低温高速离心机、紫外可见分光光度计、恒温水浴箱、荧光倒置显微镜、生物学显微镜、酶标仪、DNA微量测定仪、CO2恒温孵箱、电泳仪、电转仪、垂直电泳装置、凝胶成像仪、PCR自动热循
3、环仪、紫外透射仪、微量加样器、枪头及离心管、容器盒、恒温水浴箱等五、实验课程内容和学时分配序号实验项目名 称实 验 内 容学时分配实验要求指导教师已开/未开1蛋白质印迹技术比较检测患者和正常人血清中的免疫球蛋白1）蛋白样品处理：将患者与正常人血清分别加入上样缓冲液，沸水浴5min；2）SDS-PAGE胶的制备：先配制分离胶，再配置浓缩胶；3）蛋白上样，电泳分离血清中不同组分的蛋白质；4）转膜：采用电转移将蛋白从胶转移至硝酸纤维素(NC)膜上。将阴极碳极板、海绵、滤纸、凝胶、NC膜、滤纸、海绵、阳极碳极板依次放好，夹好夹子，放入电泳槽中，180mA，转移2h；5）免疫学检测：采用辣根过氧化物酶（
4、HRP）标记的抗体检测目的蛋白。取出NC膜5脱脂奶粉封闭1h加入一抗反应1hPBS洗涤3次，每次10min加入HRP标记的二抗反应1hPBS洗涤3次，每次10min加入显色底物DAB后目的蛋白即显示出棕黄色。通过条带颜色的深浅和有无比较正常人和患者血清中免疫免疫球蛋白的表达差异8分小组进行徐霞七年制中已开，五六年制中未开展。2PCR技术原理及应用1)用Trizol试剂对小鼠肾脏细胞进行总RNA的提取与鉴定；2)逆转录反应：总RNA 500ng、Random hexaprimer,AMV reverse transcriptase Buffer、AMV reverse transcriptase
5、、RNase inhibitor、dNTP 3)PCR扩增目的基因：扩增小鼠表皮生长因子。引物为特异性引物，扩增长度为442bp；内对照为-actin，其扩增长度218bp。PCR扩增 4)PCR反应结果的检测，琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物； 5）PCR实验结果分析。8分小组进行任桂杰未开3假肥大型肌营养不良的基因诊断1)提取相关家系成员、孕妇外周血DNA,提取羊水基因组DNA。2)对所提取的基因组DNA利用电泳法定量3)利用事先设计的引物对所有个体的基因组DNA进行PCR扩增。4)利用选定的限制性内切酶对PCR产物进行酶切。5)对酶切产物利用琼脂糖凝胶电泳检测。6)对结果进行分析。8分小组进
6、行郭辰虹未开421三体综合征的产前诊断)提取夫妇双方外周血及羊水基因组DNA。).从21号染色体上选择多个STR多态位点并设计引物。3)利用所设计引物进行PCR扩增。4)对PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。5)记录所有个体基因型，并对结果进行分析。8分小组进行陈丙玺未开5家族性高胆固醇血症的诊断方法创新实验1）讲解家族性高胆固醇血症的知识背景2）提出问题3）引导学生如何利用所学知识寻找解决问题的思路，并可进行实验设计2田克立苑辉卿未开1)分小组汇报实验思路、实验设计依据、实施实验的具体步骤2）整理和统计分析实验结果，总结和完成研究报告3）讲评并给出考核成绩4分小组进行6分泌型绿色荧光蛋白表达载体的构建及表达检测实验1)构建分泌型绿色荧光蛋白表达载体 利用信号肽的DNA序列和绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1载体，构建分泌型绿色荧光蛋白表达载体，命名为pEGFP-S-P。2)培养细胞的制备： 胰酶消化贴壁生长的PC-3细胞，按照2105/孔接种于24孔板，置细胞培养箱中培养。3).细胞转染：应用脂质体进行细胞转染. 4) 表达检测：转染后48h，倒置荧光显微镜下观察部分细胞内外的分布情况。32分小组进行张鹏举未开六、考核方式结合实验操作和实验报告确定成绩。
