《植物细胞工程实验》由会员分享，可在线阅读，更多相关《植物细胞工程实验（16页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、植物细胞工程实验报告班级： 姓名：学号： 指导老师： 时间： 目录实验准备：培养基母液的配制 培养基的配制与灭菌实验一、香蕉吸芽的组织培养实验二、烟草叶片的组织培养实验三、木薯的微繁技术实验四、桉树再生体系建立实验五、玉米花生成熟胚培养 实验六、柱花草叶片组织培养实验七、水稻盾片组织培养自选实验：洋葱、仙人掌的组织培养实验准备：培养基母液的配制一、实验目的 掌握培养基母液的配制。在配置培养基之前，为了方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配置培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液。二、实验原理 培养基是植物细胞、组织和器官吸
2、取营养的场所。在植物细胞的分裂和分化过程中，需要各种营养物质，这些营养物质包括无机营养成分、有机营养成分、植物生长调节物质等。在对植物的器官、组织和细胞进行离体培养时，只是切取植物体的一小部分，它们无法象整体植株那样合成生长发育所需的全部物质。而自然界的植物千差万别，每一种植物都有自己独特的生理代谢过程和各自的营养需求，没有哪一种培养基能够适用于所有植物。因此，对培养基组成成分的筛选是非常重要和必不可少的程序。目前对植物进行组培时，人们所使用的培养基只几十种，其中MS培养基应用最为广泛。说明MS培养基的无机盐成分对许多植物种均是适宜的，它的无机盐含量较高，微量元素种类较全，浓度也较高。三、实验
3、试剂与仪器设备1、药品试剂：母液、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA、IAA、2，4-D等。2、仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。四、实验内容（一）母液的配制MS培养基母液方案配制如下表：成分1L母液的用量(mg/L)每升培养基取用量(ml)备注大量元素(20X)NH4NO33300050KNO338000KH2PO43400MgSO47H2O7400CaCl2660050单独配制铁盐(100X)FeSO4.7H2O278010Na2-EDTA3730微量元素（20
4、0X）KI1665H3BO31240MnSO4.H2O3380ZnSO4.7H2O1720Na2MoO4.2H2O50CuSO4.5H2O5CoCL2.6H2O5有机元素(100X)VB11010VB650烟酸50甘氨酸200肌酸10000具体配制步骤如下：1、大量元素母液的配制 无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大20倍，用感量为0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解.溶解时在每只烧杯中加入30-40mL重蒸馏水，置于酒精灯上,加热使其溶解(注意温度不可过高，60-70)。溶解后，在1000mL量筒中，混合后用重蒸馏水定容到1000mL。其中Ca
5、Cl2单独配制。在加入母液时CaCl2应最后加入，以免形成沉淀。将配好的混合液倒入细口瓶中，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，配1000mL培养基取此母液50mL。2、微量元素母液的配制无机盐中微量元素母液，按照培养基配方用量的200倍，用微量0.0001g的电光分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解。混合定容于100ml容量瓶中保存于冰箱中,配制培养基时，每配制1000mL培养基取此母液5mL.3、铁盐母液的配制无机盐中铁盐母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取
6、此母液10mL。4、有机元素的配制无机盐中有机元素母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取此母液10mL。五、注意事项1、配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042-，Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。2、配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。3、药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。4、药品的称量及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。5、一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，其中维生素 氨基酸类
7、可以分别配制，也可以混在一起。5、母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。实验准备：培养基的配制与灭菌一、培养基的配制及消毒：（1）按照MS培养基的配方（以配制1LMS培养基为例）取大烧杯加入先前配制好的母液其中包括：大量元素50ml、微量元素5ml、铁盐10ml、有机元素10ml，最后加钙盐50ml充分混匀。再加入30g食用白糖，加入适量的去离子水使总量将近1L，混匀后调PH值（调至5.8-6.2），用1000ml量筒定容，最后向培养基中添加8.0g卡拉胶混匀。注意事项：配制MS时，钙盐一定要最后加入；调好PH值后再加卡拉胶（或琼脂）。（2）培养基配制好后分装到培养瓶中每瓶约30ml
8、，盖好瓶盖帖上标签。需要加入激素的培养基在定容到1000ml后加入所需的激素。混匀后调PH值（调至5.8-6.2），用1000ml容量瓶定容，最后向培养基中添加8g卡拉胶，混匀后进行分装，然后装入高温高压灭菌锅进行灭菌（一般培养基用0.1MPa，121.5，1530分钟可达到彻底灭菌的目的）。灭菌好后取出冷却备用。（3）培养环境条件：培养温度为28（-1、+1），光照强度20003000LX，光照时间为12h/d，每隔7天观察一次。二、超净操作台的消毒消毒时先用75%的酒精对超净台的各处进行消毒，点燃酒精灯放于超净台右侧，再对实验工具进行灼烧灭菌，后放于架上冷却待用。并依次将实验中所用培养基瓶
9、及所需试剂瓶进行消毒，置于超净台左侧，注意实验中要用75%的酒精对手进行消毒。实验一、香蕉吸芽的组织培养前言：香蕉传统的繁殖方法多是采用吸芽分株法，这种方法的繁殖系数低，速度慢，难以满足当前大规模的栽培生产，且容易传播疾病。利用组织培养的技术来对香蕉优质品种进行无性繁殖，这样不但可以保持香蕉的优良性状，加快繁殖速度，而且，试管苗不带病虫害和病毒病，并且，利用组织培养技术得到的幼苗生长比较一致，有利于田间的管理和采收，本实验利用香蕉的吸芽作为外植体。1、材料和方法:1.1材料(1) 香蕉吸芽(2) 无菌纸、镊子、酒精灯等(3)实验采用MS基本培养基，PH： 5.8-6(4)诱导培养基： MSBA
10、3mgL30gL白糖+8.5gL卡拉胶(5)继代培养基： MSBA5mgL30gL白糖+8.5gL卡拉胶1.2方法1.2.1外植体消毒 用自来水冲洗吸芽表面的泥土，剥离外假茎，只留下茎和假茎各2-3cm长，假茎的的直径有2-3cm， 用洗衣粉清洗一遍，用自来水冲洗，转入0.1%升汞浸泡15-20min，其间不断搅拌，弃去升汞用无菌水洗3遍（无菌水漂洗：将从升汞中取出的香蕉吸芽组织块转入无菌水中漂洗，不断摇动使漂洗干净）留在瓶中备用。1.2.2诱导培养将香蕉吸芽放到无菌工作台的无菌纸上，用消毒刀将外植体的假茎的最外层剥掉，以及有消毒刀将已经变色的茎外面一小层也切掉，然后从外植体茎中间一分为四，接
11、入诱导培养基，共4瓶。7天后观察。1.2.3继代培养将诱导培养得到的香蕉苗中长势较好的一瓶用作继代培养的材料，在超净工作台上将香蕉芽丛分开，切去顶部叶片部分，削去底部褐化部分，将芽丛接种于香蕉继代增殖培养基中，接种2瓶。1.2.4培养条件：培养温度为28（-1、+1），光照强度20003000LX，光照时间为12h/d（注意香蕉吸芽诱导期无需光照）,每个星期观察一次 。2、实验结果与分析：2.1 诱导培养：共接种了4瓶，出现一定的褐化现象，诱导率为100%，污染率为25%，说明用0.1%的升汞对香蕉的吸芽消毒15-20min的时间控制比较合理，消毒的效果也较好。附录1、诱导培养实验结果统计表外
12、植体数目成活数污染数成活率污染率441100%25%2.2 继代培养：从三瓶未污染的香蕉苗中选取长势最好的一瓶，继代培养两瓶，一瓶长势良好，另一瓶香蕉苗由于褐化现象比较严重而死去。原因：可能是因为在继代的培养过程中，用刀切去褐化部分时切去的过多，使香蕉基部受伤严重而死亡。3、注意事项1）整个实验过程要严格进行无菌操作；2）倒培养基时要边用玻璃棒搅拌，边倒培养基，防止培养基的浓度不均匀；3）观察记录时，要注意拿组培瓶的方式，手要握住组培瓶的下方而不要握住组培瓶的盖子；4）发现污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的；5）观察记录时要仔细，认真描述并做好记录。实验二、烟草叶片组织培养前言：目前
13、烟草一般采用有性繁殖，但繁殖的烟苗不均衡，易发生变异，而且易感病菌，造成多种病害发生，品质退化，从而影响经济收人。用嫩叶片的组培方法，可以保持优良品种的优良性状，减少病虫害，从而达到高产优质的目的。另外，烟草生长速度快，生长周期短，所以是基因工程中最为广泛使用的模式植物之一。本实验利用烟草的叶片作为外植体，诱导培养基为MSBA 1.0 mgL。1、材料和方法:1.1材料(3) 1）烟草叶片、无菌纸、镊子、酒精灯等 2）MS为基本培养基 3）诱导培养基： MSBA 1.0 mgL30gL白糖+8.5gL卡拉胶 4）继代培养基： MSBA 1.0 mgLNAA 0.5 mgL30gL白糖+8.5g
14、L卡拉胶 1.2方法1.2.1外植体消毒将烟草叶片洗净，将烟草叶片左右垫与牛皮纸上用手术刀切取2cm长，2cm宽的无主叶脉、主侧叶脉的长方形叶片块（10片左右），置于加了1-2滴土温的0.1%的升汞溶液中消毒10-15min，期间注意不断摇动，取出叶片置于无菌水中清洗3次，留于最后清洗的无菌水中备用。1.2.2诱导培养将烟草叶片取出将叶片周遍切去，再将每片叶切成2片，接入诱导培养基中，每7天观察记录一次。1.2.3培养条件：培养温度为28（-1、+1），光照强度20003000LX，光照时间为12h/d，,每个星期观察一次 。2、实验结果与分析：1）诱导培养全部被污染，污染率100%，诱导率为0。 原因可能是：灭菌不彻底，整组均被污染 用升汞消毒的时间过短，因此应适当延长消毒时间。 操作过程染菌附录1、第一次烟草诱导培养结果统计表接种瓶数诱导数污染数诱导率污染率4040100%2） 未能进行继代培养3、注意事项1）整个实验过程要严格进行无菌操作；2）倒培养基时要边用玻璃棒搅拌，边倒培养
