《粗蛋白测定[谷风教学]》由会员分享，可在线阅读，更多相关《粗蛋白测定[谷风教学]（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、凯氏定氮法仪器设备1 样品粉碎机或研钵 2 分析筛 孔径0.45nm（40目） 3 分析天平 感量 0.0001g4 消化炉或电炉 5 滴定管 酸氏 25 50ml 6 凯氏烧瓶250ml7 凯氏蒸馏装置 常量蒸馏氏或半微量蒸馏氏 8 锥形瓶 150 250ml 9 容量瓶 100ml 10消化管 250ml 11定氮仪试剂及配制1 浓硫酸（GB 625）化学纯2 硫酸铜（GB 665）化学纯3 硫酸钾（HG 3-920）化学纯或硫酸钠（HG 3-905）化学纯4 400g/l NaOH溶液 40g NaOH（GB629）溶于100ml水中5 20g/l 硼酸溶液 2g硼酸（GB628）溶于1
2、00ml水中6 盐酸标准滴定溶液 邻苯二甲酸氢钾法标定 c(hcl)=0.1mol/l:盐酸标准滴定溶液。8.3ml 盐酸（GB622,分析纯），注入1000ml水中C(hcl)=0.2mol/l:盐酸标准滴定溶液，16.7ml盐酸（GB622,分析纯），注入1000ml水中7 混合指示剂。甲基红（HG3-958）1g/L乙醇溶液与溴甲酚绿（HG 3-1220）5g/l乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存3个月以内8 硫酸铵（GB 1396）分析纯，干燥9 蔗糖 （HG 3-1001）分析纯10 硼酸吸收液。10g/L硼酸溶液1000ml,加入甲基红1g/L乙醇溶液7ml，与溴甲酚绿1g/L
3、乙醇溶液10ml，40g/L氢氧化钠溶液0.5ml,混合，至阴凉处保存期为1个月（全自动定氮分析仪用）测定步骤1 消化称取0.5-1g试样（含氮量5-80mg），准确至0.0002g，无损地放入凯氏烧瓶或消化管中，加入硫酸铜（CuSO4.5H2O）0.4g,无水硫酸钾（或无水硫酸钠）6g，与试样混合均匀，再加浓硫酸10ml和2粒玻璃珠。把凯氏烧瓶或消化管放在通风柜里的电炉或消煮炉上小心加热，待样品焦化，泡沫消失，在加大火力（360-400度），直至溶液澄清后，再加热消化15min.。试剂空白测定：另取凯氏烧瓶或消化管一个，加入硫酸铜0.4g,无水硫酸钾（或硫酸钠）6g，浓硫酸10ml,加热消化
4、至溶液澄清。2 氨的蒸馏 1 常量直接蒸馏法。将试样消煮液冷却，加水60-100ml，摇匀，冷却。将蒸馏装置冷凝管的末端浸入35ml硼酸吸收液和加混合指示剂2滴的锥形瓶中，然后小心地向凯氏烧瓶或消化管中，加入氢氧化钠溶液至溶液颜色变黑，再稍加少许，使溶液混匀后，加热蒸馏，直至流出液体积约150ml。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开页面，继续蒸馏1-2min,并用水冲洗末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。 2 半微量水蒸气蒸馏法 将试样消煮液冷却，加水20ml，移入100ml容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。取35ml硼酸溶液，加混合指示剂2滴，使半微量装置的冷凝管末端浸入
5、此液。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在在蒸馏过程中此溶液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10-20ml,注入蒸馏装置的反应室中，用少量水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10ml 400g/L氢氧化钠溶液，小心拉起玻璃塞使之进入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏4min,使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min,用水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。3 滴定 硼酸吸收氨后，立即用0.1或0.02mol/l盐酸标准滴定溶液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点4 空白测定取0.5g蔗糖，消耗0.1mol/l盐酸标准滴定溶液体积不超过0.2ml,消耗0.02mol/L盐酸标准滴定溶液体积不超过0.3ml5 测定步骤检验 精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，测的硫酸铵含氮量为21.19%0.2%,否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确6结果计算W(cp)=(V1-V2)*c*0.014*6.25/m*(V/V)V试样分解液蒸馏用体积V 试样分解液总体积7 重复性当粗蛋白含量在25%以上，允许相对偏差1%10%-25% 2%10%以下 3%1教育a
