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1、国家质检总局和国家标准委联合发布食品中苏丹红染料的检测方法-高效液相色谱法国家标准2005-03-29苏丹红属于偶氮系列化工合成染色剂，主要应用于蜡、油彩、汽油等产品，我国禁止苏丹红染料应用于食品生产。2005年2月英国食品标准管理局宣布收回受苏丹红污染的食品后，为了保证食品安全，维护消费者权益，国家质检总局立即发出紧急通知，要求生产企业召回受苏丹红污染的食品，对使用苏丹红的食品生产企业进行查处。同时，国家标准委组织有关部门参考国外标准，研究相应的检测方法，对其进行反复验证和比对，经北京、广东、上海等18个省级产品质量检测机构的实际应用，其准确性得到进一步验证。在此基础上，国家质检总局和国家标
2、准委于2005年3月29日批准发布食品中苏丹红染料的检测方法-高效液相色谱法国家标准，该标准自发布之日起实施。该标准规定了苏丹红系列染料的测定方法，适用于食品中苏丹红染料的检测，使用普通的高效液相色谱仪就能够准确完成。标准的制定充分考虑我国的实际情况，采用正相吸附和固相萃取原理，一次性去除样品中辣椒色素和番茄色素对食品中苏丹红检测结果的影响，解决了国外检测标准适用范围窄、设备昂贵、操作复杂、成本高等不足。附件：GB/T19681-2005食品中苏丹红染料的检测方法-高效液相色谱法ICS中华人民共和国国家标准GB/T 196812005食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法The method
3、 for the determination of Sudan dyes in foods High performance liquid chromatography2005-03-29 发布 2005-03-29 实施国家质量监督检验检疫总局国家标准化管理委员会发布GB/T 196812005I前 言本标准遵循GB/T1.1-2000标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则和GB/T20001.4-2001标准编写规则 第4部分：化学分析方法的编写规则。本标准的附录A为资料性附录。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出。本标准由国家粮食质量监督检验中心归口。本标准起草单位：国家粮食质量
4、监督检验中心，大连市产品质量监督检验所。本标准主要起草人：潘炜、王春燕、李鹏、董广彬、于利军。GB/T 1968120051食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法1 范围本标准适用于食品中苏丹红染料的检测。本标准规定了食品中苏丹红、苏丹红、苏丹红、苏丹红的高效液相色谱测定方法。方法最低检测限：苏丹红、苏丹红、苏丹红、苏丹红均为 10 ug/kg 。2 术语和定义2.1 苏丹红属偶氮系列化工合成染料。3 方法要点样品经溶剂提取、固相萃取净化后，用反相高效液相色谱紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。4 试剂与标准品4.1 乙腈 色谱纯4.2 丙酮 色谱纯、分析纯4.3 甲酸 分析纯4
5、.4 乙醚 分析纯4.5 正己烷 分析纯4.6 无水硫酸钠 分析纯4.7 层析柱管：1cm（内径） 5cm(高)的注射器管。4.8 层析用氧化铝（中性 100 目200 目）： 105 干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g 中加入2mL 水降活，混匀后密封，放置12h 后使用。注：不同厂家和不同批号氧化铝的活度有差异，须根据具体购置的氧化铝产品略作调整，活度的调整采用标准溶液过柱，将1ug/mL 的苏丹红的混合标准溶液1mL 加到柱中，用5%丙酮正己烷溶液60mL 完全洗脱为准，4 种苏丹红在层析柱上的流出顺序为苏丹红、苏丹红、苏丹红、苏丹红，可根据每种苏丹红的回收率作出判断。苏丹红、苏丹
6、红的回收率较低表明氧化铝活性偏低，苏丹红的回收率偏低时表明活性偏高。4.9 氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3 cm 高，轻敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL 正己烷预淋洗，洗净柱中杂质后，备用。4.10 5%丙酮的正己烷液：吸取50mL 丙酮用正己烷定容至1L。4.11 标准物质：苏丹红、苏丹红、苏丹红、苏丹红；纯度95%4.12 标准贮备液：分别称取苏丹红、苏丹红、苏丹红及苏丹红各10.0mg（按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。5 仪器与设备5.1 高效液相色谱仪（ 配有紫外可见光检测器）GB/T 19681200525.2 分析天
7、平：感量 0.1mg5.3 旋转蒸发仪5.4 均质机5.5 离心机5.6 0.45m 有机滤膜6 样品制备将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需磨细。7 操作方法7.1 样品处理7.1.1 红辣椒粉等粉状样品称取1 g5g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入10mL30mL正己烷，超声5min，过滤，用10mL正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5mL以下，慢慢加入氧化铝层析柱中（4.9），为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。控制氧化铝表层吸附的色素带宽宜小于0.5
8、cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂质的多少用10mL30mL正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL（4.10）洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5mL，经0.45m有机滤膜过滤后待测。7.1.2 红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品称取0.5 g2g（准确至0.001g）样品于小烧杯中，加入适量正己烷溶解（约1 mL10mL），难溶解的样品可于正己烷中加温溶解。按7.1.1中“慢慢加入到氧化铝层析柱过滤后待测”操作。7.1.3 辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品称取10 g20g（准确至0.01g）样品于离心管中，加10mL20mL水将其分散成糊
9、状，含增稠剂的样品多加水，加入30mL正己烷：丙酮 = 3：1，匀浆5min, 3000rpm离心10min, 吸出正己烷层，于下层再加入20mL2次正己烷匀浆，离心，合并3次正己烷，加入无水硫酸钠5g 脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并保持5分钟，用5mL正己烷溶解残渣后，按7.1.1中“慢慢加入到氧化铝层析柱过滤后待测”操作。7.1.4 香肠等肉制品称取粉碎样品10g20g（准确至0.01g）于三角瓶中，加入60mL正己烷充分匀浆5min，滤出清液，再以20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次滤液，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸至5mL以下，按7.1.1中“慢慢加入到氧化铝层析
10、柱中过滤后待测”操作。7.2 推荐色谱条件7.2.1 仪器条件 色谱柱： Zorbax SB-C18 3.5 m 4.6mm150mm （或相当型号色谱柱） 流动相： 溶剂A 0.1%甲酸的水溶液：乙腈 = 85：15 溶剂B 0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20 梯度洗脱：流速:1mL/min 柱温：30 检测波长：苏丹红 478nm ；苏丹红、苏丹红、苏丹红 520nm ；于苏丹红出峰后切换。进样量10l。梯度条件见表1。7.2.2 标准曲线吸取标准储备液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mL ，用正己烷定容至25mL
11、，此标准系列浓度为0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56g/mL,绘制标准曲线。7.3 计算GB/T 1968120053按公式（1）计算苏丹红含量R=C V /M （1）R样品中苏丹红含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C由标准曲线得出的样液中苏丹红的浓度，单位为微克每毫升(g/mL)；V样液定容体积，单位为毫升（mL）；M样品质量，单位为克（g）。表1 梯度条件流动相时间（min）A B曲线0 25 75 线性10.0 25 75 线性25.0 0 100 线性32.0 0 100 线性35.0 25 75 线性40.0 25 75 线性GB/T 1968120054附录A（资料性附录）苏丹红标准色谱图min 0 5 10 15 20 25 30 35mAU01234VWD1 A, Wavelength=476 nm (SUDAN405030307.D)5.75210.50615.51721.870Sudan ISudan II Sudan IIISudan IV_
