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1、多数微生物碱性蛋白酶不耐热，碱土金属，特别是钙对碱性蛋白酶有明显的热稳定作用碱性蛋白酶是加酶洗涤剂的主要添加剂之一，在丝绸、制革工业中也有广泛用途热稳定性将酶液分别置于不同的温度条件下（ 30，40，50，60，70）保温 10min后，立即在 0 冰浴中冷却， 然后在 40 下测碱性蛋白酶活力， 以剩余的酶活性作为评价酶的热稳定性的指标。 测量三个重复求平均值， 将最高的酶活力定义为 100%，分别计算不同温度条件下蛋白酶的剩余酶活性与最高酶活性的比值。以 ph7 的缓冲液为例 , 如果你的目标蛋白等电点小于7, 呢就带负电荷 , 用阴离子交换的柱子那选择阳离子交换的柱子, 如果等电点是7,
2、 那上样的缓冲液pH 大于它的等电点用阴离子子, 如此类推就可以缓冲液的PH pI 值 1，上阴离子柱，pI 值 1，上阳离子柱，一般缓冲液ph 范围在与 PI 值相差 1 个 PH是比较理想的。如果不清楚PI 值，可以将蛋白溶到PH梯度的缓冲液里，然后分别试阳离子和阴离子填料（积就够了），看那个PH下挂得好。, 如果是大于7, 小于 7 的用阳离6.5 8.5 之间，50ul 左右得体强离子交换剂 :在宽 pH 范围内载量稳定， 所以他的优点是不同pH 下载量恒定， 可控性好，平衡过程快速、简单。弱离子交换介质的缺点：适用的 pH 范围比较小， 随着 pH 不同载量发生变化。但是大部分蛋白等
3、电点在5.5 7.5 。因此强 / 弱离子交换介质都可以使用弱离子交换介质（DEAE、 ANX、CM)优点在于：和强离子交换介质的选择性不同，因此我们一般先使用强离子交换，如果优化条件还是达不到理想的分离效果，可以尝试弱离子交换，用选择性不同的介质尝试一下。因此弱离子交换与强离子交换由于选择性不同，可以说是对不同蛋白的结合力有差异。S技术规格离子交换剂类型Q Sepharose FF季氨基，强阴离子DEAE Sepharose FF二乙基氨基乙基，弱阴离子ANX Sepharose 4FF二乙基氨基丙基，弱阴离子SP Sepharose FF磺丙基，强阳离子CM Sepharose FF羟甲基
4、，弱阳离子离子容量Q Sepharose FF0.18-0.25mmol（Cl- ） /mlDEAE Sepharose FF0.11-0.16mmol（Cl- ） /mlANX Sepharose 4 FF0.13-0.18mmol （ Cl- ） /mlSP Sepharose FF0.18-0.25mmol （H+）/mlCM Sepharose FF0.09-0.13mmol （ H+） /ml动态载量Q Sepharose FF120mg HSA/ml填料DEAE Sepharose FF110mg HSA/ml填料ANX Sepharose 4 FF5mg 甲状腺球蛋白 /ml填料
5、SP Sepharose FF70mg RNAase/ml 填料CM Sepharose FF50mg RNAase/ml 填料压力/ 流速Q Sepharose FF400-700cm/h ， 100kpa， XK50/30 层析柱，柱床高 15cmDEAE Sepharose FF300-600cm/h ，100kpa ，XK50/30 层析柱，柱床高 15cmANX Sepharose 4 FF至少 200cm/h， 100kpa， XK50/60 层析柱，柱床高 25cmSP Sepharose FF400-700cm/h ，100kpa ，XK50/30 层析柱，柱床高 15cmCM
6、 Sepharose FF300-600cm/h ， 100kpa， XK50/30 层析柱，柱床高 15cm平均颗粒大小90um（ 45-165um）基质Sepharose FF高度交联琼脂糖，6%Sepharose 4 FF高度交联琼脂糖，4%PH稳定性Q Sepharose FFDEAE Sepharose FFANX Sepharose 4 FFSP Sepharose FFCM Sepharose FF1-14 （短期），1-14 （短期），2-14 （短期），3-14 （短期），2-14 （短期），2-12 （长期）2-13 （长期）3-13 （长期）4-13 （长期）4-13 （
7、长期）化学稳定性在所有常用的水溶液缓冲液中稳定：8M尿素、 6M盐酸胍、 70%乙醇、 1M NaOH和 1M醋酸 20%乙醇（ Q ,DEAE,ANX,CM）, 含 0.2M 醋酸钠的 20%乙醇（ SP）保存保存温度4 - 30l 1M NaOH和醋酸仅在清洗时使用Phenyl-Sepharose HP产品名称： 苯基 - 琼脂糖凝胶6FF性状：白色微球凝胶类型：疏水层析介质粒径： 45-165 m工作 PH值： 3-13应用：疏水层析介质，快流速，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等产品名称： 苯基 - 琼脂糖凝胶H.P.性状：白色微球凝胶类型：疏水层析填料粒径： 24-44 m工作 PH值
8、： 3-13应用：疏水层析介质，高分辨率，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等产品名称： 苯基 - 琼脂糖凝胶CL-4B性状：白色微球凝胶类型：疏水层析填料粒径： 45-165 m工作 PH值： 3-13应用：疏水层析介质，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等。产品名称： 丁基 - 琼脂糖凝胶4FF性状：白色微球凝胶类型：疏水层析介质粒径： 45-165 m工作 PH值： 3-13应用：疏水层析介质，快流速，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等产品名称： 丁基 - 琼脂糖凝胶H.P.性状：白色微球凝胶类型：疏水层析介质粒径： 24-44 m工作 PH值： 3-13应用：疏水层析介质，高分辨率，适合生物大分
9、子和疫苗的分离纯化等产品名称： 丁基 - 琼脂糖凝胶4B性状：白色微球凝胶类型：疏水层析介质粒径： 45-165 m工作 PH值： 4-8应用：疏水层析介质，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等产品名称： 辛基 - 琼脂糖凝胶4FF性状：白色微球凝胶类型：疏水层析介质粒径： 45-165 m工作 PH值： 3-13应用：疏水层析介质，快流速，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等产品名称： 辛基 - 琼脂糖凝胶H.P.性状：白色微球凝胶类型：疏水层析介质粒径： 24-44 m工作 PH值： 3-13应用：疏水层析介质，高分辨率，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等产品名称： 辛基 - 琼脂糖凝胶CL-4B性
10、状：白色微球凝胶类型：疏水层析介质粒径： 45-165 m工作 PH值： 3-13应用：疏水层析介质，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等HPLC内容：1、反相柱子：一般适用范围比较大。分离极性比较小的物质。极性强的物质先出柱。ODS就是 C18柱子。RP-8 和 RP-18 分别是 C18柱子和 C8 柱子。C18柱子和 C8 柱子是柱子的碳链的长度不一样的。碳链增长了 , 也增加了键合相的非极性作用的面积, 对保留值和选择性都有影响, 随烷基碳链的增长对溶质分离的选择性也增强了. 但是对单一或简单组分确实看不出太大区别。2、正相柱子：一般分离光学异构体和反相柱子不能分离的极性比较大的物质。AP
11、S为 NH2柱子另外 diol代表的是球形硅胶邻二羟基丙基醇基柱，正相柱，极性强的物质后出。硅胶柱子的特点是可分离异构体，柱子的载样量大，用于制备分离，不污染收集的流分了，缺点是分析应用不方便，如流动相的含水量应该严格控制，再现性较差，需较长的平衡时间，不适用于梯度洗脱。碱性化合物在氨基和二醇柱上的保留强，而偶极化合物在腈基柱子上的保留强。建议您看看色谱分析等专业书籍有帮助的。ODS-AODS-A 液相色谱柱是国际上是销售最好的一种传统色谱柱，同时也是HPLC中应用最广泛的应用。YMCODS-A液相色谱采用高度封端的表面结构和具有适当的疏水性，广泛地应用于多种化合物的分离。在严格质量控制体系下
12、，对50 个以上的参数进行严格控制，保证了稳定的质量。其通常作为液相色谱标准柱。ODS-AMODS-AM液相色谱柱是一种高碳含量的C18柱，具有和ODS-A液相色谱柱相似的选择性。二者的主要区别是 ODS-AM液相色谱柱采用的是专利的封端技术，采用十分严格的生产技术规范，可提供优良的峰对称性和更高分离效果的重现性，从而改善较难分离组分的峰形。ODS-AQODS-AQ液相色谱填料具有中等强度的疏水性和氢键键合相色谱填料，由于其具有相对高的疏水性，其与 ODS-A相比有不同的保留行为，其主要用于碳水化合物的分离，如寡聚多糖类、葡萄糖苷类、药物和天然化合物的分离。ODS-ALODS-AL 液相色谱柱
13、不仅具有疏水基团的相互作用，而且还具备由硅醇基产生的第二级相互作用，这使其与传统的ODS不同的选择性。 当离子间相互作用被优化后，特别推荐用于流动相中含有缓冲液的色谱分离，可以获得高重现性的色谱图。YMC-PackODS-AL液相色谱柱采用的是没有封端的高碳含量单层C18 相，其只能在残存的硅醇基活性有利于色谱分离时使用，由于容易发生拖尾峰，不推荐在分析胺类或含碱性基团的化合物中使用。ODS H80, M80, L80ODS液相色谱填料是一种以硅胶为载体的三种配基覆盖率不同的ODS填料，不同配基覆盖率将影响馏出物中疏水组分的保留行为，馏出物的官能基团或三级结构将决定分离行为的结果。Jsphere ODS 液相色谱填料几乎不需要考虑疏水性和氢键键合相之间的相互作用，如离子或相互作用，其多用于分离条件的测定。色谱柱考虑的问题首先是填料的问题，大多数用于HPLC分离的柱填料使用硅胶填料，基于多孔聚合物担体与键和的有机表
