《液相色谱实验报告》由会员分享，可在线阅读，更多相关《液相色谱实验报告（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、华南师范大学实验陈述宇文皓月液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯一、实验目的1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法；2、了 解高效液相色谱的构造、原理及操纵技术。二、实验原理高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记 录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品 溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶 液中的各组分在两相中具有分歧的分配系数，在两相中作相对运 动，经过反复多次的吸附解吸的分配过程，各组分在移动速度 上发生较大的不同，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检 测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。三、主要仪器和试剂主要仪器：岛津液相
2、色谱仪(LC-10AT)配有紫外检测器，Phenomenex ODS 柱；10uL 微量注射器试剂：苯尺度溶液：10.0L/mL ；甲苯尺度溶液：10.0uL/mL；苯、甲苯混合尺度溶液：10.0uL/mL ； 甲醇：80% ；苯和甲苯混合待测溶液；四、实验步调1、尺度溶液的配制系列用100L的微量注射器分别量取10L、20L、50L、100UL的苯和甲苯的混合尺度溶液(10.0L/mL)，再分别加入 90L、80L、50uL、0uL甲醇将其稀释，作为待测液，其浓 度分别为 1 uL/mL、2 uL/mL、5 uL/mL、10 uL/mL2、色谱条件优化 按操纵规程开机，并调好色谱条件，使仪器
3、处于工作状态。控制流动相流速为甲醇：0.8mL/min、水：0.2 mL/min；柱温 30C ；检测波长254nm；观察记录保存时间，通过软件分析两峰 分离效果。 改变色谱条件，控制流动相流速为甲醇：0.95mL/min、水：0.05 mL/min；柱温30C；检测波长254nm；观察记录保存时 间，通过软件分析两峰分离效果。 通过观察两种色谱条件下的峰分离效果，选择最佳的色谱 条件。若还不克不及达到最佳的分离效果，可以再设定分歧的色 谱条件，然后根据峰分离效果，选择最佳的色谱条件。3、苯、甲苯定性分析在最佳条件下，待基线走稳后，用10L微量注射器分别进 样5L苯和甲苯混合待测溶液，5 uL
4、苯尺度溶液(10.0L/mL)和5uL甲苯尺度溶液(10.0uL/mL)(微量注射 器用甲醇润洗35遍)，观察并记录色谱图上显示的保存时间， 确定苯和甲苯的峰。4、苯、甲苯定量分析最佳条件下，待基线走稳后，用10uL微量注射器分别进样1.0uL/mL、2.0uL/mL、4.0uL/mL、10.0uL/mL 的苯和甲苯 混合尺度溶液5 uL。观察并记录各色谱图上的保存时间和峰面 积。绘制苯和甲苯混合尺度溶液峰面积与相应浓度的尺度曲 线。5、苯和甲苯混合待测溶液分析最佳条件下，待基线走稳后，用10uL微量注射器进样苯和 甲苯混合待测液5 uL，观察并记录各色谱图上的保存时间和峰面积。根据峰面积在工
5、作曲线上查出苯和甲苯待测液的浓度，并计算试样中苯和甲苯的含量。五、实验数据及分析高效液相色谱数据陈述一、色谱条件优化定性分析三、定样品苯甲苯量分保存时间3.7654.917析苯、甲苯混合尺度溶液浓度分别为：1 ul/ml,2 ul/ml, 51 ul/ml2126851 ul/ml3877102 ul/ml4292912 ul/ml7479835 ul/ml9545375 ul/ml153389210 ul/ml190534310 ul/ml2928373Y = aX + bY = aX + ba = 186510.8a = 278490.9b = 36165.15b = 146280.5R2
6、 = 0.9995768R“2 = 0.9991048R = 0.9995523R = 0.9997884四、 未知样品浓度未知样品浓度2苯2.7ul/ml甲苯3.6ul/ml浓度12.9 ul/ml3.6ul/ml六、 实验讨论 由于实验中待测溶液的组分只有苯和甲苯两种物质，组分比较简单，只要在实验过程中，严格控制且定量进样，就能采取 操纵、计算简便的尺度曲线法得出准确的实验结果，因而采取尺 度曲线法。若采取归一化法或内标法，虽然能得到准确更高的实 验结果，但由于实验操纵及计算均较为复杂，实验及数据处理的 时间长，效率相对不高，故实验中采取尺度曲线法作为定量的方 法。 最佳色谱条件的选择是本实验准确度的关键。若苯与甲苯的峰分离效果过小，苯与甲苯的峰未能完全分离，肯定影响其保存时间和峰面积的计算，是实验准确度减小，数据误差加大；若 苯与甲苯的峰分离效果过好，虽然能将苯与甲苯的峰完全分离， 实验准确度好，但是耗费的实验时间较长，效率欠好。因而，应 选择合适的色谱条件。 为了提高尺度曲线的拟合度，可以重复进样多次，而且由 同一人进样，以免因个体习惯分歧引起实验误差。进样针进样时 确保进样针中没有残留气泡，另外，在进分歧浓度或分歧的物质 前因先用乙醇溶液润洗干净，以免相互影响。
