《CF系列免疫荧光染料选择方案》由会员分享，可在线阅读，更多相关《CF系列免疫荧光染料选择方案（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、常用抗体标记荧光染料的选择随着免疫荧光技术的不断进展，荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学试验中。目前，市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有 CFTM 系列(BIOTIUM, USA); Alexa Fluor系列 (Life technology, USA); DyLight 系列; Cy 系列; IR Dye 系列等等。使用最多的为 Alexa Fluor系列和 CFTM 系列。CFTM 系列染料的核心比照 Alexa Fluor系列具有以下几点优势：1. 型罗丹明核心罗丹明染料以优异的耐光性和良好的荧光量子产量著称。因此很多Alexa Fluor 染料具有罗丹明核心构造，但
2、是，传统罗丹明的化学构造很难从长波长的荧光染料延长至远红外区域 甚至是更具挑战性的近红外区域，而且生物偶联后其水溶性并不抱负。Biotium 科学家觉察从绿色到近红外多色荧光的罗丹明染料的型化学方法。该方法被有效的应用于CF染料的产 品中，尤其是远红外CF染料，而且通过这种方法制备的染料不仅水溶性极佳而且耐光性极好。如：(以以下图)图 3. CF 系列染料的稳定性，图示为 CF633 在 5min 中照旧具有稳定的荧光强度；而 AF647 Dye 在 1min 左右已经淬灭。2. 特异性高的近红外染料近红外染料最大的特点是比可见光范围要大很多，大滴的染料常会导致染料水溶性低、染料 聚合体多、荧
3、光量子产量差等问题。为了解决这些问题，很多商用的近红外染料比方Alexa Fluor、 DyLight dyes 和 IRDyes 近红外染料，在制备时吸附了大量的带负电荷的磺化基团，其磺化作用可以在确定程度上会提高染料的溶解性和荧光性，但这样也带来了另一些 更加严峻的问题，经这种染料标记的生物耦联物的非特异性结合。例如：与大量负电荷结合后可以显著的转变抗体的等电点，进而影响抗原抗体的特异性结合反响。综合以上内容， Biotium 的科学家用革命性的方法设计出近红外染料C F，在避开引入大量负电荷的状况下， 极大的保证了染料优异的理化特性。Biotium 近红外的CF 染料以花青或罗丹明染料为
4、核心构造，该核心构造的特别化学修饰限制了染料的分子内位移，从而获得染料的高量子产率和 更好的水溶性。因此，近红外CF染料比其他近红外染料荧光强度更高，光稳定性好。最重要的是，在免疫印迹试验上应用近红外CF染料标记蛋白质样品相对于其他商业用近红外染料制 备的抗体偶联物，最大限度的提高了信噪比。(见以以下图)图 2. AF 染料(左图)构造中含有大量的磺化基团 SO3-来增加染料的水溶性，但大量磺化基团的引入会使染料带大量负电荷，在标记蛋白和抗体时，简洁非特异性吸附带正电荷的蛋白和抗体基团。 而 CF 系列染料(右图)是经过型改造过的染料，不会存在上述状况，而且染料的水溶性极好。图 4. CF 染
5、料的超强特异性；由于 AF 染料制备过程中含有大量带负电的磺化基团，简洁非特异性结合正电基团，请看 AF790 Dye 与 CF790 的条带特异性比照。3. 优异的标记效率生物偶联后的活性染料一般很简洁水解，会在运输，操作及储存中带来诸多不便，最终致染料结合效率低下。像 Alexa Fluor dyes,DyLight dyes and IRDyes等严峻的磺化作用有较强的吸湿性，恶化水解作用等问题。例如： AlexaFluor 488 在应用时琥珀酰亚胺脂酯 SE 活性局部远低于 50%AlexaFluor488 微量标记试剂盒产品信息，Invitrogen。相反，全部 Biotium的
6、CF 染料具有相对稳定的胺活性的 SE 基团型，这比大局部 AlexaFluor 染料的 SE 更耐水解。总体来说，CF 染料 SE 产品一贯的给出更高的标记效率，供给应用户更好的使用价值。选择方案：蓝色350-450nm 处激发CF 350 、Alexa Fluor 350、AMCA 等亮蓝和紫外光激发CF350 是类似于 Alexa Fluor 350 和传统荧光染料 AMCA 的蓝色荧光染料，CF350 的荧光强度高于 Alexa Fluor 350、AMCA , 吸附在蛋白上的荧光超过 50%, 水溶性更好, 耐光性格外优秀亮, 更简洁与现有的绿色荧光基团区分。 CF 405S/ CF
7、 405 M、Alexa Fluor 405 近乎完善的匹配蓝色二极管激光器CF 405S/ CF 405 M 、Alexa Fluor 405 与近来使用的荧光显微镜和流式细胞仪 405nm; 谱线的蓝色二极管激光器完善的匹配。在流式细胞仪上的分析结果显示 CF 405S/ CF 405 M 荧光信号强度高于 Alexa Fluor 405 染料 1.7 倍。绿色488nm 处激发CF 488A 、Alexa Fluor 488 、FITC、FAM、DyLight 488、Cy2 等-针对 488nm 氩离子激光器的绿色荧光染料；以上染料其标记的抗体蛋白适用于全部配备 488nm 氩离子激光
8、器的流式细胞仪；流式细胞仪的 FL1 通道检测；或者可用于荧光显微镜技术；CF 488A 最低限度的带电量降低了与抗体耦联物的非特异性结合；在红色通道溢出少于 Alexa Fluor 488； 耐光性好； 水溶性好 和 pH 不敏感； 良好的稳定性和活性染料的标记率。Alexa Fluor 488 在较宽的 PH 值范围内保持稳定PH410；FITC 激发波长 488nm，最大放射波长 525nm；缺点荧光强度易受 PH 值影响，PH 值降低时其荧光强度减弱。橙红色543-555nm 处激发 CF 543、Alexa Fluor 546、ATTO550, Cy 3, DyLight 549,
9、Rhodamine (TRITC) 匹配 543nm的橙色荧光染料；CF 543 荧光条带光明，耐光，水溶性好，确保了CF 543 染料与抗体的耦联物保持优异的水溶性，为该波段最亮的橙色荧光染料。例如：同等的标记程度下，CF 543 标记的羊抗鼠IgG抗体的亮度高于用Alexa Fluor 546 标记的210倍。 CF 555、Alexa Fluor 555、Tetramethylrhodamine (TAMRA) 等匹配 Cy3 滤光片的橙色荧光染料；红色568-594nm 处激发 CF 568、Alexa Fluor 568, ATTO 565, Rhodamine Red 等 568n
10、m 处红色荧光染料；CF 568染料耐光性最好； 高效水溶性； 比Alexa Fluor 568 标记的抗体亮度更亮； CF 594、Alexa Fluor 594, ATTO 594, DyLight 594, Texas Red等最亮红色荧光染料；CF 594由于其高量子产量和优异的水溶性而比AlexaFluor 594 光明24倍。同时CF594 对光极其稳定，使它能被抱负地应用于诸如共聚焦显微镜和单分子显像条件苛刻的应用中去。远红外620-660nm 处激发 CF 620R、LightCycler Red 640 等 620nm 处；CF 620R 是以红色荧光染料罗假设丹rhodam
11、ine为根底的远红外的荧光染料， 该染料有高荧光亮度和极度的耐光性。它的吸取和放射光谱为617 和639nm，该染料能被用于荧光能量共振转移中高能量的接收者，或者在激发和放射窗口能和该染料的光谱特性匹配的条件下，被应用于多色检测中的最高荧光量采集。染料的卓越的水溶性有利于生物耦合在水介质中，更好的保持耦联物的生物特异性结合。 CF 633、Alexa Fluor 633, Alexa Fluor647, Cy 5, DyLight 633, DyLight 649 等633/635nm 激光线的最正确染料荧光染料；CF 633染料的优点：当被633 nm 氦氖激光或635 nm 红色二极管激光
12、激发时，产生最亮的抗体耦联物；光稳定性远高于Alexa Fluor 647；高效的水溶性 CF 640、Alexa Fluor 647, ATTO 647N, Cy5, DyLight649 等远红外荧光染料；CF 640R 的优点：以红色染料罗丹明rhodamine为根底，吸取和放射峰类似Cy 5、Alexa Fluor 647；但以罗丹明rhodamine为根底的红色染料CF 640R它最大的优点就是对光稳定性，Cy 5 和 Alexa Fluor 647 以花青素为根底，因此有着和花青素一样的特点即耐光性较差。极好的亮度和耐光性使CF 640R 被抱负的用于共聚焦显微镜和单分子成像等条件
13、苛刻的检测中。 CF 647、Alexa Fluor 647, ATTO 647N, DyLight649 等远红外荧光染料；以花青素为根底的远红外荧光染料 CF 647 比 Cy 5、Alexa Fluor 647 光明。 CF 660、Alexa Fluor 660, Allophycocyanin (APC)等介于远红外近红外之间的荧光染料；近红外680-790nm 处激发 CF 680R/ 680、Alexa Fluor 680, Cy 5.5, IR Dye 680 等近红外荧光染料；CF 680 是高水溶性的以花青素为根底的染料，分子量大约为3000。该染料标记抗体极佳，发出最亮的
14、荧光和在免疫染色光谱相像的染料中产生最高的信噪比。CF 680R 分子量约为900，更适合标记核酸或者相对小的生物分子。CF 680R 是型的以罗丹明rhodamine为根底的高荧光亮度, 极度耐光性染料，这使它可被抱负地用于共聚焦显微镜，单分子成像等条件要求苛刻的应用中。 CF 750、CF770 and CF790 等近红外荧光染料；CF 750、CF 770、CF 790 是领域内真正具有突破性的长波长的型染料代表。其他近红外染由于受到染料聚拢和稳定性差等因素的影响而导致荧光亮度有限。基于Biotium 科学家研制的型分子工程技术，近红外CF 染料抑制了这些问题。即使在633 nm 被激发，CF 750 也会比APC-AlexaFluor 750 拥有足够的亮度来在流式细胞仪检测中带来更好的信噪比，而且不存在串联染料的低稳定性等问题。另外， 近红外CF 染料高度水溶性，没有会增加抗体耦联物非特异性结合的过剩的负电荷， 也代表了该产品的优秀性能。
