常用C18柱性能介绍

《常用C18柱性能介绍》由会员分享，可在线阅读，更多相关《常用C18柱性能介绍（18页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、常用C18柱性能介绍常用C佃色谱柱不同特性及聚合物包被型色谱柱的介绍资生堂（中国）1遴有隈公司先却学事业推站大家好。我是资生堂先端科学事业推进部的城田？修。今天为大家 讲解的第一个主题是“常用 C18 色谱柱不同特性及聚合物包被型色谱 柱的介绍”。因为只要是能够溶解在溶剂中的物质都可以成为分析对象，所以 液相色谱可以广泛应用在各个领域。液相色谱中使用 C18 柱的反相色谱法以生物体相关物质为分析对 象，能够满足主要研究领域的需要，使用最为广泛。现在，市场上出售的 C18 柱品牌繁多，约有数百种。在此，向大 家介绍多种C 18柱共存的原因以及从中选择符合分析目的商品的一些 技巧。此主题相关图片如

2、下1-2.jpg :SilicaSilica使用硅墟偶OJfSilgQg Coupler）导入:基团看懊简何击场上有数百种商昵存在.C18填料制法如下。将具有烷基链的硅烷化剂与硅胶表面的硅醇 基反应。因为使用了共价键和的方式将烷基链紧紧固定在硅胶表面，所以 烷基链不会被流动相冲洗掉，作为色谱固定相稳定发挥着作用。这张图描述的 C18 填料的合成过程看似简单，但实际上固相与液 相之间的反应比液相之间的反应更难控制。与一般化学品相比，对色谱填料再现性的要求也会高很多。如果 实际使用的原料和反应条件稍有差别，最终产品的分离特性将会有很 大改变。这种变化，随目的不同或者成为缺点，或者也可能成为优点。

3、但是，如果不具有良好再现性，在实际应用中就不能被采用。 这样，在市场上就出现了数百种具有不同分离选择特性的 C18 色 谱柱。此主题相关图片如下1-3.jpg :填料的合成P虽握赴理:囂it 忍I人才：w心鸞红现J：:h=:.:h= ： ：=：h=：h=：E：h=：h:p 擀赛：.：!=；：=：=：!麟制:髓饕.:h=：h=：h *： .S： hh hh 也淀探疫建艇茫拮:h=:畦胶匚二Gw基结台軽:产品OH OH OH OH-Si-lJ-Si-O-Si-O-Si-OH-R1,11Me-GHWhOH O OH OHIlli-Si-O-Si-O-S i-O-Si-OHI I I I关于填料的合成

4、进一步详细说明。市场上的商品大多分为两个步 骤进行合成。首先，如刚才介绍的，将C18基团导入到硅胶表面。接下来进行第二步反应，将小分子试剂导入到第一步残留的硅醇 基上，此过程被称为封尾。通过封尾，尽可能地减少原料硅胶的影响，确保与硅胶表面有较 强相互作用的化合物的分离效果。另外，通过此步骤，能够比较容易的确保产品性能的再现性。 不受原料硅胶自身特性影响，提供性能稳定的商品是厂家永恒的 课题。另外，最近作为硅胶的替代物，含有机物的原料也在商品化并在 出售，但是，这样的原料还没有超过硅胶，大半的商品仍然是以硅胶 为原料。此主题相关图片如下1-4.jpg :C佃键合固定相差别化原因-原料硅胶的化学性

5、质，几何性质的不同-使用硅烷偶联剂的种类反应条件-二次化学处理法的不同井且-采用含碳硅胶(hybrid)C18 键合型填料差别化的主要原因如下。原料硅胶不仅在细孔径、粒径、表面积等几何学性质上有差别， 而且其化学性质也有不同。关于这一点将在之后进一步说明。另外，与烷基反应的硅醇基也有一官能性，二官能性和三官能性 之分。并且，随反应条件不同，产品的最终性质也会有显著差别。之前介绍的最终步骤中进行的封尾反应就有各种方法被报导。并 且，最近杂化型硅胶商品也出现了。此主题相关图片如下1-5.jpg :HFH60 V-O-Sj-0-Si-O-那-和0-& Q-孤立型曲基绵合型蘑基IsolatedVici

6、nal残留辞醇基的种类和14廣双生型iw基硅胶表面存在的硅醇基分为孤立型、缔合性和双生型三种形式。这三种形式硅醇基的分布情况随硅胶生产条件有明显不同。此主题相关图片如下1-6.jpg :IISilica的筠Si-NMR谱图例256-25 -50-75_-li-1S5 f通过测量29Si的固体核磁共振信号可以了解硅胶表面硅醇基的状 态，但是，这种间接的数据无法预测最终产品具有怎样的分离特性，只有通过 试制的产品来进行测试。此主题相关图片如下1-7.jpg :体现C8键合硅胶性能的项目 二的性能从厂家信颤认 -理论塔板数 压力耐久性-柱间再现性-化合物全悴保留能力大小扱性（碱性化含牺的雄形配位化合

7、物的嵯形使用LC-MS观鷄到的色谱柱流失最重要的项目试用时确认）目标物质与夬存物质的分离（对目标分离的选择性）那么，该如何评价品目繁多的C18填料的性能呢？我们认为C18填料的性能主要表现为以下两个方面。第一方面，是在此列举的理论塔板数、压力、耐久性、再现性、 保留能力、碱性及配位化合物的峰形。此外，仍然是比较新的概念,LC-MS上使用时的背景噪音水平， 也就是所谓的柱流失级别。这些指标可以对产品好坏进行定量评价，而且，也可以由此判断 价格是否合理。第二方面是色谱柱是否符合目标分离的要求，可以说 这是最重要的指标。为了进行判断，必须使用色谱柱来进行典型样品 的实际分析。也不一定是高价高品质色谱

8、柱就一定适用于目标物质的分析。接下来，通过实例对第一方面的更具客观性的指标进行说明。使用棊(中囊辖藪*进背理沦塔板数靂压为的比较柱尺寸：2.0 (or 2.1) mm Ld- x 50 mm相速度测量品 动 样 流流温检进样:H2O/CH3OH=40/60:200 |jL/min:40 r1* 加测 5 Miithvrlf 口rrpVl吧:沪崛4W Ill-FLJII甲!4十.峠吟由一Ia Ji说3k 4k 3aH - daUMn尸 G!.m邑1n 这里列举的是卡赛帕克 MG 系列的认证单，同出厂检验色谱图 起作为色谱柱的附件，上面详细记载了产品规格和填料批次等信息。 使用同一批次填料制造的所

9、有色谱柱都具有相同的特性。商品附有的 文件随公司不同形式不同，但是是否具有附件可以成为判断该公司能 否提供具有稳定品质商品的一个依据此主题相关图片如下1-15.jpg :通过抑制柱流失来提高LC-MS灵敏度(M.W. 471 .31)Total Ion Chromatograms伽測 Pak C18 MG III 分析例Cdi-mn size: 2.0 rtm id 冀 30 nmMahh 由叱：AjU.1HCCCHBj dj.CN日 10 K (Onin) - 100 K (5JtJ min) - 1 K (8.0 mn)-10 K (8.1 rnirj GradaitAaw rate: 2

10、OT pLminfeEErEurr : 40 七EL=tton : M5 E Paativehj. Vs! ： 2 riL6Bmlr| |廿ojoI上d im 州亡115引 “口 良应!.!)随着LC-MS的普及，对LC色谱柱的要求也随之提高。质谱仪是 检测具有特定分子量化合物的高选择性检测器，同时也是能够检测所 有物质的通用型检测器。在离子化室中，包括流动相溶剂在内的所有 物质全部进行离子化。梯度分析中，如果监测总离子流，就像在气相 色谱中观察到的一样，可以得到来源于色谱柱的物质的色谱图。这些 来源于色谱柱的物质被称作柱流失。柱流失物质中如果含有与分析对 象分子量相近的成分，就会妨害目标物质的检测。不仅如此，柱流失 强度大时，目标物的信号强度本身也会受到影响，因为在离子化过程 中，由于杂质的影响，目标物的离子化效率会受到影响。这种影响在 目标物浓度较低时更为显著。从幻灯片中的分析例可以看出特非那定的峰强度随着色谱柱不同变化很大。因此，高灵敏度LC-MS分