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1、蝴蝶兰的组织培养研究蝴蝶兰的组织培养研究【摘要】自古以来，人们都有发现美、欣赏美的艺术追求。花卉等具有“美”的特质的植物理所当然的成为了养殖、欣赏的对象。在几十年以前，我国人民尚徘徊在生存的边缘，无暇追求美丽事物，随着我国社会经济的发展，人们生活水平的也逐渐提升，人们越来越重视生活中的美。花卉作为人们欣赏美的载体，不论是各类庆典、宴会，还是环境绿化建设等都是不可或缺的。蝴蝶兰的花形奇特，类似蝴蝶，色彩艳丽鲜明，花期持久，是最适合作为观赏植物的花种之一。【关键词】蝴蝶兰组织培养培育材料培育方法激素配方蝴蝶兰具有极高的观赏价值和经济价值，是当今国际上商业价值最大的热带兰花之一。但因为蝴蝶兰属于单茎
2、性气生兰，其再生能力不强，因此要进行分株繁殖显得异常困难。蝴蝶兰的种子十分细小，在一般的自然条件下很难发芽，这也导致其增殖系数极低。虽然其有较高的观赏价值，但是因为不易养殖，所以在市场上的蝴蝶兰显得极为珍贵。为了提高蝴蝶兰的繁殖力，相关的专家人员利用组织培养法进行蝴蝶兰的快速繁殖，并取得了成功。蝴蝶兰的组织培养程序为：选取外植体一一诱导形成不定芽一一增殖不定芽一一分化小植株一一生根壮苗培养一一温室移栽。这整个程序都是根据蝴蝶兰的生长习性而设计的，对蝴蝶兰的培育有着显著效果，解决了以前在蝴蝶兰工厂化快速繁殖中遇到的技术问题，增加了蝴蝶兰的成活率。本文就蝴蝶兰的组培方案进行了分析，首先阐述了蝴蝶兰
3、组织培育中必须要准备的材料，然后阐述了蝴蝶兰组织培育的方法。期望通过本文的分析，能够让读者对蝴蝶兰的组培方案有更加深刻的认识。1蝴蝶兰组织培育中必须要准备的材料在蝴蝶兰组织培育中可以作为外植体的有蝴蝶兰的嫩茎、花梗、叶片、茎段、茎尖等。必须要确保所取外植体的原蝴蝶兰没有虫害、没有病害，生长状态要极好。本文所选蝴蝶兰是白瓣红唇蝴蝶兰。若取花梗作为材料，则要剪去上端无须的花梗，剪成长度为五至十厘米的小段。若取叶片为材料，则要先取花梗进行诱导，当获得蝴蝶兰无菌苗后，待其成长为2叶苗时，再取其叶片或是茎尖作为培育材料。2蝴蝶兰组织培育的方法2.1不同外植体的消毒不同外植体的消毒可分为三个步骤，下面就对
4、这三个步骤进行仔细分析。（1）第一步：在取得蝴蝶兰的培育材料以后，需要先对其进行清理，去除多余的部分，将主要的部分清洗干净。然后将材料剪成适当大小，以能放入灭菌容器中的大小为宜。将剪好的培育材料放在水龙头下冲洗，冲洗的时间要根据材料的清洁程度而定，可能是几分钟，也可能是几小时。在污染严重的情况下，流水清洗是最有效的清洁方式。在清洗的过程中，可以适当加入少量的洗衣粉，洗衣粉能够很容易的去除附着在材料上的污物，尤其是脂质性的污物。再用自来水将洗衣粉水清洗干净。为了使清洗的效果更好，还可以适当的加入表面活性物质一一“吐温”。（2）第二步：培育材料的表面浸润灭菌。首先要准备好灭菌的器械，比如玻璃棒、烧
5、杯、无菌水、70%精、消毒液等等。先在烧杯中倒入消毒溶液，并加几滴消毒助剂Tween-80,在消毒的过程中要不断的用玻璃棒进行轻轻搅动，这样有助于消毒液与培育材料的充分接触，能够驱除气泡，使消毒更为彻底。在设计的消毒时间结束之前的一到两分钟，就可以将消毒液慢慢倾入另一个烧杯，切记不要将材料也倒入另一个烧杯。在消毒液倒完以后，立即注入无菌水进行涮洗，涮洗结束以后，再用自来水冲洗3060min。接着在超净工作台上，将已经切割好的材料用准备好的酒精清洗半分钟时间，再用无菌水进行冲洗，完成以后，如果所取材料是叶片，则将其放入0.1%HgCI溶液中浸泡八到十二分钟左右的时间，再用无菌水冲洗五到八次；如果
6、所取材料是花梗，则将其放入0.1%HgCI溶液中浸泡十到二十分钟，再使用无菌水冲洗三到五次。（3）第三步：使用无菌水涮洗。无菌水涮洗的主要目的是免除消毒剂对材料细胞的副作用，在使用无菌水涮洗的过程中，必须要坚持涮洗五到十次，每次清洗都要确保持续时间在30s以上。其中必须要注意的几点：1）在酒精中浸泡的时间要短，避免因浸泡过久导致材料失绿；2）对于老熟材料，比如种子等，要在酒精中浸泡久一点；3）升汞的渗透力较弱，可以多浸泡一些时间；4）在消毒液中加入浓度在0.08%012应间的Tween-20或是Tween-80,能够降低植物材料表面的张力，使消毒效果更加明显。2.2培养基激素配方初代培养的目的
7、是为了诱导类不定芽（PLB或丛生芽，基本培养基为2/3MS培养基。在培养基中均要加入蔗糖、琼脂、碳粉等，蔗糖的加入量为20mg.L-1，琼脂的加入量为5mg.L-1，碳粉的加入量为AC1.0mg.L-1。接种之后，将其放入暗培养室2530小时，再改为光照培养，此时温度应该控制在2325c之间，日光灯照明的强度为2000Lux,光照时间设定为10h/d。其具体配方如下表1所示。一般情况下，30小时以后，就会分化出新芽。在30小时以后，再开始统计，选择出分化最好的培养基。2.3不定芽增殖将花梗初代培养萌发的不定芽切下，转接到增殖培养基上，如表2所示。每隔4050天就继代增殖一次，次数不宜超过15次
8、,随着继代增殖次数的增加，6-BA的浓度也随着降低。在接种的过程中，要确保材料不受到伤害。培养室的温度要控制在2428c之间，光照强度要控制在19002100Lux之间，光照时间以10h/d最合适。培养基的附加材料与基本培养基一致。2.4生根在生根培养期间，其温度要控制在2428C,光照强度要设置在400010000Lux,时间要设置为12h/d。若是直接利用太阳散射光也可以。当芽生长到有两三片叶子，叶长有一到两厘米时，此时可将芽单个分开，按大小分级接种到生根培养基中。2.5炼苗移栽当苗长至23cmi有13根条卞和34片叶子时，便可进行炼苗。先取掉瓶盖，将其置于常温室内的散射光下，炼苗六天左右
9、，然后再取出试管苗，将其附着的琼脂清洗干净，放入1000倍的多菌灵溶液中浸泡20s,再取出晾干，接着将其栽到不同的基质中。基质可以使用水苔、树皮块以及水苔和蕨根按1：1配合这三种。在移栽以前，必须要对基质进行消毒处理。具体的管理方法宜采用温室内小拱棚的方式。首先是环境设计，必须要将拱棚内的温度控制在1828c之间，棚内必须要有太阳散射光，光照强度为50008000Lux其次是管理方面，移栽以后，每天都要对其进行喷雾浇水两次左右，前两周时间，要将湿度控制在80%-90尤间，后面几周要将湿度保持在70%-80%瓶苗质量的要求必须做到：根系粗壮、品种纯正、无污染、不徒长、变异率小于5%。见表3。表3
10、瓶苗质量分级3结语总而言之，蝴蝶兰组织培育方式是当前最为有效的培育方式，虽然其中还有很多方面需要完善，但是只要通过试验和努力，必定会将该方法打造得更加完美和可行。参考文献：1王玲，陈发棣，陈凤等.蝴蝶兰花梗芽的初代诱导J.江苏农业科学，2021，40（12）：68-71.2杨华庚.高温胁迫对蝴蝶兰幼苗叶绿素及其荧光参数的影响J.中国农学通报，2021，28（19）：177-183.3刘学庆，孙纪霞，丁朋松等.低温胁迫对蝴蝶兰内源激素的影响J.江西农业大学学报，2021，34（3）：464-469.4蒋瑞萍，李苹，徐培智等.花卉缓/控释复合肥对盆栽蝴蝶兰生长发育及其观赏性的影响J.中国农学通报，2021，28（19）：184-188.5王玲，陈发棣，陈凤等.不同培养基及不同添加物对蝴蝶兰花梗芽增殖生长的影响J.江苏农业科学，2021,41（1）:56-57,103.作者简介：张海波（1980）,男，内蒙古赤峰人，工程师，主要从事三峡珍稀濒危野生植物繁育与保护方面的研究工作。
