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1、HPLC测定乳制品中三聚氰胺含量奶粉中三聚氰胺含量测定 摘 要：在三聚氰胺的检测中采取沉淀剂沉淀、微波超声、离心分离相结合的方法提取，用高效液相色谱法测定，再用保留时间定性，外标法定量。该方法能有效的排除乳制品中蛋白质、脂肪等大分子物质和其它含氮物质对检测的影响，最低检测限为/kg,回收率为%之间，所以能普及到乳制品的检验检测中。关键词：HPLC；乳制品；三聚氰胺三聚氰胺 是一个主要的氮杂环有机化工原料，为白色或无色结晶，通常见于塑料制品中合成树脂的生产，部分亚洲国家也用来制造化肥。三聚氰胺含氮量为%，是蛋白质平均含量的倍，牛奶的151倍，奶粉的23倍。每100g牛奶中添加克三聚氰胺，就能提升
2、%含氮量，所以三聚氰胺也被人称为蛋白精。食品工业一向通用的蛋白质测试方法为凯氏定氮法，经过测定总氮来估算蛋白质含量。这种方法只能知道氮的总量，不能识别氮的和氮源的种类，正是因为食品和饲料工业蛋白质含量测试方法的缺点，给不法商人留下了制造伪劣食品的空间，出现了奶粉三聚氰胺事件，包括面之广，性质之恶劣，危害之大到了令人发指的地步。检测三聚氰胺的方法关键有高效液相色谱法、气相色谱-质谱联使用方法、ELISA试剂盒法、毛细管电泳法、近红外线吸收检测法等，而高效液相色谱法是一个最普遍而相对简便的方法。经过探索，结合沉淀剂沉淀、微波超声、离心分离方法，建立一个应用高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的方法，
3、其检测达成了很好的效果。1 材料和方法材料和试剂奶粉、纯牛奶、核桃花生奶、麦香奶、酸牛乳 抽取的检验样品三聚氰胺、辛烷磺酸钠、乙腈、三氯乙酸、乙酸铅、柠檬酸、甲醇中国计量科学研究院、国药集团化学试剂有限企业、天津市科密欧化学试剂有限企业。仪器和设备美国SIII高效液相色谱仪 美国 SSI企业；型电子天平 沈阳龙腾电子有限企业；TG16-WS型台式高速离心机 湖南湘仪试验仪器开发有限企业；BH3300H型超声波清洗器 上海新苗医疗器械制造有限企业 ；UPT-20T型超纯水机 成全部超纯科技有限企业。方法色谱条件和参数色谱柱：Luna 5u-C8 100A； 流动相：离子对缓冲液-乙腈，混匀；流速
4、：/min；柱温：40；进样量：50%el；检测器：紫外检测器；检测波长240nm；灵敏度。标准曲线绘制正确称取100mg三聚氰胺标准品于100ml容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为/ml的标准贮备液，于4避光保留。用流动相将三聚氰胺贮备液逐层稀释到浓度为、2、20、40、80%eg/ml的标准工作液，经%em 滤膜过滤后由浓度低到高分别取50%eL 注入色谱仪进行检测，测定峰面积，以峰面积对浓度作标准曲线。样品处理及测定称取5g固体样品或20g液体样品于比色管中，加入2ml 乙酸铅溶液用三氯乙酸溶液定容至50ml刻度。微波超声提取20min,移入离心管中，10000r/mi
5、n离心5min,吸收上清液，用%em的微孔滤膜过滤，滤液待上机使用。取 50%eL注入色谱仪中 ,测定峰面积，依据保留时间定性，外标峰面积定量。结果计算试样中三聚氰胺的含量按式进行计算：X=譮式中：X -试样中三聚氰胺含量，单位为毫克每千克；A -试样溶液中三聚氰胺的峰面积；A, -标准溶液中三聚氰胺的峰面积；C -标准溶液中三聚氰胺的浓度，单位为微克每毫升；V -试样最终定容体积，单位为毫升 ；m -试样的质量，单位为克；f -稀释倍数。2 结果和分析前处理分析乳制品中的蛋白质等部分有机大分子物质，分子大、不溶于水，在过滤中轻易堵塞滤膜，从而使得过滤时间长、处理效果不佳、色谱柱极易被堵塞。试
6、验证实加入沉淀剂、微波超声、高速离心能够使检测结果愈加正确而且极大的缩短了过滤时间，这对高效的完成检验检测工作含有主要的意义。由表1可得只有加入沉淀剂、微波超声、高速离心相结合时才能达成最好的处理效果。表1：不一样前处理后过滤2ml分析液的时间Table 1：The consuming time of obtaining 2 mL filtrate with different pretreatments检出限以样品被测组分峰高为基线噪音3 倍时的浓度为最低检出浓度，三聚氰胺的检出限为/kg。加标回收率试验四种样品不一样浓度加标三聚氰胺的回收率为% ，表2充足的说明了加标回收率范围。样品测定分
7、析奶粉中加入三聚氰胺的现象相对比较多，试验中选择了一加入三聚氰胺的奶粉，图1是奶粉中检测出三聚氰胺的谱图，对该样品做加标回收其检测的加标回收率为%，完全符合最好的加标回收率范围。同时对该样品在前处理的过程中用固相萃取柱进行洗涤、洗脱、净化后检测，而且和高一级的试验室中气相色谱-质谱联使用方法进行了比对，其检测结果和以上检测结果一样。能够充足说明检测的效果良好，能够全方面的应用到试验室检验检测中。3 结 论本文建立了一个简便、快速、高效的利用液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺，很好的排除了蛋白质、脂肪和其它含氮物质等原因的影响，简化了检验检测的复杂过程，使其检测技术轻易掌握，检测结果正确。在日常的检验检测工作中含有很强的实用性和高效性。
