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1、实验五 维生素C的含量测定一2,6-二氯酚靛酚法（3课时）一、目的1学习和掌握用 2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中抗坏血酸含量的原理与方法。2. 了解维生素C的生物学意义。二、原理维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常 的氧化还原电势和有关酶系统的活性。维生素 C 能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维 生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。水果和蔬菜是人体抗坏血酸的 主要来源。不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗 坏血酸含量。测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。2,6-二氯酚
2、靛酚是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。抗坏血酸具 有强还原性，能使 2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如下：OCl蓝 色）HO-OHCH2OH抗坏血酸OOOH2,6-二氯酚靛酚（红 色）还原型 2,6- 二氯酚靛酚 （无 色）H CHO*HCH2OH脱氢抗坏血酸当用 2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成 无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的 2,6-二氯酚靛酚立即使溶 液呈现红色。因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量 即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。三、实验材料、主要仪器和
3、试剂2.仪器（1）天平（2）组织捣碎机（3）容量瓶（50mL）（ 4 ）刻度吸管（ 5mL， 10mL）（ 5）锥形瓶（ 100mL）（ 6）碱式滴定管（ 10mL）3试剂（ 1 ） 2 草酸（ 2 ） 1 草酸（3）标准抗坏血酸溶液（O.lmg/mL）：精确称取lO.Omg抗坏血酸，用1%草酸溶液溶 解并定容至100mL。临用现配。（4）0.05%的2,6-二氯酚靛酚溶液：50mg 2,6-二氯酚靛酚溶于30mL含52mg碳酸氢钠 （A.R）的热水中，冷却后再用蒸馏水稀释至5 00mL，滤去不溶物，贮棕色瓶内，4C保存一周有效。滴定样品前用标准抗坏血酸标定。四、操作步骤1. 2,6-二氯酚靛
4、酚溶液的标定：准确吸取4.0mL抗坏血酸标准液（含0.4mg抗坏血酸） 于100mL锥形瓶中，加16mL 1%草酸溶液，用2,6-二氯酚靛酚滴至淡红色（15S内不褪色 即为终点）。记录所用染料溶液的体积（mL），计算出1mL染料溶液所能氧化抗坏血酸的量（mg）（记作 T）。2. 实验材料取新鲜水果（蔬菜。样品50g，加50ml 2%草酸溶液，用组织捣碎机打成匀浆。称取 10g匀浆，移入50mL容量瓶，用2%草酸定容至刻度，摇匀后静置备用3. 样品滴定：准确吸取样品提取液（上清液或滤液）两份，每份10.0mL，分别放入两 个100mL锥形瓶中，按上面的操作进行滴定并记录所用染料溶液体（mL）。五
5、、结果计算取两份样品滴定所用染料体积平均值，代入下式计算100g样品中还原型抗坏血酸的含 量：VXTXGXA抗坏血酸含量（mg/100 g样品）=X 100WX G1X A1式中：V滴定样品提取液消耗染料平均值（mL）T 每 mL 染料所能氧化抗坏血酸 mg 数G匀浆总重量（g）G1制备提取液取用匀浆重量（g）A样品提取液定容体积（mL）A滴定时吸取样品提取液体积（mL）W样品重量（g）六、附 注（1）样品提取液定容时若泡沫过多，可加几滴辛醇或丁醇消泡。（2）市售2,6-二氯酚靛酚质量不一，以标定0.4mg抗坏血酸消耗2mL左右的染料为宜， 可根据标定结果调整染料溶液浓度。（3）样品的提取液制
6、备和滴定过程，要避免阳光照射和与铜、铁器具接触，以免抗坏 血酸被破坏。(4) 滴定过程宜迅速，一般不超过2min。样品滴定消耗染料14mL为宜，如果超出 此范围，应增加或减少样品提取液用量。像番茄、柑桔等维生素C含量高的试材，可称取 5g样品，加少许2%草酸研磨，定容到50mL，再离心或过滤；吸取20mL两份，分别滴定, 记录消耗的染料量。按下式计算维生素C含量。VXTXA维生素C含量（mg/100 g样品WXA1X100式中：V滴定样品提取液消耗染料平均值(mL)T 每 mL 染料所能氧化抗坏血酸 mg 数A 样品提取液定容体积(50mL)A1 滴定时吸取样品提取液体积(20mL)W样品重里(5g)七、思考题1 该法测定抗坏血酸有何不足？2 用 2%草酸提取样品的目的是什么？参考答案1用本法测定抗坏血酸含量虽简便易行，可以一次测定大量的样品。但有下述缺点： 第一，本法只能测定还原型抗坏血酸，不能测出具有同样生理功能的氧化型抗坏血酸和结合 型抗坏血酸。第二，样品中的色素经常干扰对终点的判断，可预先用白陶土脱色，或加入 2 3ml 二氯乙烷，以二氯乙烷层变红为终点。1用 2草酸制备样品提取液，可有效地抑制抗坏血酸氧化酶，以免抗坏血酸为氧化 型而无法滴定。如果样品中有较多亚铁离子(Fe2七时，亦会使染料还原而影响测 定，这时应改为 8乙酸制备样品提取液。
