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1、总脂肪的测定(三氯甲烷-甲醇法)一原理:样品用酶液消化分解,游离出的脂肪用三氯甲烷-乙醇提取。提取液蒸发干燥后,称得的脂肪重量即为总脂肪含量。二仪器设备:1. 混合器:半微量2. 消化管:50ml3. 水浴锅4.离心机三试剂:1.甲醇2. 三氯甲烷3.酶液:2%淀粉酶(高峰淀粉酶)-0.5mol/L乙酸钠溶液:将25mL淀粉酶消化剂和200mL2.5mol/L乙酸钠溶液混合后,转移到1000mL容量瓶中,加水定容,混匀备用。四操作步骤准确称取5g(精确到0.0001g)粉碎试样(如果试样粗脂肪含量10%,称取3g即可),装入50mL消化管中,再加入30mL酶液,混匀。将消化管及其消化液置于50
2、C恒温水浴锅内保温1小时,偶尔摇动一次。把分解液转入到半微量混合器中,再加入80mL甲醇和40mL三氯甲烷,扣上盖后混合2分钟;打开盖再加入40mL三氯甲烷,盖上盖继续混合30秒。转移提取液至250mL聚氯乙烯离心管中,以5000转/min的速度离心10分钟,使三氯甲烷层澄清(如果提取液在20C下放置小时候,澄清自然发生而无需离心)。准确吸取20mL上清液(三氯甲烷层)加入到100mL烧杯中(烧杯101C下恒重,并准确称取重量)。在通风橱中,将烧杯及样液置于水浴锅中,使样液蒸干。(操作时注意,避免烧杯内被水浸湿,始终保持烧杯内干燥)将烧杯及蒸干物质在101C下干燥分钟,取出放于干燥器中冷却,称取烧杯及蒸干物质的重量。计算总脂肪百分含量。五.计算总脂肪(剩余物质质量1样品质量()1样品质量:蒸干物质和烧杯的总质量:烧杯恒重后质量、亠、六.注意提取液中,三氯甲烷、甲醇和水分的体积比在最初和最终分别保持在1:2:0.8和2:2:1.8这个范围内。