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1、1. 标本采集标本采集应在 2 小时内用无菌方法采集新鲜标本，置于灭菌容器中或直接接 种于增菌培养基中，登记好标本编号和来源送检，如不能及时送检，标本要存放 在专用的标本运送箱内，包扎好以免容器破损。1. 1 血液应根据病程的不同阶段采集不同标本进行检测，宜在发病早期和抗生素使用 前采集。抽取病人35ml血液，立即接种已在室温（20C ）平衡的血培养瓶 中。推荐采血量为10ml。所有情况下，接种的标本量必须做好记录。血培养瓶 在室温条件下运送至实验室。1. 2 血清余下的2ml病人血液（作为上述采集血液程序的一部分）及病后2-3周采集 恢复期血液2ml,分离血清做血清学检测（肥达氏试验等）。1
2、. 3 粪便用无菌采便器采集新排出的粪便约1g直接放入增菌培养管（8-10ml沙门菌 增菌液）内，尽快送检。1. 4 水样标本 按伤寒、副伤寒防治手册中所述的方法进行水源标本的采 集和分离培养。1. 5食品标本 固体食品需剪碎和研磨，奶和奶制品可直接取样增菌，具体操 作见伤寒、副伤寒防治手册，所用的培养基及鉴定方法参考中华人民共和 国国家标准（食品卫生检验方法微生物学部分）。注意事项 采集标本及标本接收时应认真核对名单及标本号，并作好收样记 录（附表 2）。2. 分离培养2. 1血培养 血培养瓶放在37C培养箱里培养10天，每天观察生长情况，如出 现混浊现象，应马上转种麦康凯/血平板，即使没有
3、肉眼可见的生长，也必须在1、2、7 天转种麦康凯/血平板。2. 2粪便培养 增菌管37C培养1824小时，挑取培养物转种到SS平板,37C 培养1824小时，如果没有观察到有可疑菌落生长，再继续培养24小时，观察 结果，挑取可疑菌落。2. 3 水样标本 按伤寒、副伤寒防治手册中所述的方法进行水源标本的采集和分离培养。2. 4 食品标本固体食品需剪碎和研磨，奶和奶制品可直接取样增菌，具体操作见伤寒、副伤寒防治手册，所用的培养基及鉴定方法参考中华人民共和 国国家标准（食品卫生检验方法微生物学部分）。2. 5 菌落形态 见表 1。表 1 沙门菌属菌落形态沙门菌属大肠杆菌麦康凯平板不发酵乳糖（无色）的
4、光滑型菌落发酵乳糖（粉色）的光滑型菌落SS 平板不发酵乳糖、产h2s （中心黑色的无发酵乳糖（粉色）菌落色菌落）或不产h2s3. 生化鉴定从每个标本的血培养瓶转种的麦康凯平板挑取 3 个可疑菌落，粪便培养转种的麦康凯/SS平板挑取3-5个可疑菌落分别转种到以下培养基：3. 1KIA：穿刺2/3中段，在斜面上划线。37C培养1824h，观察生化试验结果，挑取KIA生化管上菌苔做革兰 氏染色，并做好记录。3. 2符合沙门菌KIA反应的，取该管斜面菌苔转种MIU：穿刺接种培养基，并沿穿刺线拔出接种针。 西檬氏枸橼酸盐琼脂：在斜面上划线。*生化结果及血清凝集试验符合菌株转种一个营养琼脂平板（药敏实验用
5、）。伤寒副伤寒沙门菌生化特性如表2，表3。KIAMIU菌乳糖葡萄糖H2 血清学鉴定 取符合伤寒、副伤寒菌生化反应的 KIA 斜面上菌苔用沙门菌属诊断血清做 玻片凝集试验，并设盐水对照，见表 4。方法：挑取KIA斜面上菌苔，先用0多价血清凝集，如发生凝集，再选用 单价0因子血清凝集（不需煮沸），并用盐水做对照。如果0多价血清不凝集， 则用Vi血清鉴定Vi抗原。将细菌制成悬液，经100C水浴30分钟，破坏其Vi 抗原，然后再与0多价和单价血清凝集（先做盐水、0多价、Vi，再做02、04、 06.7、 09因子血清。）。0抗原确定后，再用 H 因子血清凝集。不同沙门菌血清型，对0、H及Vi因子血清反
6、应情况如下：斜面颜 色中段颜色尿素动力靛基质颜色变化黄底层不变色加大肠杆菌u黄黄土+试剂后表层呈（有气泡）吲哚红志贺菌+红黄土底层不变色黄底层不变色细伤寒菌+土红+（无气泡）菌扩散生长甲型副伤黄红+同上寒菌（有气泡）乙型副伤黄+红+同上寒菌（有气泡）丙型副伤黄+红+同上寒菌（有气泡）产酸产气；土多数阳性，少数阴性；u多数阴性；少数阳性；+产酸不产气; 碱性反应为红色；产酸为黄色。动葡乳麦甘蔗硫靛尿甲V枸卫木阿赖鸟 力萄糖芽露糖化基素基 丨 橼茅胶拉氨氨 糖 糖醇 氢质 红P酸醇糖伯酸酸 盐糖脱脱羧羧 酶酶伤寒杆菌+ + 土 + + 甲型副伤寒菌+- 一+ + +乙型副伤寒菌+ 一+ +土+丙型
7、副伤寒菌+ 一+ + +注：一阴性（不产酸）；+阳性（产酸）；产酸产气；土多数阳性，少数阴性;+多数阴性，少数阳性。表 4 伤寒、副伤寒等沙门菌血清凝集反应菌型O抗原-H抗原Vi菌种来源目 木 HII相伤寒沙门菌9.12d-+人粪、血、脊液、胆汁、肾、穿刺液；猪、蝇、土壤、污水甲副1.2.12a-人粪、血、骨髓、胆汁；猪、污水乙副1.4.5.12b1,2-人粪、血、尿、骨髓、胆汁；猪、牛、驴、禽类、蝇、食品、污水丙副6.7c1,5+人粪、血、胆汁；猪、牛、豆制品、食物、污水注：肠杆菌科细菌各属之间，在生化方面有类似之处，抗原方面也可有交叉反应，加之有时可出现不典型的菌株，因此，仅做一般生化反应
8、和血清学鉴定，还不能有做出正确的结 论，需要进一步做系统的生化反应的血清学分型。5. 检验程序伤寒、副伤寒沙门菌检验程序血液分离血清血液增液菌1-7天肥达反应改良亚硒 酸氢钠甘 露醇(SFM) 增菌液SS.MaC外环境标本按伤寒、副伤寒防治手册SS.MaC方去采集培养1.2.7SFM、SC天转种血平板挑取可疑菌落接种碑i磁小时、时)-/ Qh2s+/QH2s-/+h S2/+h S+2+/+非伤寒副伤寒沙门菌|做玻片凝集(诊断血清或 A-F多价血清)(+ )生化反应(KIA、”-MIU、H2S、动力、()枸椽酸盐、靛基用单价0因子血清分群|质、赖氨酸)有意义的标本做全套再做H因子血清定型；生化反应I()Vi ( + ),刮菌苔入2ml生理盐水，100C1520分钟，离心，取沉淀物重做
