巨噬细胞吞噬功能检测

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1、巨噬细胞吞噬功能测定【实验原理】巨噬细胞对颗粒性异物具有很强的吞噬功能。当鸡红细胞被注入小鼠腹腔 时,会被腹腔中的巨噬细胞吞噬。取小鼠腹腔液涂片、染色,在显微镜下可见 到鸡红细胞被吞噬的现象。计算吞噬百分率和吞噬指数,可判断吞噬细胞的吞 噬功能。【试剂和器材】1.动物体重 20-25g 的健康小鼠。2. 1%鸡红细胞(CRBC)悬液自鸡液静脉或心脏采血,放Alsever液中保存 (鸡血与Alsever液1: 5混合),置4C可有效保存1个月,临用前用生理盐水将CRBC洗3次,按红细胞压积配成1%CRBC悬液。3. 6%可溶性淀粉肉汤培养基100ml加入可溶性淀粉6g,混匀,置100C水 浴煮沸

2、消毒。4其他试剂瑞氏(Wright)染液、生理盐水等。5.器材无菌注射器及针头、剪刀、镊子、解剖盘、载玻片、显微镜等。【步骤和方法】1试验前3天,于小鼠腹腔注射6%可溶性淀粉肉汤培养基1ml。2于试验当天,小鼠腹腔注入1%CRBC悬液0.5ml,并轻轻揉腹。3.30min后小鼠颈椎脱臼处死,取腹腔液涂片,自然干燥后瑞氏染色,用油 镜观察。【结果判定】镜下可见吞噬细胞核呈蓝色,被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形,其胞浆呈红色 而核被染成蓝色。呈油镜下随机观察 100 个巨噬细胞,计数吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数和 吞噬的鸡红细胞总数。吞噬百分率= (吞噬 CRBC 的巨噬细胞数/100)*100%吞噬指数=吞噬细胞吞噬的 CRBC 总数/100【注意事项】1. 涂片的薄厚要适当,否则影响计数。2. 小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。3. 如小鼠腹腔液过少,可注入适量生理盐水。4. 剪开小鼠腹腔时应避免出血,否则将影响试验结果。5. 被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化,时间过短未被吞噬,必须掌握好吞 噬作用时间。xx 液配方:葡萄糖2.05xx 柠檬酸钠0.8xx 柠檬酸0.055xx 氯化钠0.42克加蒸馏水至100毫升,加热溶解后将pH值调到6.1,经过69千帕,15分钟的高压灭菌,放置在4C的环境内,保存备用。

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