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1、磁珠法粪便核酸提取试剂盒(常规版)Faeces DNA Extraction Kit (Regular Versio n)【目录号】FDE-5005、FDE-5030【运输条件】225 C；【保存条件】磁珠分散液、裂解液28 C,其它组分室温；【试剂盒组成】Kit Comp onentFDE-5005FDE-5030试剂盒组成(50T)(300T)FDE Buffer裂解液20mL60mLFDE Buffer裂解液20mL60mLFDEMag netic Beads 磁珠悬浮液5mL15mLWash Buffer清洗液60mL180mLElute Buffer洗脱液10mL30mL【注意事项】
2、1. 在使用本试剂盒钱，请用户自备80%乙醇；2. 使用前请检查裂解液、是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将裂解液置于378 C水浴重新溶解；3. 本操作指南经本公司反复验证，使用前请仔细阅读，并且按照操作指南的建议操作。【产品简介】本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，从各种固态或液态粪便样品中分离纯化高质量基因组DNA。特殊技术包埋的磁珠在特定条件下对核酸具有极强的 亲和力，而当条件改变时，磁珠会释放吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。 提取的基因组DNA片段打，纯度高，质量稳定可靠，尤其适合高通量工作站的自动化提取， 特别是本公司各型号的自动化核酸提取仪。
3、本试剂盒纯化的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、荧光定量PCR、文库 构建、Sputhem杂交、芯片检测和高通量测序等实验。【试剂盒说明】1. 磁珠分散液严禁反复冻融和离心，磁珠使用前务必充分混匀，可涡旋振荡10秒左右；2. 实验中使用我先混合仪的目的是为使磁珠能够充分吸附核酸、将磁珠表面的杂质充分去除或核酸从磁珠表面充分洗脱；3. 使用前检查裂解液 、 是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将裂解、于37 C水浴重新溶解。【试剂盒说明】样本类型样本量DNA提取范围固态200mg540 yg液态200 Z120 yg【自备仪器、耗材和试剂】仪器自动版涡旋混合仪、高速离心机、水浴
4、锅或金属浴、96孔方孔圆底板、无水乙醇、异丙醇、英芮诚ETP-300核酸提取仪。手动版涡旋混合仪、高速离心机、金属浴或水浴锅；EP管、EP管用磁力架、无水乙醇、异丙醇。【仪器自动版操作步骤】以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，可同步完成 32个样本的提取工作。1. 上样准备参照下表用量向96孔板中分别加入相应试剂。样品位仁72、83、94、105、116、12试剂磁珠悬浮液异丙醇清洗液80%乙醇80%乙醇洗脱液75 yL400 yL600 yL600 yL6 00 yL100 yL注：1）每次吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀；2）为提高效率建议使用排枪32. 上机样品的获得A. 固体样品
5、：称取200mg左右的粪便只EP管中，分别加入1mL的裂解液、20 L 蛋白酶K，涡旋振荡1min （须将管底的粪便振荡起来）后，58 C温浴30min （每隔5min 颠倒混匀一次）。B. 液态样品：吸取200 yL左右的粪便至EP管中，分别加入200 yL裂解液、20 L 蛋白酶K，涡旋振荡1min （须将管底的粪便振荡起来）后，58 C温浴15min （每隔5min 颠倒混匀一次）。注：如需去除RNA，请额外加入 RNase A （100mg/mL ） 5yL1）裂解完毕的样本，室温12000rpm，离心5min，转移400 yL上清至新的EP管内。2） 向装有上清的EP管内加入250
6、yL裂解液，上下颠倒5次，混合均匀，12000rpm， 离心5min，保留上清，待用。3. 上机提取1）从第2步裂解完毕的样本中吸取450 y L上清至准备好的96孔板的第2/8列；2）将96孔版样品板放入ETP-300型核酸提取仪中，并插入磁棒套；3）打开仪器操作程序，调用“粪便核酸提取”程序，单击“运行”执行提取程序。“粪便核酸提取”程序参数设置如下，如仪器程序参数与说明书不一致，请以说明书为准：步骤编号孔位运行类型振荡时间（秒）分离时间（秒）挥发时间（秒）振荡幅度振荡强度一组温度（C ）二组温度（C ）三组温度（C ）四组温度（C）11磁珠转移11002弱000022DNA结合12000
7、4强000032DNA结合4001504弱000043清洗12501005强000054清洗22801005强000065清洗2240103005强000076洗脱5002002强6060606083弃磁珠15005强00004. 核酸转移程序运行完毕，取下96孔板，将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中，做好标记, 提取过程完成，此时可以弃去96孔板。手动版操作步骤】1准备真空干燥箱稳定到45 C；2样本的裂解参考仪器操作步骤2 进行3结合向装有上清的EP管内加入分别加入等体积的异丙醇和 75卩L磁珠悬浮液，颠倒混匀； 将 EP 管置于涡旋混合仪上高速振荡 10min ，使磁珠与溶液充分混
8、匀，确保磁珠与核 酸完全结合，之后静止 2min 。4 磁性分离将EP管置于磁力架上，静止1min，待磁珠吸附完毕后，弃净澄清液，下同。 5 清洗将EP管从磁力架上取下，加入600 L清洗液1，置涡旋混合仪高速振荡1min，使磁珠 分散均匀，取下EP管并置于磁力架上静止30s，弃净澄清液。使用700180%乙醇，参照上述步骤操作2次。6 除醇将除尽上清液后的EP管置于磁力架上，连同磁力架一起放入45 C真空干燥箱中，干燥 约8min至无明显乙醇味。注：若无真空干燥箱，亦可在保持通风橱通风或电风扇的状态下静置约 10min ，具体时间根据气温 变化可能需要适当调整，以磁珠干燥完全为原则。7 洗脱取出EP管，加入100卩洗脱液（或去离子水），移液枪吹打使磁珠与洗脱液充分混匀， 将EP管于65 C加热洗脱5min，然后涡旋洗脱2min，确保磁珠与核酸洗脱完全。注：洗脱液要求50卩8 100200讥 较好，吸入也较少时会影响回收率。 8 核酸转移将EP管置于磁力架上静置30s至磁珠吸附完全，用移液枪将洗脱液转移至另一干净 EP 管中，操作过程完成，此时可以弃去磁珠。（ 1702 修订版）V201702.221版权声明： ? 英芮诚生化科技（上海）有限公司保留本使用指南所有权利。版本：
