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1、3细胞工程第三章考试重点细胞培养的基本方法 1、 无菌操作技术：是细胞培养的基本技术，包括实验器具和材料的准备、培养室和超净工作台的消毒、洗手和着装、无菌培养操作等。 2、 无菌培养室每天都要用0.1%新洁尔灭拖洗地面一次，紫外线照射消毒3050min，超净工作台台面每次实验前要用75%酒精擦洗，然后紫外线消毒30min。 3、 已吸过培养液的吸管不能再用火焰灼烧。 4、 无菌操作要求：动作准确敏捷；不用手触及已消毒品；操作面布局合理；操作保持一定顺序；培养用瓶和吸管的放置；防止各种用液的交叉污染；不向操作者讲话或咳嗽。 5、 超净工作台使用注意事项：P25 6、 光波在折射率打的物体中比在折
2、射率小的物体中前进的距离较短，此距离差异叫光程差 7、 将普通光学显微镜的物镜、聚光器和光源的位置倒置过来的显微镜称倒置显微镜。特点：光源和聚光器安装在载物台上方，物镜在载物台下方，载物台上可以放置培养皿，便于观察贴附在培养瓶皿底壁上的活细胞。 8、 细胞计数法：是用血细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数目，以测定细胞增殖和调整细胞浓度的一种方法。 9、 细胞生长曲线：是观察细胞在一代生存期内的增生过程的重要指标，以培养时间为横坐标，细胞密度为纵坐标作坐标图。 10、 细胞分裂指数：是指分裂期细胞在全部细胞中所占的百分率，用以表示细胞的增殖旺盛程度。 11、 细胞贴壁率：又称接种存活率，用于观察贴
3、壁附着生长细胞，主要反映细胞的生存能力和部分底物材料的生物相容性。血细胞不贴壁，塑料材料贴壁率较高。 12、 倍增时间是指在对数生长期细胞数量增加一倍所用的时间。 13、 细胞周期是时间测定有两种方法： 同位素标记测定法 流式细胞仪测定法。 14、 MTT比色法测定细胞活力：活细胞的线粒体脱氢酶能将染料MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，经酸性异丙醇溶解后呈现的色度可反映出活细胞的代谢水平，死细胞无此酶活性。 15、 体外活体染色：就是在体外条件下用某种染色剂对活的组织或细胞进行染色，而不影响活细胞的生命活动的一种方法。活体染料可分为碱性活体染料和酸性活体染料两类 16、 酸性活性
4、染料主要有：台盼蓝、刚果红、吡咯蓝。体外活体染色一般使用碱性活体染料。碱性染料有：次甲基蓝、甲苯胶蓝、亮焦油蓝、亮焦油紫、中性红、甲基紫、维克多利亚蓝。 17、 活体染色方法：台盼蓝染色、吖啶橙AO荧光染色法。AO+DNA=绿色、AO+RNA=火红色。 18、 污染途径：空气、器材、操作、血清、组织样本。空气是微生物及尘埃颗粒传播的最主要途径。 19、 常见的真菌有：烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌。 20、 常用的支原体检测方法有：相差显微镜检测法、DNA荧光处理法、电镜检测法、低张处理地衣红染色观察、免疫学方法、支原体培养法及PCR法。对病毒进行检测主要有细胞直接观察法、动物接种检查法、电子显微镜检查法、免疫学及PCR法。 21、 培养操作前的准备有：P32 培养操作时的注意事项P32 22、 污染的排除方法有： 抗生素的应用；加温处理；动物体内接种除菌法；巨噬细胞吞噬法。
