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1、广西藤茶提取物TTF体外抗肿瘤作用的实验研究【摘要】目的观看广西藤茶提取物(简称TTF)体外抗肿瘤作用。方式采纳MTT法，观看TTF及含药血清对肉瘤细胞(S180)、肝癌细胞(H22)、白血病细胞株(L1210)的细胞毒性及对细胞增殖的抑制作用。结果TTF及其含药血清在体外对S180细胞、H22细胞和L1210细胞均有明显的抑制作用。结论TTF体外具有抑制S180、H2二、L1210肿瘤细胞增殖，且对S180细胞株的作用明显优于对H2二、L1210的作用。【关键词】TTF；S180、H2二、L1210肿瘤细胞株;体外抗肿瘤作用AbstractObjectiveTostudytheantican
2、ceractivitiesofTTFinTheanticancereffectoftheTTFinvitrowasstudiedbyMTTassay,studiedthetoxicityandinhibitioneffectoftheTTFtotheproliferationofS180cells,H22cellsandL1210S180-cells,H22-cellsandL1210-cellswereobviouslyinhibitedbytheTTFinTTFhadtheanticancereffectonS180-cells,H22-cellsandL1210-cellsinvitro
3、.KeywordsTTF；S180H2二、L1210cells；anticancereffectinvitro藤茶Ampelopisgrossedentata(Hand-Mazz)系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄的嫩茎叶1。要紧散布于广西、云南、广东、贵州、湖南、湖北、江西、福建等省，为瑶族民间经常使用的草药之一。该药相传是瑶族王一一盘王遗传下来的，至今已有数百年的应用历史。其性凉，味甘、淡，具有清热解毒、消肿止痛、祛风湿、强筋骨等功效，主治黄疸型肝炎、伤风风热、咽喉肿痛、急性结膜炎等2藤茶要紧含黄酮类化合物，含量约%3,其中的要紧活性成份为双氢杨梅树皮素、杨梅树皮素，以双氢杨梅树皮素含量最多。
4、现代药理研究说明藤茶总黄酮具有抗炎、保肝、降酶，抗血栓、降血糖等作用4,双氢杨梅树皮素对体外白血病细胞HL-60、K56二、肝癌细胞Bel-740二、人鼻咽癌HK-1细胞、人乳腺癌MCF-7细胞的增殖及体内小鼠移植性B16黑色素瘤的生长均有显著的抑制作用5,60以上资料提示藤茶具有良好的抗肿瘤作用，故咱们对广西藤茶提取物TTF的抗肿瘤作用进行研究，现报告如下。1材料细胞肉瘤S180细胞：广西中医药研究所惠赠；肝癌H22细胞:广西民族医院惠赠；白血病细胞株L1210：广西中医学院新药开发中心惠赠。以上瘤株于动物身上以腹水形式传代保种。动物昆明种小白鼠（广西中医学院实验动物中心提供，合格证号：桂医
5、动字第11004号）。药物TTF：由本院中药化学教研室提供，为一淡黄色粉末，纯度达85%；环磷酰胺：上海华联制药，批号：040914。试剂RPMI1640培育基:GIBC0公司产品，批号1243098；新生牛血清（NBS）：杭州四季青公司，批号040228；MTT：北京拜尔迪生物公司分装，Amressco0793；二甲基亚碉（DMSO）：生工生物工程（上海），批号54186；注射用生理盐水：四川奇力制药,批号041018。器材二氧化碳培育箱（美国Forma公司）；倒置相差显微镜（德国Leica公司）；酶标仪（奥地利Sunrise公司）；吉尔森微量移液器（法国Pipetman公司）；十万分之一电
6、子天平（德国赛多利斯）；手提式消毒器（上海国营红卫医疗器械厂）。2方式7与结果S180细胞、H22细胞、L1210细胞体外培育别离取接种后第8天的瘤源动物，颈椎脱臼处死，用75%酒精浸泡，于超净工作台顶用一次性注射器抽取1ml腹水置于4ml不含血清的RPMI1640溶液中，滴管冲吸均匀，离心（lOOOrpm,10min）,重复2次，最后将细胞重悬于4ml含10%新生牛血清的RPMI1640培育液中，制成细胞悬液。取5Hl稀释20倍后加台盼蓝染色，计数活细胞，活细胞达95%以上。用含10%新生牛血清的RPMI1640培育液将S180细胞悬液稀释为5X104个/ml,H22细胞、L1210细胞悬液
7、稀释为1X105个/ml后接种于96孔培育板，100U1/孔，平行设空白对照孔（只加培育液，不加细胞）。接种后置于37C,5%C02的二氧化碳培育箱中预培育24h,然后进行以下体外实验。TTF对S180、H2二、L1210细胞毒性实验（MTT法）将药物加入己进行预培育24h的S180、H2二、L1210细胞96孔培育板，共9个浓度，终浓度别离为1000ug/ml500ug/ml250ug/mK125Ug/mlUg/mlu/ml、Ug/ml、Ug/mlUg/ml,100U1/孔，每浓度3孔。平行设细胞对照孔3孔（力口100u1含10%新生牛血清的RPMI1640培育液）。加药后继续培育48h,然
8、后加入5mg/mlMTT溶液（生理盐水配制）,10U1/孔。继续培育4ho离心（2000rpm,15min）,弃去上清,加入DMSO,200U1/孔，轻轻振摇lOmin,以空白对照孔调零，在550nm波优势用酶标仪测定0D值。按Reed-Muench法计算IC50、TC50、SI,结果见表一、二、3o表1TTF对S180细胞的体外毒性实验（n=3）表2TTF对H22细胞的体外毒性实验（n=3）表3TTF对L1210细胞的体外毒性实验(n=3)结果显示，TTF对S180细胞体外有必然的细胞毒性，其中TC50为Ug/mLIC50为Ug/mL为为。TTF对H22细胞体外有必然的细胞毒性，其TC50为
9、Ug/ml,IC50为Hg/ml,SI为。TTF对L1210细胞体外有必然的细胞毒性，其TC50为Ug/ml,IC50为口g/ml,SI为。TTF对S180、H2二、L1210细胞体外增殖的抑制作用细胞培育同上，将药物加入已进行体外预培育24h的S180细胞96孔培育板，100U1/孔，每浓度5孔，共9个浓度，终浓度别离为70ug/ml、50Ug/ml、Ug/ml、Ug/ml、Ug/ml、Ug/ml、Ug/ml、Ug/ml、Ug/ml。同时做细胞对照孔(加细胞和培育液，不加药物)。加药后继续培育48h,倒置显微镜下观看细胞生长状况，然后加入5mg/mlMTT溶液，10U1/孔。继续培育4h,离
10、心(2000rpm,15min),弃去上清,加入DMSO,200U1/孔，轻轻振摇lOmin,以空白对照孔调零，在550nm波优势用酶标仪测定0D值。按以下公式计算细胞抑制率，并以药物浓度的对数和抑制率作回归方程，计算IC50。结果见表4、五、6o细胞抑制率%=(1-药物组0D值均数/细胞对照组0D值均数)X1结果显示：TTF在无毒浓度下对S180细胞体外增殖有良好的抑制作用，其IC50为Ug/ml；对H22细胞体外增殖有必然的抑制作用，其IC50为Ug/ml；对L1210细胞体外增殖有必然的抑制作用，其IC50为口g/mlo表4TTF对S180细胞的体外抑制作用(n=5)表5TTF对H22细
11、胞的体外抑制作用(n=5)表6TTF对L1210细胞的体外抑制作用(n=5)3讨论恶性肿瘤是一种严峻疾病，医治难度极大，且其发病率一直呈上升趋势，据世界卫生组织预测，至2020年随世界人口达80亿，将有2000万新发癌症病例，其中死亡人数将达1200万，而其中大部份将发生在进展中国家8o目前的医治手腕以手术、放疗、化疗为主，手术多适用于初期癌瘤患者，放疗、化疗只对灵敏瘤种有效，但同时又会显现严峻的毒副反映和后遗症，乃至造成严峻的医源性疾病而危及生命，因其中草药的抗癌作用愈来愈受到重视。藤茶是民间经常使用的草药，到目前为止未见其毒性报导。从藤茶要紧活性成份双氢杨梅树皮素良好抗肿瘤作用的资料报导5
12、,6,推测藤茶提取物TTF具有抗肿瘤作用。但目前对TTF抗肿瘤作用的研究报导甚少,为此，咱们研究TTF体外对S180肉瘤，H体腹水型肿瘤及L1210白血病瘤株抗肿瘤作用。实验观看结果显示：体外毒性作用证明，TTF在必然浓度下对三个瘤株都有直接的杀伤作用；在无毒浓度下体外实验结果显示，TTF对S180细胞、H22细胞、L1210细胞均有抑制作用，对S180细胞的抑制作用为明显，作用对其含药血清和体内抗肿瘤作用及其作用机制有待进一步研究。【参考文献】1中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴，第2册.补编.北京:科学出版社，1983,349-356.2全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编(下册).北京:人民卫生出版社，1986,300.3周桂霞，何群，裴刚，等.瑶族藤茶中总黄酮类成份的含量测定.湖南中医药学报，1999,5(12)：30-31.4钟正贤，陈学芬，周桂芬，等.广西产藤茶总黄酮的药理研究.广西科学，1999,6(3)：216.5周宁宁，朱孝锋，谢冰芬，等.无刺根中蛇葡萄素体外抗肿瘤作用研究.广东药学,2000,10(4)：7-8.6刘德育，罗曼，谢冰芬，等.蛇葡萄素的抗肿瘤作用研究.癌症,2001,20(1)：1372-1375.7徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方式学.第三版.北京：人民卫生出版社，2005,1784.
