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1、陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目叶绿素的提取和分离姓名刘 伟学 号专业生物科学批次/层次指导教师 学习中心叶绿素的提取和分离一、实验目的1. 学习叶绿体色素的提取、分离方法。2. 通过叶绿体色素提取、分离方法的学习了解叶绿体色素的相关理化性质。3. 为进一步研究各叶绿体色素性质、功能等奠定基础。二、原理叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类。 它们与类囊体膜蛋白相结合成为色素蛋白复合体。它们的化学结构不同，所以它们的物化性质（如极 性、吸收光谱）和在光合作用中的地位和作用也不一样。这两类色素是酯类化合物，都不溶于水，而 溶于有机溶剂，故
2、可用乙醇、丙醇等有机溶剂提取。提取液可用色谱分析的原理加以分离。因吸附剂 对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流动相）间 具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。三、材料、仪器设备和试剂1. 绿色植物如菠菜等的叶片。2. 研钵、漏斗、三角瓶、剪刀、滴管、康维皿、圆形滤纸（直径llcm）。3. 试剂：95%乙醇，石英砂，碳酸钙粉，推动剂:按石油醚:丙酮:苯=10:2:1比例配制（v/v）四、试验步骤1. 叶绿体色素的提取（1）取菠菜或其他植物新鲜叶片4-5片（4g左右），洗净，擦干，去掉中脉剪碎，放入研钵中。（2）研钵中加
3、入少量石英砂及碳酸钙粉，力口2-3ml 95%乙醇，研磨至糊状，再加10ml 95%乙醇， 然后以漏斗过滤之，残渣用1 0m l 95%乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。2. 叶绿体色素的分离（1）将11cm的滤纸的一端剪去二侧，中间留一长约、宽约窄条。（2）用毛细管取叶绿体色素浓溶液点于窄条上端，用电吹风吹干，如一次点样量不足可反复在色 点处点样数次，使色点上有较多的叶绿体色素。（3）在大试管中加入四氯化碳3-5ml及少许无水硫酸钠。然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试 管内，使窄端浸入溶剂中，而色点略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁，软木塞盖紧，直立于阴 暗处层析。成分叶绿素a叶绿素b叶黄素胡
4、萝卜素颜色绿蓝黄褐1号滤纸到滤纸底边的长度2438445258626971色宽148422号滤纸到滤纸底边的长度2338455259626972色宽157333号滤纸到滤纸底边的长度2338455160636973色宽15634五、试验记录小时后，观察色素带分布：最上端橙黄色（胡萝卜素），其次黄色（叶黄素），再崐次蓝绿素（叶绿 素a），最后是黄绿色（叶绿素b）o（4）当展层剂前沿接近滤纸边缘时便可结束实验，此 时可看到不同色素的同心圆环，各色素由内往外的顺序为：叶绿素b （黄绿色）、 叶绿素a （蓝绿色）、叶黄素（鲜黄色）、胡萝卜素（橙黄色），再用铅笔标出各种 色素的位置和名称。六、实验关键1、选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。如菠菜叶等。2、画滤液细线时，应以细、直、颜色浓绿为标准，重复画线时必须等上 次画线干燥衙再进行，重复2-3次。3、层析时不要让滤液细线触及层析液。七、注意事项1、因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨要快， 收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。2、在研磨时要加少许二氧化硅，目的是为了研磨充分，有利于色素的提 取；加少许碳酸钙的目的是为了防止研磨过程中，叶绿体中的色素受到破坏。3、分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因 为色素易溶解在层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。
