抗氧化性的测定‘

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1、1.邻苯三酚自氧化法参考张强和江建斌例发表的文献。其主要原理是：邻苯三酚在碱性条件下，能迅 速自氧化释放出02-,生成带色的中间产物。反应开始后，反应液先变成黄棕色，几分 钟后转绿色，几小时后又转变成黄色，这是因为生成的中间物不断氧化的结果。邻苯 三酚自氧化过程的初始阶段，中间物的积累在滞留30s-55s后，与时间成线性关系，一 般线性关系维持在4min的范围内。经实验证明，中间物在320nm波长处有强烈光吸收。 当有类似超氧化物歧化酶的抗氧化活性物质存在时，能催化02-与身结合生成02和 H202，从而阻止了中间产物的积累。因此，通过计算就可求出抗氧化活性。试剂的配制(1) Tris-HCl

2、-EDTA缓冲液：Tris 1.2114g，EDTA 116.9mg，加80mL双蒸水，用0. 2mol / L HCl调pH=8. 2士O. 1，最后用双蒸水定容到100mL。(2) lOmmol / L的HCl：用0. 1mol / L的标准HCl配制成lOmmol / L的HCl。(3) 10mmol / L的邻苯三酚(PR):取31. 5275mgPR用10mmol / L的HCl溶解定容到25mL。测定方法：按表2. 2所示在试管中加入Tris-HCl缓冲液和超纯水，并将邻苯三酚一起 在25C下水浴孵育10min后，将邻苯三酚加入试管迅速摇匀并倾入比色杯中，0.5min后 在320n

3、m波长扫描4min，求出邻苯三酚自氧化速率(0.6A / min)，用抗氧化肽替换超纯 水测定抗氧化肽的超氧阴离子淬灭能力。表2-2超觌阴离子清除法实验步骤Table2-2 The experiment step of Pyrogallol Autooxidation scavenging activity试剂对照管/mL样品管/ELTris-HCl (pH 8.2、50mmol/L1.801,80超纯水L0抗氧化肽1.0邻苯三酚(lOmmol/L)0.10.1PR抑制率(【)按照下式计算；1= (AAo-AAi) / AAolOO%其中加样品液后PR的自氧化速率Ao：未加样品液的PR白氧化速

4、率2油脂POV值的测定采用传统的碘量法。具体做法是：吸取2. 5 ml油脂(精确称其质量) 于碘瓶中，口30 ml氯仿一冰乙酸(2： 3)混合液溶解样品，加1. 00 ml饱和KI溶液，立 即加塞摇匀，放置暗处5min，然后取出样品，加水100 ml，力口 1%淀粉指示剂1 ml(后 期可增至1. 5 rnl)，以0. 002 mol / L硫代硫酸钠标准溶液滴定，至无色为终点。以 试剂空白消耗的硫代硫酸钠为参比，按下式计算POV值： POV(%)=126.9*C*(V1-V2)*100/(1000*m)式中：V1一样品消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积(m1)；V2一试剂空白消耗硫代硫酸钠标准溶液

5、的体积(m1)，实际测得为0.00mLC一硫代硫酸钠标准溶液的浓度(mol / L)，实际为0. 002 mol / L；m一样品质量(g)；126. 9碘的摩尔质量(g/mo1)。将数据带入，可得简化的计算公式：POV(%)=0.02538*V/m3亚油酸自氧化法将参照文献2的方法略加改进。亚油酸是不饱和酸，具有在空气中极易被氧化而生成 过氧化物的性质。在亚油酸体系中加入一定量的多肽液，如果大豆肽具有抗氧化能力， 它能抑制或延缓体系中过氧化物的生成。亚油酸自氧化速率减缓了，最终影响显色物 质的生成。通过测定OD481值的变化，就能表示出多肽液的抗氧化能力的强弱。亚油酸贮备液的制备：取175u

6、l亚油酸溶于50ml 0.2mol / L磷酸缓冲液(pH9. 35)，用 高速均质机在10000r/min下均质lOmin，使亚油酸充分分散，溶液呈均匀乳白色，0C保存，24h 内使用。大豆肽抗氧化力的测定：亚油酸过氧化体系：亚油酸贮备液lml50mmol / L的FeCl2EDTA溶液50ul大豆肽液50ul大豆肽液50ul将上述反应液混匀，在暗处50C保存4h，取出50ul，加入2.5ml 75%乙醇(含0. 3NHCl)， 10uL0. 0mmol / L FeCl2, 50ul 40%KSCN。反应5min后测定OD48l，以不加肽的反应液 的OD48l值为100%，计算含肽反应液的相对过氧化值，再以相对过氧化值的倒数作为相 对抗氧化力。