《羧基磁珠与蛋白偶联方法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《羧基磁珠与蛋白偶联方法（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、羧基磁珠与蛋白偶联方法(总2页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company Onel-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除羧基磁珠与蛋白偶联方法来源： 时间：2009-6-6 23:34:26简介BioMag和BioMagPlus超顺磁珠适用于磁分选细胞、细胞器、蛋白、免疫球蛋白、核酸及其 它生物或非生物体系中的分子。BioMag和BioMagPlus磁珠表面不规则，因此具有比较大的表面 积，可以增加磁珠与偶联分子的接触机率，提高偶联效率。此外，这两种磁珠90%以上为氧化铁， 可以加快磁分选速度，这特别适用于大批量，高能量分选样品。BioMag and BioMagPlu
2、s磁珠采用的工艺制备，只不过BioMagPlus经过了另，外的去除细尘处 理，偶联试剂盒中提供的就为此类磁珠。BioMagPlus羧基磁珠表面的羧基经过二亚胺EDAC活化后，即可以与蛋白偶联。HF HpN=Q=4一L 十 N*- * fEtc-P a ftUcand 内 K身 kMasBM ueAwallatl# An neFmrUck 网E devalsnflly只询皿的rotenBangs 公司的 BioMagPlus Carboxyl Protein Coupling Kit 适用于蛋白与 BioMagPlus 超顺磁珠 的偶联，此kit提供了可供5次偶联的试剂和磁珠。材料 BioMag
3、Plus 羧基磁珠：2.5mL，1.5um，20 mg/mL EDAC (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide): 0.10g 15mL尖头离心管：5 tubes BioMag磁分离器 0.05M MES 缓冲液(pH 5.2): 2 x 175mL.淬灭液(1m Glycine, pH 8.0): 25mL洗涤缓冲液：125mL实验步骤活化.移取0.5mL (10mg)的BioMagPlus羧基磁珠至15mL尖头离心管内，并放置在磁分离架上直到上 清液变完全透彻后，用吸管小心移弃上清。加5mL of MES缓冲液充分混匀洗涤.将离心管放在
4、磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移 弃上清。重复Step 2,三次.最后一次洗涤后，重悬磁珠于5mL的MES缓冲液中。将EDAC从冷藏处取出置于室温30分钟。准确称取所需的EDAC (1.6mg EDAC/mg BioMagPlus磁 珠)加入装有磁珠的离心管内，.剧烈振荡摇匀。室温下，将离心管置于旋转混匀仪上活化反应30分钟。反应过程中，注意不让磁珠沉淀聚积在 一起。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。重复Step 2,四次。蛋白偶联计算需要偶联的蛋白，抗体量.一般地，每mg活化的羧基磁珠可以偶联20-500ug的蛋白(抗 体)，可适量添加一些载体蛋白，如BSA
5、 Fraction V，增加反应体系中的总蛋白量，从而可以起到 一定的封闭作用。保证抗体偶联的正确方向。将蛋白加至5mL MES缓冲液中。吸取50ML蛋白液于950ML的吊，缓冲中.配成1： 20的稀释液.标记为偶联反应前蛋白液.置 于一旁用于后面的偶联率计算。将剩下的蛋白液加到装有活化磁珠的离心管内，剧烈振荡混匀，室温下，将离心管置于旋转混匀 仪上偶联反应16-24小时。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心收集上清.标记为偶联后蛋白液，用于计 算偶联率。重悬磁珠于5mL MES缓冲液中，振荡摇匀。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小 心移弃上清。重复Step 6,
6、一次加5mL的淬灭液，振荡摇匀，室温下，将离心管置于旋转混匀仪上30分钟。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。洗涤和贮存偶联后的磁珠-加5mL洗涤缓冲液并剧烈振荡摇匀。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移 弃上清。重复Step 1,三次。-最后一次洗涤后，重悬磁珠于2mL洗涤缓冲液内，此时磁珠的浓度约为5 mg/mL.置于2-8摄氏度保存。Notes偶联时切记不要用有氨基(e.g. Tris)或是羧基的(e.g. acetate, citrate)缓冲液。偶联时，非偶联的吸附无可避免会有一些，这可以通过偶联后的洗涤来去除。延长振荡的时间有利于重悬BioMagPlus磁珠。贮存贮存于2-8 Co冷冻，干燥，或是离心都可能会使磁珠发生不可逆的聚积，影响实验结果。
