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1、FHZDZHS0039 海水 挥发性酚的测定 4 氨基安替比林分光光度法F-HZ-DZ-HS-0039海水挥发性酚的测定 4-氨基安替比林分光光度法1 范围本方法适用于海水及工业排污口水体中低于 10mg/L 酚含量的测定。酚含量超过此值，可 用溴化滴定法。检出限：1.1卩g/L。2 原理被蒸馏出的挥发酚类在 pH10.00.2 和以铁氰化钾为氧化剂的溶液中，与 4-氨基安替比林 反应形成有色的安替比林染料。此染料的最大吸收波长在 510nm 处，颜色在 30min 内稳定，用三氯甲烷萃取，可稳定 4h 并能提高灵敏度，但最大吸收波长移至460nm 。本方法不能区别不同类型的酚，而在每份试样中
2、各种酚类化合物的百分组成是不确定的。 因此，不能提供含有混合酚的通用标准参考物，本方法选用苯酚作为参比标准。来自水体的干扰可能有分解酚的细菌、氧化及还原物质和样品的强碱性条件。在分析前除 去干扰化合物的处理步骤中可能有一部分挥发酚类被除去或损失。因此，对一些高污染海水， 为消除干扰和定量回收挥发酚类，需要较严格的操作技术。干扰物质的消除：氧化剂： 水样中的氧化剂能将酚类氧化而使结果偏低。 采样后取一滴酸化了的水样于淀粉 - 碘化钾试纸上，若试纸变蓝则说明水中有氧化剂。采样后应立即加入硫酸亚铁溶液或抗坏血酸 溶液以除去所有的氧化性物质。过剩的硫酸亚铁或抗坏血酸在蒸馏步骤中被除去。油类和焦油：如水
3、样中含有石油制品等低沸点污染物，可使蒸馏液浑浊，某些酚类化合物 还可能溶于这些物质中。采样后用分液漏斗分离出浮油，在没有硫酸铜存在的条件下，先用粒 状氢氧化钠将pH调节至1212.5，使酚成为酚钠，以避免萃取酚类化合物。尽快用四氯化碳 从水相中提出杂质 （每升废水用 40mL 四氯化碳萃取两次 ）。并将 pH 调到 4.0（见 6.1）。用三氯甲烷萃取时，须用无酚水作一试剂空白，或先用 1g/L 氢氧化钠溶液洗涤三氯甲烷， 以除去可能存在的酚。二氯甲烷可代替三氯甲烷，尤其在用氢氧化钠提纯三氯甲烷溶液形成乳 浊液时。硫的化合物酸化时释放出硫化氢能干扰酚的测定，用磷酸将水样酸化至pH4.0,短时间
4、搅拌曝气即可除去硫化氢及二氧化硫的干扰。然后加入足够的硫酸铜溶液，使样品呈淡蓝色或不 再有硫化铜沉淀产生。然后将 pH调到4.0。铜（n ）离子抑制了生物降解，酸化保证了铜 （H ）离 子的存在并消除样品为强碱性时的化学变化。3 试剂除非另作说明，所用试剂均为分析纯，水为不含酚和氯的蒸馏水。3.1 无酚水置普通蒸馏水于全玻璃蒸馏器中，加氢氧化钠至强碱性，滴入高锰酸钾溶液至深紫红色，放入少许无釉瓷片（浮石或玻璃毛细管亦可），加热蒸馏。弃去初馏份。收集无酚水于硬质玻璃瓶中，或于每升蒸馏水中加入 0.2g经280C活化4h的活性炭粉末，充分振摇后用0.45卩m滤膜 过滤。3.2 三氯甲烷（CHCI3
5、）或二氯甲烷（CH2CI2）。3.3精制苯酚将苯酚（C6H5OH）置于50C70C热水浴中溶化，小心地移入100mL蒸馏水中，用包有铝箔的软木塞塞紧，其中插有一支250 C水银温度计，蒸馏瓶的支管与空气冷凝管连接，用一干燥的锥形烧瓶接受器。如图1所示。电炉加热蒸馏，弃去带色的初馏出液，收集182C184 C馏份（无色）密封避光保存。3.4 盐酸（p 1.19 g/mL）。3.5磷酸溶液，1+9。3.6 硫酸铜溶液100 g/L :称取10g硫酸铜（CuSO4 5出0）溶解于水中并稀释至 100mL。3.7 溴酸盐-溴化物溶液，C（1/6KBrO 3）=0.100mol/L :称取2.7848g
6、无水溴酸钾（KBrO 3）溶于水中， 加10g溴化钾（KBr）溶解后稀释至1000mL。3.8 缓冲溶液，pH 9.8 :称取20g氯化铵（NH4CI）溶于100mL浓氨水（NH 3 出0,卩0.90g/mL） 中。此溶液pH为9.8。3.9 4-氨基安替比林溶液，20g/L :称取2g 4-氨基安替比林C6H5NN （CH3） C （CH3） ： C （ NH2） C: O溶于水中，并稀释至100mL，贮于棕色瓶中，置冰箱内。有效期一周。3.10铁氰化钾溶液，80g/L :称取8g铁氰化钾K3 Fe （CN ） 6溶于水中，并稀释至 100mL。贮 于棕色瓶中。置冰箱内。可稳定一周。颜色变深
7、时，应重新配制。3.11 硫代硫酸钠标准滴定液，C（Na2S2O3）=0.0250mol/L3.11.1 称取6.21g硫代硫酸钠（Na2S2O3 5H2O）用刚煮沸冷却的水溶解，加入约 0.2g碳酸钠 （Na2CO3），待全部溶解后，移入 1000mL容量瓶中，摇匀。移入棕色试剂瓶中。置于阴凉处。其准确浓度用重铬酸钾标准溶液标定。13.11.2 重铬酸钾标准溶，C（K2C2O7）=0.0250mol/L:称取1.2258g预先在110C烘2h的光谱6纯重铬酸钾（KzChO?）,用水溶解，移入 1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。13.11.3 硫代硫酸钠溶液的标定：取20.00mL重
8、铬酸钾标准溶液C （K262O7） =0.0250mol/L61三份，分别置于三个 250mL具塞三角瓶中，加 50mL硫酸溶液C （ H2SO4） =3mol/L , 1g碘化2钾（KI ）,于暗处放置5min。用硫代硫酸钠标准溶液滴定至浅黄色，加1mL淀粉溶液（10g/L ）继续滴定至蓝色刚消失（终点显示三价铬离子的绿色）。记录消耗的硫代硫酸钠溶液的毫升数。同时用水作试剂空白用硫代硫酸钠滴定。按公式（1）计算硫代硫酸钠溶液的浓度：C(Na2S2O3)= C 7 式（1）中：C（Na2S2O3）硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L ;C 重铬酸钾标准溶液的浓度，mol/L ;Vi重铬酸钾标准
9、溶液体积，mL ;V滴定消化硫代硫酸钠溶液的体积（减空白），mL。3.12酚标准溶液3.12.1 酚标准贮备溶液，1.00g/L :称取I.OOOOg精制苯酚溶于水中，移入1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此溶液1.00mL含1.00mg酚。通常直接称取精制的苯酚即可配标准溶液，若为非精制苯酚可按下法标定：移取10.00mL待标定的酚贮备溶液于250mL碘量瓶中，加入 50mL水，力口 10.0mL溴酸盐-1溴化钾溶液C （ KBrO3） =0.100mol/L及5mL盐酸（p 1.19g/mL）,立即盖紧瓶塞，摇匀。避光6放置5min后用硫代硫酸钠标准溶液C（Na2S2O3）=0.
10、0250mol/L滴定至呈淡黄色时，加入 1mL淀 粉溶液（10g/L ）继续滴定至蓝色刚好消失为止，记下硫代硫酸钠标准溶液滴定体积V2。同时用水作试剂空白滴定，消耗硫代硫酸钠标准溶液体积为V1。按公式（2）计算酚标淮贮备溶液的浓度：Pf=zX0.0250 X15.68 X100010(2)式（2）中：p f酚溶液浓度，卩g/mL ;V1试剂空白消耗硫代硫酸钠标准溶液的毫升数，mL ;V2 酚贮备溶液消耗硫代硫酸钠标准溶液的毫升数，mL。3.12.2 酚标准溶液，10.0g/mL :移取10.0mL （或相当于10.0mg酚的体积）酚标准贮备溶液（1.00mg/mL ）于1000mL容量瓶中，
11、用水稀释至刻度，摇匀。此溶液1.00mL含10.0卩g酚，当天配制。3.12.3 酚标准使用溶液，1.001 g/mL :移取10.0mL酚标准溶液（10.0 i g/mL ）于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此溶液1.00mL含1.00i g酚。现用现配。3.13甲基橙指示剂溶液，2g/L。3.14淀粉溶液，10g/L :称取1.0g可溶性淀粉，盛于200mL烧杯中，加少量水调成糊状，加入100mL沸水搅拌，冷后加入 0.4g氯化锌（ZnCI 2）或0.1g水杨酸（C7H6O3）防腐。4仪器设备4.1 分光光度计。4.2蒸馏装置：全玻璃，包括 500mL玻璃蒸馏器和蛇形冷凝管。如图
12、1所示。#图1苯酚蒸馏装置示意图1 10mm或25mm微量蒸馏烧瓶；2空气冷凝管；3250 C水银温度计；4电炉；5铁架后；6 软木 塞；7三角烧瓶（收集苯酚）5试样制备5.1海水样品用玻璃或金属采样器采集，水样现场预处理方法：加H3PO4至pH V 4,每升水样加入2g硫酸铜（CUSO45出0），贮存于硬质玻璃瓶中， 在4C保存。保存时间24h，详见GB17378.3 1998。5.2试样量测定水样用量200mL 06操作步骤6.1水样前处理量取200mL海水样（若酚量高可少量取水样，记下体积V,加纯水至200mL ,置于500mL全玻璃蒸馏器中，用磷酸溶液（1+9）调节pH到4.0左右以甲
13、基橙作指示剂（2g/L），使水样由 桔色变为橙红色。加入5mL硫酸铜溶液（100g/L ）,放入少许无釉瓷片（浮石或玻璃毛细管），加热。蒸出150mL左右时，停止蒸馏，在沸腾停止后，向蒸馏瓶内加入约 50mL水，继续蒸馏， 直到收集馏出液（D）大于或等于200mL为止。若样品已按 5.1条所述的方法加磷酸和硫酸铜 保存，则可直接蒸馏（若水样经稀释则须补加磷酸及硫酸铜溶液）。用磷酸将样品酸化到pH4.0以防止酚类化合物分解加入硫酸铜抑制生物对酚的氧化作用。注1：将水样蒸馏，馏出液清亮、无色，从而消除浑浊和颜色的干扰，铁（山）能与铁氰酸根生成棕色产物而干扰测定，蒸馏将排除这一干扰。注2:测定酚的水
14、样必须用全玻璃蒸馏器蒸馏，如用橡皮塞，胶皮管等联接蒸馏烧瓶及冷凝管，都能使结 果偏高和出现假阳性而产生误差。注3:停止蒸馏时，须防电炉余热引起的爆沸，以免将瓶塞冲起砸碎或沾污冷凝管。6.2工作曲线的绘制移取 0、0.50、1.00、2.00、4.00、7.00、10.00、15.00mL 酚标准使用溶液（1.00 卩 g/mL）， 分别置于预先盛有100mL水的250mL分液漏斗中，最后加水至200mL系列各点含酚浓度分别 为 0、2.50、5.00、10.0、20.0、35.0、50.0、75.0 卩 g/L。向各分液漏斗内加入 I.OOmL缓冲溶液（pH9.8）,混匀。再各加入1.0mL4
15、-氨基安替比林溶 液（20g/L），混匀。力口 1.0mL铁氰化钾溶液，混匀。放置10min。力口 10.0mL三氯甲烷（CHCl 3），振摇2min，静置分层。有机层于波长 460nm处，用三氯甲烷作参比，测定吸光度（AJ和标准空白（A。）。以吸光度（Ai-Ao）为纵坐标，酚浓度（卩g/L）为横坐标绘制标准曲线。注1: pH在8.010.0范围内显示的颜色都可以，但为了防止芳香胺（苯胺、甲苯胺、乙酰苯胺）的干扰，以pH9.8 10.2最合适，因为此范围内 20mg/L苯胺所产生的颜色仅相当于 O.1mg/L酚的颜色。注2: NH4OH-NH4CI体系的缓冲溶液比较稳定，由于增大了溶液NH3的浓度，可以抑制4-氨基安替比林被氧化为安替比林红的反应。注3:游离氯能氧化4-氨基安替比林，还能与酚起取代反应生成氯酚。注4 :主试剂在空气中易变质而使底色加深，此外，4-氨基安替比林的纯度越高，灵敏度越高，如配制的 4-氨基安替比林溶液颜色较深时，可用活性炭处理脱色。注5:过硫酸铵（NH4） 2S2O8可代替铁氰化钾K3Fe
