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1、革兰氏染色液组成规格（10ml）规格（100ml）规格（500ml）结晶紫10ml100ml500ml碘液10ml100ml500ml95%酒精10ml100ml500ml蕃红10ml100ml500ml保质期：2-8度一年.革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，媒染剂碘液进入菌体后与 结晶紫结合，革兰氏阳性菌对碘与结晶紫摄取量多且牢固，不易被酒精脱色。革 兰氏阴性菌对碘与结晶紫摄取量少，不牢固，易被酒精脱色。为观察方便，脱色 后再用一种红色染料如碱性蕃红进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红 色。操作步骤：1、标本处理：（1）.有菌部位的标本，如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直
2、接涂片。（2）.无菌部位的标本，如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等，应取 适量标本（最高可达5-7ml），经3000rpm离心10min.，取沉渣涂片染色。2、涂片制作：菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻 片上涂布；菌落涂片时，先取生理盐水一滴，置玻片上，用接种针挑取菌落在盐 水中涂布。制作的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定的温度不宜过高，以玻 片背面接触手背不烫为准，否则可能使细菌形态改变。将固定后的涂片进行染色。3、染色方法：革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染 为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影
3、响染色结 果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都可能会呈阴性反 应。（1）.加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。（2）.加上碘液后染色1分钟，水洗。（3）.加上95%酒精，摇动玻片，根据涂片厚度,脱色约30-60秒，水洗，吸去水分。(4) .加上蕃红后，染色1分钟，水洗。(5) .吸干或在空气中凉干后，油镜镜检。4. 结果观察：紫色为革兰氏阳性，红色为革兰氏阴性。注意事项：1. 标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。2. 玻片通过火焰温度不能太高。3. 若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。4. 碘液变透明，则不能使用。5. 水洗时动作要轻柔,沿载玻片对角线方向用洗瓶
4、冲洗，以免把菌体冲掉。革兰氏染色液如果用量少，买现成的比较话算，如果用量大，自己配起来也溶液， 就是试剂种类多了点。其配制方法如下：(1)结晶紫(crystal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙 醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL将两液混匀置24h后过滤即成。卢戈(Lugol)氏碘液：碘0.33g，碘化钾0.66g，蒸馏水100mL。先将碘化钾 溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至100mL即成。配成 后贮于棕色瓶内备用，如变为黄色即不能使用。(3) 95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。(4) 番红溶液：番红O(safranine，又称沙黄O)2.5g, 95%乙醇100mL，溶解后可 贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。
