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1、肌糖元的酵解作用目的要求1. 学习鉴定糖酵解作用的原理和方法。2. 了解酵解作用在糖代谢过程中的地位及生理意义。3. 了解有关组织代谢实验应注意的一些问题。原理在动物、植物、微生物等许多生物机体内，糖的无氧分解几乎都按完全相同的过程进行。本实验以动物肌肉组织中肌糖元的酵解过程为例。肌糖元的酵解作用，即肌糖元在缺氧的条件下，经过一系列的酶促反应，最后转变成乳酸的过程。肌肉组织中的肌糖元首先磷酸化，经过己糖磷酸酯、丙糖磷酸酯、甘油磷酸酯、丙酮酸等一系列中间产物，最后生成乳酸。该过程可综合成下列反应式:(1/n)(CHO)+HO 2CHCHOHCOOH 6105n23肌糖元的酵解作用是糖类供给能量的
2、一种方式。当机体突然需要大量的能量，而又供氧不足( 如剧烈运动时) ，则糖元的酵解作用可暂时满足能量消耗的需要。在有氧条件下，组织内糖元的酵解作用受到抑制，而有氧氧化则为糖代谢的主要途径。糖元酵解作用的实验，一般使用肌肉糜或肌肉提取液。在用肌肉糜时，必须在无氧条件下进行; 而用肌肉提取液，则可在有氧条件下进行。因为催化酵解作用的酶系统全部存在于肌肉提取液中，而催化呼吸作用 ( 即三羧酸循环和氧化呼吸链) 的酶系统，则集中在线粒体中。糖元或淀粉的酵解作用，可由乳酸的生成来观测。在除去蛋白质与糖后，乳酸可以与硫酸共热便成乙醛，后者再与对羟基联苯反应生成紫罗兰色物质，根据颜色的显现加以鉴定。该法比较
3、灵敏，每毫升溶液含15ug乳酸即给出明显的颜色反应。若有大量糖类和蛋白质等杂质存在，则严重干扰测定，因此实验中应尽量除尽这些物质。另外，测定时所用的仪器应严格地洗干净。试剂和器材1、 材料 : 鸡或兔的肌肉糜2、 试剂 :1) 1,15mol/L 磷酸缓冲液(pH7(4):2) 对羟基联苯试剂 : 称取对羟基联苯1(5g 溶于 100ml 0.5,NaOH 中，配成 1(5,的溶液。若对经基联苯颜色较深，应用丙酮或无水乙醇重结晶，放置时间较长后，会出现针状结晶，应摇匀后使用。3) 淀粉溶液 :0.5%4) 液体石蜡5) CuSO4 饱和溶液6) Ca(OH)粉末：27) 20%三氯乙酸8) 浓
4、硫酸3、器材试管及试管架; 移液管:5m1、 2m1、 1ml、 0.5ml; 电子天平 ; 滴管 ;玻璃棒 ; 恒温水浴;1沸水浴 ; 漏斗 ; 冰浴 ; 滤纸 ; 量筒 ; 旋涡搅拌器操作方法一、处死动物和制备肌肉糜二、肌肉糜的糖酵解取 4 支试管，编号后各加入新鲜肌肉糜0.5 克。 1， 2号管为样品管， 3， 4 号管为空白管。向3, 4号空白管内加入203氯乙酸4mL,用玻璃棒将肌肉糜充分打 散，搅匀，以沉淀蛋白质和终止酶的反应。然后分别向 4支试管内加入4mL磷酸缓 冲液和1mL0.5%t粉溶液。3, 4管用玻璃棒充分搅匀，加液体石蜡以隔绝空气，并 将 4 支试管同时放入37?恒温
5、水浴中保温。1h后，取出试管，立即向1, 2号试管内各加入20%E氯乙酸4mL充分混匀， 过滤。然后向每管（一次性试管）内加入饱和硫酸铜溶液1mL混匀，再加入0.4克 氢氧化钙粉末，充分搅匀2min,放置10min,使还原糖沉淀完全，过滤，保留滤 液。 三、乳酸的测定取4支洁净、干燥试管，编号，各加入浓硫酸2mL将试管置于冰水浴中冷却，分别取每个样品的滤液2 滴，直接加入到已冷却的上述浓硫酸溶液中，随加随摇动试管，避免试管内的溶液局部过热。将每个试管混合均匀后，放入沸水浴中煮5min,加入对羟联苯试剂2滴，混匀试管内容物，比较和记录各管溶液的颜色深浅，并加以解释。 试管编号1 2 3 4 肌肉
6、糜 0.5g三氯乙酸 4mL 淀粉溶液 各加 1mL磷酸盐缓冲液4mL加液体石蜡封口，37?水浴保温1h三氯乙酸 4ml吸出液体石蜡，取4 支试管过滤，分别取滤液5 毫升饱和CuSO各力口 1.0ml 4Ca（OH粉末 各加0.4克2充分搅拌，振荡2min,静置10min ,过滤另取4支洁净干燥的10ml试管，各加2ml浓HSCS于冰浴中，分别加24入溶液2滴，边加边摇，混匀，放入沸水浴中5min,加入显色液2滴，取出冷却，比较颜色，分析结果2注意事项1. 对羟基联苯试剂一定要经过纯化，使成白色。2. 在乳酸测定中，试管必须洁净、干燥，防止污染，影响结果。所用滴管大小尽可能一致，减少误差。若显色较慢，可将试管放入37?恒温水浴中保温10min,再比较各管颜色。思考题1、人体和动植物体中糖的储存形式是什么 , 实验中如果用淀粉或糖元代替葡萄糖能否证明一定是糖酵解的酶失活吗 ,2、试述糖酵解作用的生理意义。3、本实验的关键环节是什么，应采取什么措施，为什么,4、研究组织代谢实验应注意一些什么问题,5、如果样品管在加入葡萄糖后和空气充分接触，然后再加石蜡封口，实验结果会有不同吗 , 为什么 ,6、糖酵解作用的关键酶是什么, 机体中该酶的活性会受到高能荷的抑制，在本实验中这种情况会发生吗 , 你怎样证明 ,
