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1、凝血酶原时间PT测定作业指导书1. 实验原理凝固法确定量的血浆（50微升）样本经一定时间加温后，加入PT试剂，采用波长660nm的光照射样本，凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定，然后通过标准曲线求出凝血酶原时间，再通过参数计算得出凝血酶原活动度及INR值。2. 标本采集2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右)，静脉采血。2.2 3.8(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml，混匀。3. 标本存放：1小时内(3000r/min15min)分离血浆，室温放置不超过2小时，28保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70不超过6个月），只能冻融1次，在37迅速解
2、冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。4. 标本运输：低温条件下运输。5. 标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作测定。6. 实验材料：6.1 德国Dade Behring Marburg 公司凝血酶原测定试剂，每瓶加4ml蒸馏水溶解(40人份)，未开封试剂28贮存到说明书上有效期，复溶试剂28保存不超过5天。6.2 Dade Control质控血浆.用蒸馏水1ml溶解后放置30分钟，才能使用或分装。复溶后，室温保存2小时，284小时。7. 仪器设备：7.1 仪器名称：Sysmex CA-1500全自动血液凝固分析仪7.2 仪器厂家：日本Sysmex公司7.
3、3 仪器型号：Sysmex CA-15007.4 仪器技术参数：7.4.1 速度：最快检测速度180测试/小时，组合检测约140测试/小时。7.4.2 试剂位：36个，具冷藏功能。7.4.3 样本位：50个，可自动连续添加。7.5 仪器校准程序：7.5.1 校准频率：当方法改变，试剂厂家或试剂型号改变，仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准。7.5.2 校准操作：设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)。8. 操作步骤：8.1 检查前准备：8.1.1 清空废液瓶，清空反应杯抛弃槽。8.1.2 添加足够反应杯(不能超出警告线)。8.1.3 添加清洁液试剂，清洗用蒸馏水等。8.2 开机：
4、先开打印机再开主机，开机后仪器自检，约15分钟，屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”，表示仪器预热完成，进入系统准备工作状态，可进行测定。8.3 输入工作清单：从主菜单选Work List出现第一架样本工作清单输入画面，选ID NO Entry输入第一个样本号按相应实验项目名称键PT，并同时输入此标本的其他测试项目，若选“凝血四项（PT、APTT、Fbg、TT）”，可按Profile #1组合选项选择，选中项目相应位置标记为“”，选完项目后按ENTER确认，要删除某项目时只需按该项目（按键如PT变为PT-）即可，用键，同样输入其他标本编号项目。（快速输入可用Repeat键，输入重复
5、标本数，复制同样项目的输入。8.4 放置样本：按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上，并按顺序把样本架排列于Sampler进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本)8.5 按Start键开始测定：盖好遮光盖，确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示“Ready”)按Start键，进样开始，测定进行，仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为“”，此时可重复8.3，8.4，继续输入其他架样本工作清单，按Rigester，继续确认测试任务，添加样本架继续测试，测定完成，测定项目背景变为“”，打印机打印出测定结果，所有测定清单完成，系统恢复“Ready”状态。8.6 每日
6、维护：完成每日的测定后，关机前维护。8.6.1 冲冼针Rinse Probe8.6.2 清空废液瓶，和已使用过的反应杯。8.6.3 将试剂架连用试剂放入冰箱。8.7 关机：先关主机，再关打印机。9. 检验结果的判断与分析：9.1 仪器测定PT的线性范围在5-600秒，测定完成后仪器显示PT秒数、PT活动度、INR值等参数。若不能对参数进行正确计算，将出现下列信息：.出现错误，不能得到分析数据.不能计算参数.数值超出线性范围.9.2 仪器设定PT参考范围在10-14秒，如果得不到一个正常数值，在数据的左侧将出现下列标记： 出现错误信息 数据高于可报告的高限10. 质量控制：每批样本同时测定两个浓
7、度水平(高值和正常值)的质控品，以2S为警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则详见室内质控作业指导书。11. 临床意义：PT是用于筛查外源性凝血系统（、）及口服抗凝药物剂量（如华发令、双香豆素等）的检测项目。11.1 参考范围：秒数S：10-14 S（患者结果超过正常对照35以上有临床意义）活动度：80-120国际标准化比值INR：0.8-1.511.2 PT延长见于先天性凝血因子、缺乏；低（无）纤维蛋白原血症；获得性见于DIC、原发性纤溶症、维生素K缺乏、肝病、血循环中有抗凝物质（如口服抗凝剂、肝素）。11.3 PT缩短：见于先天性凝血因子V增多、口服避孕药、高凝状态（DI
8、C早期、急性心肌硬塞等）、血栓性疾病（脑血栓形成、急性血栓性静脉炎）、多发性骨髓瘤、洋地黄中毒、乙醚麻醉后。11.4 监测口服抗凝药（如华发令、双香豆素等）的重要指标。一般要求：PT(S)：18-24 S INR：2.5-3.5，不同疾病不同值。12. 变异的潜在来源12.1 抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查12.2 标本采集处理不当，如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力，使标本溶血，造成结果变异。12.3 纤溶药物的影响，如双香豆素、链激酶、尿酶等。12.4 超剂量使用肝素使凝固时间延长。12.5 FDP增加使凝固时间延长。12.6 某些药物，如口服避孕药、雌激素、
9、天门冬酰胺酶、钠络酮等影响测试结果。13. 操作注意事项：干粉试剂及质控血浆溶解13.1 确认溶剂类型，一般溶解液包括：蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定溶解液，必须按说明书要求使用。13.2 溶解时，轻轻转动容器，保证干粉完全溶解，避免剧烈振荡。13.3 复溶后，室温放置5-10分钟方可使用。14. 仪器维护与保养14.1 日常维护（见8.6）14.2 每周维护14.2.1 液路冲洗：仪器在“Ready”状态下，从主菜单按 Special Menu按Maintain按RinsePrepare 按 Execute 键运行此程序完成后按 Return 返回。14.2.2 清洁仪器：定期用擦布擦干
10、净仪器内外，包括试剂槽。14.3 需要时维护：14.3.1 调整压力：仪器在“Ready”状态下，以主菜单按Special Menu按Maintain 按Pressure Adjust 键，显示压力是否在其调整范围内？若不在，则打开仪器右侧相应压力调整旋钮，旋动调整好压力，再锁紧旋钮。14.3.2 更换灯泡：关机从仪器右侧取下灯泡外盖及内盖换上好的灯泡装上内外盖从主菜单按Special Menu再按Maintain按 Calib lamp确认关上遮光盖，按Execute运行调整程序。14.3.3 更换保险管：关机从仪器左侧旋下保险盖更换上好的保险管装上保险管盖。15. 参考文献15.1 叶应妩.王毓三等全国临床检验操作规程第三版，东南大学出版社.15.2 Sysmex公司Sysmex CA-1500操作手册 1998.6修订本.
