各种感受态细胞的特征和用途

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1、1 : DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的A半乳糖苷酶氨基端实现a互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。基因型:F-, $80dlacZ AM15, A(lacZYA-argF)U169 , deoR , recAI , endAI , hsdR17(rk- , mk+) , phoA , supE44 , k , thi-1 , gyrA96 , relAI2: BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如 pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于k噬菌体DE3区,该区

2、整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。基因型:F-, ompT , hsdS (rBB-mB ), gal, dcm (DE3 )3: BL21(DE3) pLysS 菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。基因型:F-, ompT hsdS (rBB-mB ), gal, dcm (DE3 , pLysS , Camr4: JM109 菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行 DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的La

3、cZa多肽和JM09编码的LacZ A M15进行a互补,从而显示A半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株基因型:recA1 , endA1 , gyrA96 , thi 1 , hsdR17 , supE44 , relA1 , A (lac proAB ) /F trD36 , proAB+ , lacIq , lacZ AM155: TOP10 菌株该菌株适用于高效的 DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。基因型:F- , mcrAA(mrr -hsd RMS-mcrBC) ,$80 , lacZ AM15 , lacX 74 , recA1 , ara A139A(ara

4、-leu)7697 , galU , galK , rps ,(Strr) endA1 , nupG6: HB101 菌株该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验基因型:supE44 , hsdS20 (rB-mB ) , recA13 , ara 14 , proA2 , lacY1 , galK2 , rpsL20 , xyl-5 , mtl-1 , leuB6 , thi-1JM110 或 SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dem甲基化酶,前者可以在 GATC序列中腺嘌吟N-6位上引入甲基,后者在 CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。常用

5、的菌株都会产生 dam,dem,从而受到甲基化的影响.部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割,如 Fbal和Mbol等,一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如Xbal, Bell等。而且甲基化只发生在特定序列,以Xbal为例,只有在位点序列旁出现GA或TC ,该Xbal位才会被甲基化。而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:(1) 选用上述酶的同功酶,如 Sau3AI,DNA识别切割位点与 Mbol相同;但不受甲基化影响;(2) 利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备,如E.coli JM110和链霉菌等,前者 Dam和Dcm甲基化酶已

6、敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。E.coli JM110要排除dam,dcm甲基化的影响,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化.各种感受态细胞的区别用途特征XI1-Blue 菌株基因型:endA1 gyrA96(nalR) thi- 1 recA1 relA1 lac glnV44 F Tn10 proAB+ laclq (lacZ)M15 hsdR17(rK mK+)。特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。用途:分子克隆和质粒提取。BL21(DE3)菌株

7、基因型:F -ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB- ) X (DE3 lacl lacUV5 -T7 gene 1 ind1 sam7 nin5) 。特点:该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于X噬菌体DE3区的lacUV5启动子,该区整合于 BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。用途:蛋白质表达。BL21(DE3)ply 菌株基因型:F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB- ) X (DE3) pLysS(cmR)。特点:该菌株带有 pLysS,具有氯霉素抗性。此

8、质粒还有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。用途:蛋白质表达DH5a菌株基因型:F- endAI glnV44 thi- 1 recAI relAI gyrA96 deoR nupG80dlacZ AM15 A(lacZYA -argF)U169, hsdR17(rK- , X-特点:一种常用于质粒克隆的菌株。其80dlacZ AM15基因的表达产物与 pUC载体编码的B-半乳糖苷酶氨基端实现a互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆 DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。JM109菌株基因型:endA1 glnV44 thi- 1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+A(lac-proAB) e14- F traD36 proAB+ lacIq lacZ AM15hR17(rK-mK+)。特点:部分抗性缺陷,适合重复基因表达,可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。

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