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1、本科生科研论文 多花黄精中黄酮的提取工艺研究院 系： 生命与环境科学学院 专 业： 生物科学 多花黄精中黄酮的提取工艺研究 摘要： 分别通过单因子试验和正交实验对多花黄精中的黄酮提取，以黄酮取率作为指标，分别通过对不同料液比，水浴时间，水浴温度以及乙醇浓度这些因素进行考察，从而得出提取黄精主根中总黄酮的最好条件。料液比1:20，水浴时间2h，水浴温度70，乙醇浓度90%。关键词：提取工艺；多花黄精；黄酮；单因素；正交 Study on the extraction technology of flavonoid from taproot of Polygonatum cyrtonema Hua
2、Yang-Yang SUN（20909041043）Supervisor: Xiang-Yang CHEN(Lecturer)(College of Life and Environment sciences, Huangshan University,)Abstract:The experiment was studied for the best extraction technology through single factor and orthogonal experimental extractingtotal flavonoid from Polygonatum cyrtonem
3、a Hua using the flavonoids extraction as an indicator, investigating different solid to liquid than, bath time, bath temperature, and the concentration of ethanol etcfactors. The result showed that the best extraction technology is ethanol concentration 90%, liquid than 1:20,water bath for 2h ethano
4、l concentration 90% water,bath temperature 70.Key Words: extraction technology; Polygonatum cyrtonema Hua; flavonoids;single factor; orthogonal 多花黄精系多年生草本。根茎横生，肥大肉质，近圆柱形，节处较膨大，喜阴湿条件。有数个茎痕，茎痕处较粗大。主要含多糖、低聚糖、黄酮、蒽醌、皂苷、木脂素等化合物，性平、味甘，为滋补上品，具有滋阴润燥、补肾益精、降血脂、降血糖、降血压、提高人体免疫力、抗衰老等功效，在研制新药和开发保健品方面具有广阔前景1。多花黄精其根
5、部中富含的黄酮类化合物即是主要的营养因子，又是药理因子，对人体具有重要的生理保健功效2。研究表明，黄酮类成分有明显的抗溃疡、解痉、抗菌、抗炎、降血压、镇痛、提高雌性激素等生物的生物活性35；有些黄酮类化合物具有利尿和调节血管渗透压的作用，有的具有抑制肿瘤细胞的作用。有关研究表明，黄酮类化合物是一类具有广泛开发前景的天然抗氧剂6，黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性。酸性强弱因酚羟基数目、位置而异7。鉴于黄精的种种药用价值和研究价值，因而本文研究讨论黄酮的最佳提取工艺。目前，我国报道的黄酮有效成分提取方法有有机溶剂提取法、水提取法、超临界萃取法、超声波提取法、酶法等813。为了获得黄精叶中
6、总黄酮提取的最佳工艺，本试验以乙醇提取法对黄精主根中的总黄酮进行提取，以提取温度、提取时间、料液比、乙醇浓度为考察因素，用分光光度法测定总黄酮含量为指标，利用单因素的方法分析对多花黄精主根总黄酮提取率的影响，以选择出最优的提取条件1416。2 材料仪器和试验过程2.1. 1 材料的准备和处理 多花黄精根采摘于5月下旬，采摘后清水洗净，剔除泥沙，放入烘箱60烘干2h后温度调至105放置12h至恒重,用粉碎机碾碎，过孔径2mm筛，保存备用。 2.1.2 试验试剂芦丁为生化试剂，西安惠丰生化厂生产；95%乙醇，武汉市雪环医用消毒品有限公司生产；氢氧化钠、硝酸铝均为分析纯，湖北大学化工厂生产；亚硝酸钠
7、为分析纯，武汉江北化学试剂厂生产。2.1.3 试验器材HH-4恒温水浴锅(南通华泰实验仪器有限公司产品)，RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣有限公司产品)，粉碎机（上海康仪仪器有限公司产品），UV784型紫外可见分光光度计（上海天普分析仪器有限公司产品），BS-110S型电子天平(北京赛多利斯天平有限公司产品)，DHG29146A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司产品)。2.2 试验过程 2.2.1 标准曲线的绘制取干燥至恒重的芦丁50mg，置于25ml容量瓶中，加75%乙醇使之溶解并定容至刻度。取上述溶液10ml，置于100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀即的芦丁标准液。分别准
8、确吸取芦丁标准液0ml，1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml置于25ml容量瓶中，各加水至6ml，再加5%亚硝酸钠1ml，摇匀放置6min；然后加10%硝酸铝1ml，摇匀放置6min；然后加4%氢氧化钠10ml，用蒸馏水定容止刻度，放置15min。最后（以蒸馏水作空白）在紫外分光光度计波长510nm处分别测定吸光度记录在表（表2-1），再以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制表格如表2-1所示，由表2-1绘制标准曲线如图2-1所示。表2-1 标准曲线表编 号0123456芦丁溶液浓度（mg/ml）00.0080.0160.0240.0320.0400.048吸光度（OD）00.11
9、00.2850.3760.4950.5910.680 图2-1 芦丁标准曲线图2-1所示标准曲线方程：y=14.268X+0.026,R=0.9910,R0.995（R为绝对系数，R为相关系数）其吸光度A与芦丁浓度C呈现良好的线性关系，该数学模型能反映实际试验结果。 2.2.2 单因子试验 每次试验均取5g黄精根粉末于五支试管中,即每支试管1g。以乙醇浓度、水浴温度、水浴时间、料液比四个因子按照单一变量法则得出变量因子最适范围。按下图表2-2，表2-3，表2-4和表2-5中依次编号。 表2-2 乙醇浓度的选择试验实验条件试管编号2.12.22.32.42.5乙醇浓度75%80%85%90%95
10、%水浴温度7070707070水浴时间2h2h2h2h2h料液比1:201:201:201:201:20 表2-3 水浴温度选择的试验实验条件试管编号2.12.22.32.42.5乙醇浓度75%75%75%75%75%水浴温度4050607080水浴时间2h2h2h2h2h料液比1:201:201:201:201:20 表2-4 水浴时间选择的试验 实验条件试管编号3.13.23.33.43.5乙醇浓度75%75%75%75%75%水浴温度7070707070水浴时间1h1.5h2h2.5h3h料液比1:201:201:201:201:20表2-5 料液比的选择试验实验条件试管编号4.14.2
11、4.34.44.5乙醇浓度75%75%75%75%75%水浴温度7070707070水浴时间2h2h2h2h2h料液比1:51:101:151:201:25加热过程中充分摇匀，使总黄酮充分的溶于乙醇溶液中。到时间后，取出试管，过滤后得到滤液，将滤液置于旋转蒸发仪上进行蒸干处理，烘干后溶于乙醇溶液中倒入50mL的容量瓶中，滴定至刻度，混合均匀后用移液枪移取0.1mL的溶液，置于25mL容量瓶中，加水至6mL，加5亚硝酸钠溶液1mL，混匀，放置6min，加10硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min，加10氢氧化钠试液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min，待测。采用分光光度发在510nm处测定
12、其吸光度。 2.2.5 正交试验在单因素的基础之上选择不同的乙醇浓度，水浴时间，水浴温度和料液比时间四个因素作为条件进行正交实验，试验情况见表2-6。表2-6 正交试验各因素的条件试验号因 素A乙醇浓度B料液比C提取时间D提取温度185%1:151.5h65285%1:202.0h70385%1:252.5h75490%1:152.0h75590%1:202.5h65690%1:251.5h70795%1:152.5h70895%1:201.5h75995%1:252.0h65加热过程中充分摇匀，使总黄酮充分的溶于乙醇溶液中。到时间后，取出试管，过滤后得到滤液，将滤液置于旋转蒸发仪上进行蒸干处
13、理，烘干后溶于乙醇溶液中倒入50mL的容量瓶中，滴定至刻度，混合均匀后用移液枪移取0.1mL的溶液，置于25mL容量瓶中，加水至6mL，加5亚硝酸钠溶液1mL，混匀，放置6min，加10硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min，加10氢氧化钠试液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min，待测。采用分光光度发在510nm处测定其吸光度。3 试验结果与分析3.1 单因素试验3.1.1 乙醇体积分数对多花黄精黄酮提取效果的影响在提取温度70，提取时间2h，液料比1：20的条件下，分别选取乙醇浓度为75%，80%，85%，90%，95%对材料进行提取。过滤后将滤液定容至25ml，取0.1ml测定其黄酮含量，结果如图3-1所示。图3-1 乙醇浓度对多花黄精总黄酮提取效果的影响 由图3-1可知乙醇浓度在75%到90%时吸光度呈现上升趋势，但当乙醇浓度超过90%，吸光度便开始下降，可见在乙醇浓度到达90%的时候对于总黄酮的提取达到一个峰值。故在实际操作过程中应以乙醇浓度90%为宜。 3.1.2 提取温度对多花黄精总黄酮提取效果的影响 在提取时间2h，乙醇浓度75%，液料比1：20的条件下选取温度为40，50
