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1、3定义和简介31 定义所有的大肠菌群均是发酵乳糖，革兰氏阴性,无牙孢的杆菌。官方的对大肠菌群的定义可能以培养温度（3、2、5、7)不同作评价；或以确定是否发酵乳糖产气作为定义的一个特征大多数I和其他官方标准是利用发酵乳糖产气作为一个定义特征。而在IO4 中则利用了在VR上的菌落大小作为其唯一的定义特征。鉴于这些定义的不同,建议实验室根据相关定义用相应的适当方法。l 国际标准：样品分析是否符合国际交易规范l 官方主市场调整定义:样品分析是否符合地方标准l 一般定义:样品分析是否符合一般规范。任何必要方法的调改必须通过市场实验室质量确认中心和雀巢研究中心食品安全微生物组的协助。以下为一些官方定义例
2、子:IS 431大肠菌群是通过其在选择性肉汤上的生长和发酵乳糖产气能力来定义AOC INTERNATIOAL， APHA/F定义大肠菌是指发酵乳糖产酸产气(T=2或5度）革兰氏阴性杆菌*IO 483大肠菌群定义是根据其在VRBaar(30or353度)的菌落大小（最小mm直径）和产酸情况。（T=30或3或3）3.。1 液体培养基中S 831大肠菌群是根据其在选择性肉汤中生长能力和发酵乳糖产气情况来定义。（T=0或35或37)AOAC INTEMATIONA，APA/FA中大肠菌群是指发酵乳糖产酸产气革兰氏阴性杆菌.（32或35）由LI第一章概述,大肠菌群是指发酵乳糖气微生物群.3。1.2 固体
3、培养基中IO 483大肠菌群定义是根据其在RBLagar（30or3or37度)的菌落大小(最小5m直径）和产酸情况。（=0或3或37)A INTMAIONL，AHA/A中大肠菌群是指发酵乳糖产酸产气革兰氏阴性杆菌。基于以上定义可知大肠菌群在VBL培养基上会形成5mm以上直径的红色菌落且在确认试验中发酵乳糖产气由I第二章概述，大肠菌群是指在RBL琼脂培养基上会形成特征性菌落且在确认试验中发酵乳糖产气微生物群.3 简注BGLB：亮绿乳糖胆盐培养基肉汤LT:月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤MPN：最可能数VBL：紫红胆汁琼脂4安全防范 大肠菌群不表现为无害，注意实验室的良好操作。5 参考资料51 LIs中
4、提到的及其它心要文件LI-000LI0。70I074322参考书目*美国公共健康协会(198).日用品检验标准，华盛顿。DCrc N (199).Reseh oeQSTN96001： Dectioof coiformslnprovemnt oLSColwellN。D.andM.D. ioiolical thniuesSm tistica apects.J.ScFd。Agc_0(99)573-579IS 8：991：MicrobilgyGeealuidace for th enuationofcolfom-Mosprobabl nmertechiqu。*O 481：1991:icrobilogG
5、enealgidnce for theenumeaion ofolifrs Colonycount tecnque。*Merk MrbiologyMaual 2002 *US(1995）ctriolicalAalticalManu，8t Ed AOAC intenational， aiteresurg，D,pp 4。01-4.26 前面说法之修正完整修订本额外细节在大肠菌群计数、定义和分离改编中提供。7方法认可审批人签名日期编写者组领导部门领导TQM 附1安全说明概述大肠菌群的研究与举例第一章液体培养基中的生长研究1方法原理接种至原倍或稀释后的选择性培养基中,0培养2448小时，再通过转接阳性
6、管进确认.摘要根据大肠菌群相应用的不同定义选用不同的培养温度（30/2357）(查阅定义）2 培养基的准备在使用化学药品前查阅Sgma/Aldrih化学药品安全指南或其它相应手册或地方权威提供的安全数据表。认真阅读附中的安全说明。更多的安全信息可从NE/QS中获得.2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）根据制造商说明配制培养基,如是非成品干粉则可按以下方法配备（L)单倍料(g) 双倍料(g）胰蛋白胨 20。0 00乳糖 50 10。0 磷酸二氢钾 27 5。5磷酸氢二钾 2.75 .5氯化钠 5.0 00 月桂硫酸钠 1 0,2 蒸馏水 100l 100l PH6.670（)将以上化合物水中
7、溶解，必要时可以加热，调整PH单倍料分装到1160mm的试管中每管0ml双倍料分装到18*180m的试管每管10ml121，15分钟灭菌为了避免月桂硫酸钠沉淀，LS室温贮藏不应超过星期。注意由于样品引起高百分比的假阳性，也就说气体的产生是由于其它微生物而非大肠菌群.在LS肉汤灭菌后加入无菌梭链孢酸或万古霉素,最终浓度为1毫克每毫升。22 亮绿乳糖胆盐肉汤（BL）蛋白胨 0.乳糖 00 脱水牛胆苯 20煌绿 00133 蒸馏水 1000mlPH70-7。（25)将以上化合物水中溶解,必要时可以加热,调整P， 分装到带有小试管的16*160m的试管中每管0ml,灭菌后小试管中不应含有气泡。3 化学
8、药品与材料商业参考仅供指导，列在页边提到的或是莫克化学药物和试剂目录或是002莫克微生物手册或是雀巢实验室材料。化学药品1310 微生物煌绿1083 KH2PO pa.K2HPO4 nyouR梭链孢酸钠盐 Sa F 081Mananase solutio, No Nrdik KHNO101a淀粉酶，Termayl 21 Nvozyes04 氯化钠,.a。1075微生物一水乳糖1123 生物化学月桂基硫酸钠822187 万古霉素氢化物，simaV2002。2 药品和准备1.03756干纯微生物牛胆苯1。0554BGLB或oid M311.721 胰蛋白胨1.10213 微生物胰蛋白。126 LS
9、或Oxod M 4 或Difc 02413.3 器材11601试管，直径或16mm,长160mm11603平口试管17/8mm长80mm1160 平口试管，聚丙烯,1mm长100m100发酵试管，圆底，纵切 m长28m25801 发酵试管,聚丙烯,1mm长5m9213 调整到3培养,如eraes B61204 样品样品处理根据产品相关标准或说明根据L-0700或L1S细节取适当用量选恰当方法处理样品。5步骤51样品的准备样品的准备与稀释在L1。700中有说明注意在从第一个稀释度（1）的准备到最后的分析不超过5分钟2样品准备-特别事项5。1 谷物和面粉类制品用100ml蒸馏水溶解5g淀粉酶，过滤
10、灭菌并加0ml到80ml无菌的TS中.52.2稠化1ml甘露聚糖酶加99lS溶解，过滤灭菌注意加入的甘露聚糖酶体积可以增加到3l，以促进诸如藻酸盐、果阿胶、黄原胶特殊稠化剂的溶解。.2。3卵磷脂灭菌前加ml到80至9ml的TS中,第一个稀释度充分混匀。52. 含脂肪较多的食品（20脂肪含量）灭菌前加l到8至9l的TS中,第一个稀释度充分混匀。5.2酸性或类酸性产品第一稀释度P低于6.的，用1N的氢氧化钠调至PH65-705。.6婴儿食品根据样品类型要求，如ML.0和CP0874中所述，称取1产品到9ml中，在宽颈瓶里稀释。将产品喷洒到该溶液上,放置10分钟,通过慢慢旋转瓶子将湿润、溶解.如有必
11、要，40以下水浴分钟同时轻轻震荡散热，然后室温放置。如果其他类型样品要求，可适当调整TS用量。5.2.7植物乳用LST加万古霉素.加过滤灭菌后的万古霉素稀释至最终浓度0g/5。 接种转接1m第一个稀释度或0ml原液体样品到0ml双倍LST料液（1）稀释液和之后的稀释接到10ml单倍LT培养液中小心混匀接种液与培养液5。4培养所有的双倍和单倍LT试管0培养2和48小时注意如果是婴儿食品分析，LST肉汤必须在371培养24和48小时5 观察2和8小时后检查各试管,有产气或变浑浊的均认为是假定大肠菌群.大肠菌群的存在应该在这些管中确认。5确认每支产气或浑浊管转接一环到L肉汤30培养。如果此阶段气体形
12、成无法观测则再培养24小时.24或48小时培养后对每个稀释的阳性管数第一时间统计。注意对于婴儿食品，LS假定阳性管要在VRB上进行划线培养，用于如10.74-上所述进行后续鉴定6结果描述6。1 计算仅计算大肠菌阳性管并将结果表述如下：出现或不出现测试：基于阳性管确认数，根据所做稀释度计算，并表达为：每克或每毫升分析样出现或不出现大肠菌。（见L100.0)最大可能数（MPN）：根据L100。700计算大肠菌确认数.6.2方法的精确度如果是MPN,其结果必须考虑到置信度的限制。第二章固体培养基中的举例应用方法原理倾注法接种到BL琼脂培基上,并做适当的稀释度。0培养0至4小时.列举特征菌落。注意根据所提供的不同的大肠菌群的定义选择不同的培养温度。2试剂与器材21脂红胆汁乳糖胆盐VRBL根据制造商说明准备培养基，如非干粉成品，按以下方法配置蛋
