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1、货号: QS1007规格：50 管/48 样乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase, ADH）活性测定试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义：ADH 是生物体内短链醇代谢的关键酶，催化乙醇与乙醛可逆转换，在很多生理过程中起着 重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成，肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高 低反映了肝功能是否异常。测定原理：ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+，NADH在340nm处有吸收峰，而NAD+没有；测定 340nm 吸光度下降速率，来计算 ADH 活性。自备实验用品及仪器：研钵、冰
2、、低温离心机、紫外分光光度计、ImL石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。试剂组成和配制：试剂一：液体XI瓶，室温保存。试剂二：液体XI瓶，4C保存。临用前把试剂三转移到试剂二中，4C保存。试剂三：粉剂XI支，一20C保存。试剂四：液体XI瓶，4C保存。粗酶液提取：1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1： 510的比例（建议称取约0.1g组织， 加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000g,4C离心20min，取上清置冰上待测。2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为5001000： 1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w
3、，超声3秒，间隔7秒，总时 间3min）； 16000g，4C离心20min，取上清液置冰上待测。3、血清等液体：直接测定。ADH 测定操作：1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。2. 试剂二在25C水浴中保温30 min。3. 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100L蒸馏水、800L试剂二和100L试剂四， 迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。 A 空白管二A1-A2。4. 测定管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100 L 上清液、 800 L 试剂二和 100 L 试剂四， 迅速混匀后于 340n
4、m 测定吸光值变化，分别记录 15s 和 75s 时吸光值，分别记为 A3 和 A4。 A测定管=A3-A4。注意：空白管只需测定一次。计算公式：（ 1）按照蛋白浓度计算 活性单位定义：25C中每毫克蛋白每分钟氧化1mol NADH为1个酶活单位。ADH （p mol/min/mg prot） =（A 测定管-AA 空白管）F -FdXV 反总 X106】F（CprXV 样）FT=1.61X（AA测定管-AA空白管）FCpr（2）按照样本质量计算活性单位定义：25C中每克组织每分钟氧化1p mol NADH为1个酶活单位。ADH （p mol/min/g 鲜重）二（AA 测定管-AA 空白管）
5、三 FdX V 反总 X106 F（WX V 样FV 样总）FT=1.61X（AA测定管-AA空白管）FW（3）按细胞数量计算活性单位定义：25C中每104个细胞每分钟氧化1p mol NADH为1个酶活单位。ADH （p mol/min/104cell） = （AA 测定管-AA 空白管）三 FdX V 反总 X106 F（细胞数量 XV样FV样总）FT=1.61X（AA测定管-AA空白管）F细胞数量（4）按液体体积计算活性单位定义：25C中每毫升血清每分钟氧化1p mol NADH为1个酶活单位。ADH （p mol/min/mL） = （AA 测定管-AA 空白管）三 FdX V 反总 X106 FV 样FT =1.61X（AA测定管-AA空白管） : NADH摩尔消光系数，6.22X 103L/mol/cm； d：比色皿光径，1 cm； V反总：反应体系总体 积，1000p L=0.001 L； Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； V样：加入反应 体系中上清液体积，100p L=0.1 mL； T：反应时间，1min。注意事项：1. 上清液蛋白质浓度需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。2. 配制好的试剂二3天使用完。
