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1、鲜乳中抗生素残留检验张志诚 060409123（常熟理工学院，苏州 常熟，215500）摘要：利用TTC快速检测法对牛奶中抗生素检测结果进行比较分析，根据检测结果认为样品牛奶中不含青霉素G类抗生素。 关键词：牛奶；抗生素残留；TTC；青霉素GAbstract：The TTC method is used to detect the antibiotic residue in milk.According to test results,theres no Penicillin-G class antibiotic residue.Key words：milk; antibiotic resid
2、ue; TTC method; Penicillin-G class antibiotic知识研究+引言 随着人们对食品安全问题的逐步关注长期饮用抗生素残留超标乳制品可能引起的菌群失调、产生耐药性。该问题已引起消费者和乳品生产企业的高度重视。虽然我国生鲜牛乳收购标准中并未对抗生素残留作出要求。但绝大部分乳品生产企业在原料乳收购环节都已开展抗生素残留检测工作。本文利用TTC法(嗜热链球菌抑制法)对牛奶中抗生素残留进行检测。1.原理类别名称CAS最大残留限量MRL-内酰胺类磺胺类四环素类氨基糖苷类大环内酯类氯霉素类氟喹诺酮类头孢氨苄青霉素G阿莫西林磺胺二甲嘧啶土霉素链霉素红霉素氯霉素恩诺沙星156
3、86-72-269-57-861336-70-757-68-12058-46-03810-74-0114-07-856-75-793106-60-61004410010020040不得检出100TTC法，即氯化三苯基四氮唑法(tripheye tetrazolium chloride)，是目前我国食品卫生标准中规定的检查牛乳中抗生素残留的检测方法 (GB540985)。样品经80杀菌后加入嗜热链球菌菌液。培养一段时间后加入TTC( 2,3,5-氯化三苯四氮唑），若样品中不含抗菌素或其浓度低于检测限，试验菌繁殖，TTC被还原，试验溶液变成红色。相反样品中抗生素浓度高于检测限时，试验菌不发育，TT
4、C不能还原，试验液为无色状态。根据待测牛奶的着色情况判定是否有抗菌素存在。该法简便、快速，无需特殊设备，2h3 h可见报告。检测各种抗生素所用的TTC法试验的灵敏度(最低检出量)分别为：青霉素0004UmL，链霉素05 UmL，庆大霉素04 UmL，卡那霉素5 UmL。2.材料和方法2.1 材料恒温水浴锅：361；无菌移液管：1ml，10ml；无菌试管：18mm*180mm；待测样品2；菌种：嗜热链球菌；阴性、阳性对照；4%TTC（2,3,5-氯化三苯四氮唑）水溶液；青霉素G参照溶液。2.2 方法2.2.1 活化菌种取一环嗜热链球菌菌种，接种在9ml灭菌脱脂乳中，361恒温培养1215h，置2
5、5冰箱保存备用，每15d转接一次。2.2.2 测试菌液将经活化的嗜热链球菌菌种接种灭菌脱乳，361培养151h，加入同体积灭菌脱脂乳混匀稀释成为测试菌液。2.2.3培养取样品9ml，置18mm*180mm试管内，每份样品另外做一份平行样。同时再做阴性和阳性对照各一份，阳性参照用9ml青霉素G参照溶液，阴性用9ml灭菌脱脂乳。所有试管置802水浴加热5 min。冷却至37以下。加入测试菌液1 mL，轻轻旋转试管混匀。36水浴培养2 h。加质量分数为4的TTC水溶液0.3 mL。在涡旋混匀器上混合15 S或振动试管混匀。361水浴避光培养30 min观察颜色变化 如果颜色没有变化于水浴中继续避光培
6、养30 min最终观察。观察时要迅速避免光照过久出现干扰。3.判断方法加菌液，36水浴2h802水浴加热5 min冷却至37以下样品9ml36水浴30min微红色不显色结果可疑，重新检测加TTC指示剂，36水浴30min红色不显色抗生素残留阳性抗生素残留阴性结果报告鲜乳中抗生素检验流程图在白色背景前观察，试管中样品呈乳的原色时。指示乳中有抗生素存在，为阳性结果。试管中样品呈红色为阴性结果如最终观察现象仍为可疑，建议重新检测。4.结果与分析4.1 报告样品管均变为红色，抗生素残留阴性。4.2 分析以上实验结果表明，该方法操作简便易行，而且前处理方法简便，检测结果准确可靠。最终观察时，样品管、阴性
7、对照均变为红色，但阳性样也呈现微红。经各组对比发现多数人试验后阳性管变红，也有阳性管保持不变的。经推测可能原因为阳性样未摇匀或青霉素G含量较低造成的。4.3 讨论目前国内外普遍采用的检测牛乳中抗生素残留的方法主要分为微生物测定法、理化检验法和免疫检测法。本次试验采用的TTC法属于微生物检测法，其他还有SNAP法，色谱法、ELISA法等。牛奶及奶制品中的抗生素问题一直是一个敏感的话题，国际和国家标准中已做了明确规定。但是现实生产环节中，抗生素残留问题的确存在，且潜在的危害着广大消费者的健康。这就要求我们今后大力开发非抗生素类添加剂；建立和完善快速有效的检测方法；行业内严格按照标准收购、生产、销售
8、牛奶及奶制品，杜绝不符合标准的奶流人市场；提高我国奶品的质量，符合WTO的质量技术要求，提高奶品企业自身产品的竞争力，促进我国奶业向国际化方向发展。参考文献1王宏博牛奶中抗生素残留的危害及检测方法的研究进展J畜牧与饲料科学，2010，3I(4)：158-160 2郑淑容牛奶中抗生素残留的危害及对策J中国奶牛，2010(3)：48-50 3赵少华乳品中抗生素残留的风险及检测J食品安全导刊，2009(1)：50-51 4董曙光牛奶中抗生素残留的危害及控制措施J畜牧与饲料科学，2008(4)：65-66 5GB/T 691486生鲜牛乳收购标准s 6王文辉. 牛奶中抗生素残留快速检测方法分析J.中国乳品工业.2011,39(7),53-54.
