大鼠肝纤维化模型的制备

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1、中文摘要目的本文通过对SD大鼠腹腔注射四氯化碳以诱导大鼠肝纤维化动物模型。方法取15只SD大鼠，180220g，分为A组10只，B组5只，A组为模型组：40%CCL4橄榄油混合液按0.12ml/100g腹腔注射，一周两次，共八周。B组为对照 组：纯橄榄油按0.12ml/100g腹腔注射，一周两次，共八周，八周后，禁食2小时 处死全部大鼠，解剖取肝组织。病理学检测HE染色，MASSON染色,PAS染色。基因学检测：1.3.4型胶原蛋白结果八周试验期间B组大鼠全部存活，肝组织标本结构清晰，无异常情况A组大鼠出现明显的病态，肝组织标本均已达到肝纤维化S3以上，多数标本可见小叶被 纤维结构分割包围，假

2、小叶形成，干细胞可见脂肪变性；结论该方法肝损伤明显，死亡率低，周期短，能够成功作为慢性肝损伤，肝纤维化 的模型。关键词肝纤维化，四氯化碳，动物模型AbstractObjective: Established animal model of hepatic fibrosis in rats induced by carbon tetrachloride.Methods: Take 15 SD rats,180-220g, divided into 10 group A, group B 5 只，A group of model group: 40% CCL4 0.12ml/100g by abd

3、ominal injection of a mixture of olive oil, twice a week, a total of eight weeks. Group B was the control group: pure olive oil press 0.12ml/100g abdominal injection twice a week, a total of eight weeks, eight weeks later, all rats were fasted for 12 hours were sacrificed, dissected liver tissue. Pa

4、thology: HE staining, MASSON staining, PAS staining. Genetics testing: 1.3.4 collagenResults: During the eight-week test group B rats survived, liver tissue specimens clear structure, no exceptions; significant morbidity A rat liver tissue fibrosis S3 have reached above, the majority of samples are

5、split fiber structure visible lobular surrounded pseudo lobule formation, stem cell degeneration visible fat.Conclusion: This method obviously liver injury mortality, the period is short, to be successful as chronic liver damage, liver fibrosis model.Key words: Fibrosis, carbon tetrachloride, animal

6、 model刖言肝病包括1.慢性病毒性肝炎2.药物性肝炎3.中毒性肝炎4.脂肪肝5.酒精肝6.肝硬化7.肝肿瘤8.肝胆结石9.肝囊肿大多数肝病伴随着肝纤维化， 肝纤维化是威胁人类健康的常见疾病，是各种慢性肝病最重要的病理特征，是 发生肝硬化的病理基础，也是原发性肝癌发病的危险因素之一。肝损伤是各种 肝脏疾病的病变结果，对肝损伤的防治目前仍是一个严峻的课题。通过建立实 验性肝损伤动物模型，研究肝病的发生机制，筛选保肝药物，探索保肝作用原 理，具有重要的现实意义。现将近年来国内外对实验性肝损伤动物模型分类、 作用原理、造模方法及其优缺点等研究进展作综述和探讨。慢性肝病大多数都 有肝纤维化，其中25

7、%40%最终发展成肝硬化乃至肝癌。我国是肝病大国， 每年为肝病支出巨额的医药费，因此研究肝病的发生发展已成为医药科研工作 者的迫切工作，建立高效，稳定的动物肝纤维化模型是进行研究的重要前提。 科研过程中选择一个与人类疾病特征相似的动物模型是最为重要的它是科研 工作能否成功以及有无科研价值最起码的基础之一。理想的肝纤维化模型病理 改变呈阶段性，具有可逆与不可逆的阶段性演进过程，与人类疾病所致纤维化 的形态特点一样，模型动物的表现符合中医“证”的特征，且造模方法简单， 模型形成率高，重现性好。因为肝纤维化的病因多样性、以及动物与人种属差 异，理想的肝纤维化动物模型的建立是临床研究和实验研究中的一个

8、难点尚 需进一步深入研究迄今为止，能完全反应人类肝纤维化的动物模型尚未完全 取得成功。这就要求科研工作者充分了解各种类型模型的特，地前人实验基础 上积极探索,寻找理想的肝硬化动物模型 并在具体工作中充分考虑肝纤维化 形成过程中的病因和机制、人与动物的物种差异、造模动物的自然恢复率等多 种因素 选择最为合适的动物模型。肝纤维化表现为肝内细胞外间质成分过度异常地沉积，并影响肝脏的功能， 是慢性肝病发展到肝硬化必经之阶段。现认为肝纤维化尚有逆转至正常的可能， 而肝硬化则否。目前研究的重点放在分子与分子、分子与细胞及细胞与细胞间的 相互作用方面阻断肝纤维化成为慢性肝病治疗中一个关键问题。建立肝纤维化动

9、 物模型是肝病研究中的一项重要课题。肝纤维化是肝损伤后的修复反应，涉及复 杂的细胞及分子机制，是肝硬化的必经阶段。选择与人类相似的肝纤维化动物模 型不仅是深入研究肝纤维化发病机制的重要基础，也是筛选防治肝纤维化药物的 有效手段。随着人们对肝纤维化的认识不断深入，有效的防治肝纤维化已成为可 能。四氯化碳(CCl4)是经典的诱发肝纤维化的一种肝毒性物质，法多用于研 究肝纤维化发生机制、血清学标志物与组织病理的相关性及抗纤维化药物的筛 选。四氯化碳(ccl4)进入动物体内后，可直接进入肝细胞，经线粒体单加氧酶 (P4502E1)系统代谢，代谢过程中产生三氯甲基和二氯甲基过氧化物。这些自由 基启动脂质

10、过氧化反应，使细胞及细胞器膜性结构严重破坏，造成肝细胞变性、 坏死。长期给予ccl4可造成肝纤维化、肝硬化。通过四氯化碳制备肝纤维化模 型的途径有口服、腹腔注射、皮下注射。其形成肝纤维化的时间依据大鼠种系、 给药途径、用药剂量的不同而有差别。文献综述如何制备与人类肝纤维化相似的动物模型，不仅是深入研究肝纤维化及肝硬化发 病机制的重要基础。也是筛选防治药物的有效手段。本文重点讨论制备大鼠纤维 化动物模型的不同研究方法及原理。并评述了 CCL4模型的优缺点与应用范围。 不同造模方法制备的肝纤维化动物模型各具特点，选择最为合适的动物模型。 肝纤维化研究是当今医学研究领域的热点难点之一，该病涉及到诸多

11、复杂的致病 因素及细胞功能和分子机制。研究表明，肝纤维化这个阶段是可逆转的，因此， 阻断肝纤维化已成为目前肝病研究的热点之一。然而建立一个能反映人肝纤维化 的动物模型一直是科学研究中的难点，建立一个能反映人肝纤维化的动物模型应 该考虑到许多方面，构建一种稳定、可复制、便捷和仿真性强的肝硬化动物模型 是研究的必要条件.一化学性肝损伤模型CCl4毒性肝纤维化动物模型制备是一种经典的造模方法。CCl4是一种选择性 肝脏毒性物质，国外早在2O世纪3O年代即开始用CCl4作为实验性肝损伤的材 料。高浓度的CCl4主要累及动物中枢神经系统，低浓度长期反复染毒则易损害 肝、肾CCl进入动物体内后，可直接进入

12、肝细胞，使肝细胞变性、坏死，诱导 4肝纤维化的形成。造模途径多样、简便、病理特征稳定可靠、造模时间短， 已广泛用于研究肝纤维化发生的细胞及分子机制、血清学标志物与组织病理的相 关性及抗纤维化物质的药效评价。1.四氯化碳法制备大鼠肝纤维化模型CCl4油溶液按2m1/kg体重剂量，予SD 大鼠腹腔注射，每周2次，共8周。宋健等2采用6O CC1橄榄油溶液给 雌性SD大鼠以0.13ml / 100g体重皮下注射，每周2次，共12周。该模 型制作方法简单，肝纤维化病变过程可靠.2.四氯化碳复合法制备大鼠肝纤维化模型孙敬方等3SD大鼠，用405OCCl4 油溶液按每百克体重0.13 ml的剂量，给大鼠皮

13、下注射，每周2次。第2周开 始隔日以2030乙醇lml灌胃。饲料中混有0.5胆固醇低胆碱饲料，连续8 周。该模型可靠且复制时间短，肝纤维化进展稳定，适合于以引起肝细胞损伤为 始动机制的肝硬化发生发展过程的动态研究。甲基亚硝氨(DMN)诱导肝纤维化大鼠模型二甲基亚硝氨具有肝毒性、基因毒性和免疫毒性。大鼠染毒后致肝内小叶炎 性细胞浸润，出血性坏死。在肝内形成中心一中心纤维间隔或中心一门脉性 纤维汪国运等用SD大鼠按10 mg/kg体重的剂量，给予1 DMN生理盐水稀释液， 腹腔注射共10次。第1周连续3次，第2、3、4周各1次，第6、7周各连 续2次。刘成等以体积分数为0.05浓度DMN，剂量为l

14、0/d/kg体重腹 腔注 射Wistar大 鼠，每周连续3次，共4周，第1周用2/3量，以后用全量。 George等给大鼠腹腔注射DMN每周3次，连续3周，第17天可见肝小叶坏死及 嗜中性细胞浸润，21天可见胶原纤维沉积，胆管增生。本模型造模周期短，大 鼠死亡率低，肝纤维化形成相对稳定。吴丽等在评价药物对伴有凝血障碍，纤 溶亢进的慢性肝病致纤维化的防治效果时，采用DMN肝纤维化模型尤为合适。 另外该模型还用于研究不同细胞外基质的产生部位、评价肝纤维化血清标志物的 可靠性等。四氯化碳(CCl4)诱发的肝纤维化模型 CCl4是实验室最早使用诱发肝纤维 化的毒剂.如Cameron曾给大鼠每周2次皮下

15、注射0.1mLCCl4第六次注射后可见 肝纤维化；注射21次后肝硬化已甚为明显，但停止注射后仍可痊愈；注射40 次后肝纤维化即不可复原。此法造模时间长，动物的死亡率高。1969年Mclean E 用饮水中加入巴比妥，加四氯化碳蒸汽吸入法造摸。动物饮用两周后用CCl4蒸 汽吸入，46周可形成肝纤维化，810周可形成肝硬化，死亡率仍在40%左右。 国内学者王氏用CCl4溶于石蜡油中，经腹腔注射或皮下注射造摸，造摸时间可 因注射途径和剂量的不同而不同，816周即可形成肝纤维化一肝硬化模型，李 氏在CCl4的基础上加用人血清蛋白诱发肝纤维化模型，此模型的成功率较一般 造摸因素高，且更接近人类的肝纤维化

16、一些。二CC14诱导大鼠肝纤维化模型的建立肝纤维化是细胞外基质在肝内过度沉积的病理改变，多数慢性肝病人都有不 同程度的肝纤维化，是多种慢性肝病的共同病理基础与特征，表现为以胶原为主的 肝脏细胞外基质各成分合成增多,降解相对不足，过多沉积在肝内。若进一步发展 引起肝小叶改建、假小叶与结节形成，其中25%40%最终发展成肝硬化乃至肝 癌。因此，阻断肝纤维化就成为治疗慢性肝病中的一个关键问题4。肝纤维化动 物模型的建立，是开展肝纤维化基础研究及实验治疗研究的重要手段，既可以深入 研究其发病机理，又可以为临床筛选防治肝纤维化药物对肝纤维化进行早期诊 断、早期治疗，可以预防肝硬化的发生、发展，能够提高肝病患者的生存时间和生 命质量，具有重要的临床意义和价值。近年来，肝纤维化动物模型的研究多采用给实验动物施以不同性质、不同剂 量及不同作用方式的肝毒剂，造成不同类型的肝纤维化模型，并取得了可喜的成 就。主要有四氯化碳、血清制品、重金属、二甲基