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1、祝廣论立堂羸平皆-中国学术期刊网祝康论文堂羸平皆 中国学术期刊网 F 中医药论文:黄芪中黄芪总皂苷的大孔树脂纯化工艺研究【摘要】目的优选出分离纯化黄芪中黄芪总皂苷的最佳工艺条件。方法采用动态吸附罕斤;上,用超高效液相色谱法测定黄芪甲苷的含量，优选出最佳纯化条件。结果D101树脂对黄芪总皂苷的纯化最优，以2 BV/h吸附速率吸附,5 BV 70%乙醇以3 BV/h的流速进行洗脱 效果最佳，黄芪甲苷的精制度为 446.28%。结论D101大孔吸附树脂可用于黄芪总皂苷的纯 化。【关键词】黄芪；黄芪总皂苷；大孔树脂 黄芪为豆科植物蒙古黄芪 Astragalusmembranaceus（Fisch.）B
2、ge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao 或膜荚黄芪 Astragalusmembranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根,其主要成分为黄芪总皂苷，具有广泛的药理作用，如强 心、抗胃溃疡、对外周神经系统的再生具有双重调节作用、降血压等作用2-5。本文以黄芪甲苷为指标对黄芪中黄芪总皂苷的纯化进行了研究，为以后黄芪的进一步开发做基础。1材料与仪器黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110781200613）;黄芪药材（浙江中医药大学中药饮片厂），经浙江中医药大学资源鉴定教研室陈孔荣副教授鉴定为膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）B
3、ge.的干燥根。化学试剂均为分析纯。 D201、D101、DM130（天 津南开大学化工厂）。赛多利斯分析天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司 ）;RE 52AA旋转 蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）,Waters Acquity TM Ultraperformanee LC 色谱仪、Acquity TMTUV 检测器；2方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C 18（2.1 mm x 100 mm,1.7 卩 m）;流动相：乙 腈-水（35： 65）;漂移温度:50C;流速:02 ml/min;柱温:30 C;氮气压力：45PSI。2.2对照品溶液的制备精密称取黄芪
4、甲苷对照品适量，用甲醇制成浓度为 0066mg/ml的溶液，作为对照品溶液。2.3供试品溶液的制备 取黄芪粗粉约3 g,精密称定 加甲醇24 ml加热回流2次，每次2 h, 过滤合并滤液，减压回收并用甲醇定容至50 ml量瓶中，备用。2.4标准曲线的制备 取“2.2”项下的对照品溶液，分别进样05、1、1.5、2.0、2.5卩l,以对照品峰面积的常用对数值（Y）为纵坐标、进样量（卩g）的常用对数值（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程为 Y=39921X16698（ r =09997）。结果表明，黄芪甲苷进样量在 00330165卩g范围内的对数值与峰面积对数值呈良好线性关系。2.5精密度实验
5、取2.2项下的对照品溶液进样，重复测定6次，每次进样3卩l,记录峰面 积,计算得RSD为051%。2.6稳定性实验 按照“ 2.3”项下制备样品一份，分别于0 h、4 h、6 h、8 h、10 h进样, 每次进样3卩l,依法测定，记录峰面积。计算得 RSD为3.14%,表明样品在10 h内稳定。3上柱药液的制备取黄芪粗粉约80 g,精密称定，加甲醇240 ml加热回流2次，每次2 h,过滤，合并滤液，减压 回收甲醇并用纯净水定容至50 ml量瓶中，备用。4树脂的选择称取预处理过的树脂各 5 g于100 ml锥形瓶中，加入一定量供试品溶液，盖紧瓶塞，每隔 10 min振摇20 s,持续2 h,静
6、止放置24 h,过滤,测量滤液中黄芪甲苷含量，计算吸附率。将经静 态吸附后的树脂水洗至无Molish反应（吸取1 ml清洗液，加5%划;/阻？诫3 滴,摇匀。沿试管壁缓缓加入 05 ml浓硫酸，如在试管与硫酸的交界面处 ，很快形成紫色环），加70%乙 醇20 ml解吸，每隔10 min振摇20 s,持续2 h,静置24 h后,过滤得解析液，测定其黄芪甲苷含量计算解析率。表1树脂的筛选树脂型号 吸附率（）转移率（）D201 705 62.9D101 92.8 89.2DM130 88.3 84.8表1表明,D101对柴胡皂苷和姜黄素的吸附率与转移率均最高，所以选用D101大孔树脂。5动态考察5.
7、1动态吸附曲线的考察取DM101树脂20 g（血18 mm x 40 cm）于柱内，精密吸取按上述方法制备的黄芪水溶液上柱，流速为3 BV/h,每20 ml收集为一流分，测量流出液中黄芪甲苷的含量。以流出液体积（ml）为横坐标，黄芪甲苷的量（mg）为纵坐标，分别绘制泄漏曲线，计算树 脂吸附容量。树脂吸附量 =泄漏点上样体积（ml） x样品浓度（mg/ml）图1动态泄露曲线由图1可知,D101树脂的吸附饱和点为 120 ml,即每克D101可吸附黄芪甲苷1.25 mg。5.2上柱药液浓度的考察 取D101树脂10 g,将上述样品（黄芪甲苷浓度为0 8 mg/ml） 分别加水稀释成浓度为 0 4、
8、0 2、0 1 mg/ml的上样液，以2 BV/h的流速进行吸附， 水洗,70%乙醇以3 BV/h的流速洗脱，收集洗脱液，测定黄芪甲苷的含量。图2不同药液浓度对黄芪甲苷纯化的影响由图2可以得出当含黄芪甲苷为 08 mg/ml时，吸附率最高，当浓度更高时容易使柱子堵塞，故确定药液浓度为 08 mg/ml。5.3吸附流速的考察 取最佳浓度下的黄芪水溶液，控制流速1、2、3、4、5 BV/h进行吸 附冰洗，以 3 BV/h的70%乙醇5 BV洗脱。收集上样残留液和醇洗脱液，分别测定其黄芪甲苷 的含量。图3不同吸附流速对黄芪甲苷纯化的影响由图3可得出，当吸附流速为2BV/h时吸附率最大5.4乙醇洗脱浓
9、度的考察 分别取5根树脂柱各以2BV/h的吸附流速上药液。用纯净水 洗后,分别用40%、50%、60%、70%、80%的乙醇（分别标为15号）各5 BV,以3 BV/h流速依次进行洗脱，分别收集不同浓度的乙醇洗脱液5份。测定含量。图4不同乙醇浓度对黄芪甲苷纯化的影响由图4可得,4号浓度的乙醇对柴胡甲苷纯化最佳，故选择70%的乙醇洗脱。5.5洗脱流速的考察 按上述所确定的条件进行吸附，洗脱，控制5 BV 70%的乙醇分别以1、2、3、4、5 BV/h洗脱，收集洗脱液，计算柴胡皂苷和姜黄素的含量。图5不同洗脱流速对黄芪甲苷纯化的影响由图5可得,洗脱流速为1 BV/h和3 BV/h时黄芪甲苷的解析率
10、相当，为提高工作效率选 用3 BV/h的流速。6重复验证试验根据上述试验结果，按最佳条件，即取浓度为08 mg/ml的黄芪水溶液以2 BV/h上样，水洗至无Molish反应,5 BV 70%乙醇洗脱，收集洗脱液，平行3份。测定黄芪甲苷的含量，另取 黄芪上样品液及70%乙醇洗脱液水浴挥干，干燥至恒重，计算总固物。结果黄芪提取液纯化前 黄芪甲苷量占总固物的4.97%,纯化后黄芪甲苷占总固物的22.18%，黄芪甲苷的精制度为446.28%。7讨论本实验考察了 70%乙醇洗脱用量对黄芪甲苷纯化的影响 ，随着乙醇用量的增加，黄芪甲苷 的洗脱量增加，当洗脱用量达到5 BV时，洗脱量达到了总洗脱量的 88.
11、07%,若增加洗脱量则黄 芪甲苷含量甚少，且加大了工作量，影响效率，故采用了 5BV的用量。用D101大孔树脂富集纯化黄芪总皂苷的效果好，采用5BV70%乙醇洗脱，洗脱率高，成本低，转移率达到71.17%，适于大工业化生产。参考文献1 中国药典2005年版第一部S.2005.2 LIU Y X，LIU Z P，JIAO J J，et al. Effects of astragaloside IV on myocardiac dynamicsand cardiac fun cti on with no rmal and depressa nt cardiac fun cti on in rats
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