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1、结核分枝杆菌Y干扰素体外释放试验（TB-IGRA）对结核性胸腔积液的诊断价值【摘要】目的探讨结核分枝杆菌（MTB） Y-干扰素体外释放试验（TB-IGRA） 在疑似MTB感染体胸腔积液患者快速诊断中的应用价值。方法疑似MTB感染 伴胸腔积液患者138例，应用TB-IGRA定量检测外周血淋巴细胞分泌Y-干扰素的 水平。利用MTB DNA法检测胸腔积液中的MTB，同时用免疫金标法检测血清 MTB 抗体，并进行统计学分析。结果 138 例疑似患者经过痰和胸腹水抗酸染色 镜检，痰液和胸腹水MTB培养，结核菌素皮肤试验，MTB DNA和MTB抗体等试 验确诊结核病患者48例，阳性检出率34.8%, TB
2、-IGRA的阳性检出率为32.6%, MTB DNA的阳性检出率为13.8%，血清MTB抗体的阳性检出率为10.1%。对已确 诊的48例结核病患者进行数据分析，TB-IGRA，MTB DNA和血清MTB抗体的准 确率分别为 93.8%， 39.6%， 29.1%。据统计分析可知， TB-IGRA 的阳性检出率和 准确率均显著高于其他2种方法（PV0.05）。TB-IGRA对疑似MTB感染的胸腔积 液患者诊断的阳性预测值为93.3%,阴性预测值为93.6%。结论TB-IGRA对疑似 MTB感染伴胸腔积液患者的诊断具有快速，高敏感性高特异性的优点，优于MTB DNA和血清MTB抗体试验，可以作一种
3、新的技术用于人体MTB感染的诊断。【关键词】Y-干扰素释放试验；结核分枝杆菌；DNA；抗体；胸腔积液Evaluation of the value of TB-IGRA test in mycobacteriumtuberculosis infect of patients with pleural effusionAbstractobjective To investigate the application significance of mycobacteriumtuberculosis IFN-r release assay （TB-IGRA） in the rapid diagnos
4、is for suspected MTB infected patients with pleural effusion. Methods The 138 patients with pleural effusion which were suspected as having suspected MTB infection were enrolled. TB-IGRA was used to determine the level of IFN-r of peripheral blood lymphocyte . The MTB DNA method was to detect MTB in
5、 pleural effusion, meanwhile serumanti-MTB antiboby was detected by immuno gold filtration assay , and the results were diagnosed as tuberculosis by sputum, pleural effusion and ascites smear test, sputum ,pleural effusion and ascites MTB culture, tuberculin skin test, MTB DNA method and anti-MTB an
6、tibody test ,and the positive ratewas34.8%.The positive type of TB-IGRA in the 138 patients with pleural effusion was 32.6%,The positive rate of MTB DNA method was 13.8%,and the positive rafe of anti-MTB antibody test was 10.1%. The date of 48 patients with tuberculosis were analyzed . TB-IGRA had t
7、he consistency rate of 93.8%,while the consistency rates of MTB DNA method and anti-MTB antibody test were 39.6%and29.1% respectively. The positive rate and consistency rate of TB-IGRA were significantly higher than those of the others（p0.05）. The positive and negative predictive values of TB-TGRA i
8、n suspected MTB infected patients with pleural effusion were 93.3% and 93.6% respectively. Conclusions TB-IGRA is fast ,hipersensitivity and high specificity to diagnose the suspected MTB infected patients with pleural effusion.TB-IGRA is better than MTB DNA method and anti-MTB antibody test. TB-IGR
9、A can become a new diagnotic method to be applied in the diagnosis of MTB infection.keywordsinterferon-gammarelease assay（IGRA）; Mycobacteriumtuberculosis（MTB）;DNA;Antibody;pleural effusion结核病是世界上单一致病菌引起的死亡最多的疾病，据世界卫生组织统计， 2011 年全球约有870万例新发结核病患者，而死于此病的人数达140 万1。结核 性胸膜炎是一种仅次于淋巴结核的常见肺外结核病，临床表现为胸膜性疾病和干
10、 咳及单侧少至中等胸腔积液2。目前，结核性胸膜炎诊断准确性较低，结核胸腔 积液中找结核分枝杆菌是目前确诊结核性胸膜炎的重要依据，但涂片阳性率极 低，仅为025%，而胸腔积液的细菌培养阳性率低，且时间长，难以及时报告临 床治疗，诊断金标准的胸膜活检阳性率仅为 62.2%69.7%3,4。但其为有创检查， 患者依从性差，检查费用高，不符合常规应用。因此，寻找一种无创，快速和准 确的胸腔积液诊断方法成为提高结核性胸膜炎诊断水平的关键。近年来，国外有 关研究证实【56，结核分枝杆菌相关Y-干扰素体外释放 试验（tuberculosis interferon-r release assays）TB-IG
11、RA 对检测结核分枝杆菌的感染具有较好的特异 度和敏感度。由于胸水中免疫反应的强度比血液中更高，因此，通过检测胸水中 的Y 干扰素释放水平来诊断活动性胸膜结核被证实是有意义的。本研究通过对 与结核感染相关性的胸腔积液进行 TB-IGRA 试验， MTB DNA 和 MTB 抗体检测， 探讨 TB-IGRA 在明确胸腔积液中结核诊断中应用价值。1 材料和方法1.1 研究对象 选择2013年4 月至2015 年2 月因患有胸腔积液而在惠山区人 民医院相关科室住院的患者，入选标准：咳嗽，呼吸困难，急促，胸部X片和计 算机断层扫描检查提示伴有中等量以上的胸腔积液的患者。排除标准;（1）入院前， 实施抗
12、结核治疗1 星期者；（2）合并糖尿病以及其它严重的肝功能、肾功能异 常或功能不全患者；（3）人类免疫缺陷病毒阳性者。根据上述标准共入选患者 138 例，其中男 88 例，女 50 例，中位年龄 56.8（ 29-73）岁，均符合 2008 年 8 月1 日宣布的中华人民共和国卫生部颁发的中华人民共和国卫生行业标准。1.2仪器和试剂 Mutiskan MKs型酶标仪购自赛默飞世尔（上海）仪器有限公司， 北京万泰生物药业股份有限公司的分枝杆菌r-干扰素释放试验检测试剂盒（TB-IGRA试 剂），MTB DNA检测试剂盒由广东达安基因有限公司提供，PCR扩增仪与美国ABI 公司Tn7300实时荧光定
13、量PCR仪。上海奥普生物制药公司生产的MTB抗体胶体 金法诊断试剂盒1.3 方法1.3.1TB-IGRA试剂试验步骤BD肝素锂抗凝管采血等抽取5ml静脉血，马上轻 柔颠倒混匀3次以上，把全血分装到3个不同的培养管中（T测试管，N本底对 照管，P阳性对照管等），等分装1ml，分装后轻柔颠倒培养管5次，于37培 养管中静置培养22+-2h，培养完成后，留取收集上清液，然后用双抗体夹心法 定量检测上清液中的IFN-r的含量，T管中有特异性开高的IFN-r的量，来测定为 结核感染阳性。1.3.2MTB DNA检测，胸腔积液沉渣抽提MTB DNA，检测试剂盒由广东达安基因 有限公司提供。联合酶链反应(p
14、olymerase chain reaction,PCR)扩增仪为美国 MBI公司的7300实时荧光定量PCR仪，严格按标准操作程序进行。1.3.3血清MTB抗体检测 检测所用试剂为上海奥普生物医药公司提供的MTB抗 体胶体金法诊断试剂盒，实验原理为斑点免疫金渗滤法，严格按说明书操作。1.4 统计学方法采用spss16.0软件进行统计分析，两种方法的阳性率比较采用X2检验，以pv0.05 为差异具有统计学意义。2 结果138例疑似MTB感染的胸腔积液患者TB-IGRA和MTB DNA检测阳性率和准确率 比较138例疑似MTB感染的胸腔积液患者用TB-IGRA和MTB DNA检测，两者同 时阳性
15、13例,TB-IGRA阳性而MTB DNA阴性阴性32例，MTB DNA阳性而TB-IGRA 阴性6例，TB-IGRA的阳性检出率为32.6%，MTB DNA的阳性检出率为13.8%， 两种方法的阳性检出率比较，差异有统计学意义(X2=11.6，P0.05)见表1表1138例疑似MTB感染的胸腔积液患者TB-IGRA和MTB DNA检测阳性率比较TB-IGRAMTB DNA合计阳性阴性阳性133245阴性68793合计1911913848例确诊MTB感染的胸腔积液患者用TB-IGRA和MTB DNA检测，两者同时阳性 8例，TB-IGRA阳性而MTB DNA阴性34例，MTB DNA阳性而TB
16、-IGRA阴性4例， TB-IGRA的准确率87.5%,MTB DNA的准确率为25%，两种方法的准确率比较，差 异有统计学意义(X2=5.84，P0.05)见表2表2 48例MTB确诊MTB感染用TB-IGRA和MTB DNA检测准确率比较TB-IGRAMTB DNA合计阳性阴性阳性83442阴性426合计123648138例疑似MTB感染的胸腔积液患者TB-IGRA和MTB抗体的阳性率，不准确度 比较。138例疑似MTB感染的胸腔积液患者用TB-IGRA和MTB抗体检测，两者同时阳 性9例，TB-IGRA阳性而MTB抗体阴性36例，MTB抗体阳性而TB-IGRA阴性5 例，TB-IGRA的阳性检出率32.6%, MTB抗体阳性检出率10.1%,两种方法阳性检 出率比较，差异有统计学意义(
