电泳过程中的不正常现象和对策

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1、辉骏生物电泳过程中的不正常现象和对策如果电源上没有显示电压,则说明电源没有输入电压,保险丝断了或电源故障。如果没有电流或电流 很小,则说明凝胶,缓冲液凝胶条(或缓冲液滤纸条)及电极三者之间有气泡,接触不好,甚至没有接触。如果前沿指示剂向相反方向移动(如阳极电泳中漠酚蓝向阴极移动或阴极电泳中焦宁向阳极移动), 则说明电源连接的正、负错置或缓冲液选择错误。如果指示剂前沿呈现两边向上的曲线形,即常称的微笑现象。则说明凝胶的不均匀冷却,中间部 分冷却不好,所以导致凝胶中的分子有不同的迁移率所致。这种情况在用较厚的凝胶以及垂直电泳时常常 发生。如果指示剂前沿呈现两边向下的曲线形,即常称的皱眉现象。则常常

2、是由于垂直电泳时电泳槽 的装置不合适引起的,特别是当凝胶和玻璃板组成的三明治底部有气泡或靠近隔片的凝胶聚合不完全 便会产生这种现象。 图示1 ,电泳时,前沿指示剂的(1广微笑现象和(2广皱眉现象如果电泳时间比正常要长,则可能是由于凝胶缓冲系统和电极缓冲系统的pH选择错误。即缓冲系统 的pH和被分离物质的等电点差别太小或缓冲系统的离子强度太高。电泳时电流产生的热是大部分电泳方法的主要问题。即使使用冷却装置,也仍然会正在凝胶中产生温 度差异。这种温度差异导致相同分子在凝胶的不同部位会有不同的迁移速度,而使蛋白带产生弯曲畸变。 特别在使用柱胶和较厚的凝胶时这种现象更为常见。凝胶厚度、冷却温度、电参数和电泳时间4者之间在电泳时存在着依赖关系。电压应根据加在凝胶上 电极之间的距离(即凝胶宽度)而定。电流则与凝胶的长度(加样数和加样量)有关。一般来说,常规聚 丙烯酰胺凝胶电泳不需要太高的电压,所以对薄层胶来说,温度要求也不高。如果加双倍的电压,从理论 上来说,电泳时间可缩短一倍。但实际上由于高电压产生的副作用,并不能达到预期的目的。所以有时采 用伏/小时作为电泳时间参数可能更具有实际应用价值。电泳过程中如果电泳盖上出现冷凝水,则表示加的电压和功率过高。

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