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1、RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤关键词：RNA琼脂糖电泳2012-03-0900:00来源：互联网点击次数：38148一、实验目的掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。二、实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。三、实验材料、器具及药品蘑菇的总RNA溶液。电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。琼脂糖，1
2、XTAE电泳缓冲液，g/ml溴化乙锭（EB）10X载样缓冲液。（ 四、实验步骤1）用1TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。（2）在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4l于封口膜上。在实验台上再加入5l1TAE电泳缓冲液及1l的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。（3）打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。RNA的变性琼脂糖凝胶检测试剂：（ 1）MOPS缓冲液（10*）:L吗啉代丙烷磺酸（MOPS），LNaAc,10mol/LEDT
3、A。（ 2）上样染料：50%甘油，1mmol/LEDTA,%溴酚蓝，%二甲苯蓝。（ 3）甲醛。（ 4）去离子甲酰胺。v电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）水冲洗乙醇干燥3%H2O2灌满室温放置10分钟%DEPC水冲洗。操作：（1）将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。（2）配制琼脂糖凝胶。称取琼脂糖，置干净的100ml锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。待胶凉至60-70，依次向其中加入9ml甲醛、5ml10XMOPS缓冲液和溴化乙锭，混合均匀。灌制琼脂糖凝胶。（3）样品准备：取DEPC处理过的500ul2ul，甲醛,甲酰胺（去离子）小离心管，依次加入如下试剂：10ul，RNA样品,混匀。10xMOPS缓冲液将离心管置于60水浴中保10分钟，再置冰上2分钟。向管中加入3ul上样染料，混匀。（ 4）上样。（ 5）电泳：电泳槽内加入1XMOPS缓冲液，于ml的电压下电泳。（ 6）电泳结束后，在紫外灯下检查结果。
