达亚美操作程序

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1、ABO 正/反定型和 RhD 血型检测卡操作规程样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500gX10m in,以免纤维 蛋白物残余干扰反应结果。样本准备： 5%样本红细胞制备：压积红细胞25 p l或全血50 |J l悬浮于0.5 ml达亚美2号稀释 液中。配套试剂：ABO正/反定型和RhD血型检测卡2 号稀释液 标准红细胞A1和B操作步骤：1）取50j l A,B标准细胞（0.8%）分别加入A,B管中。112）取 50J l 血清或血浆加入 A,B 管中。3）取10j l 5%样本红细胞加入A, B, D, Ctl管中。4）离心

2、 10 分钟。判读结果。记录。结果解释：1、阳性（）：细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中。阴性（）：细胞沉积在管底。双相（d.p.）：既有阳性结果，同时也有阴性结果。溶血（Hemo）：红细胞溶解，作为阳性结果对待。2、 ABO 血型判断血型抗原与抗血清反应与AB细胞反应抗-A抗-BA1BAA+一+/+BB一+/+一ABA， B， AB+一一0H一一+/+/+3、Rh D血型判断+土+阴性Rh D阳性Rh D弱阳性Rh D阴性抗体筛选操作程序操作规程（间 接 抗 人 球 法 IAT）样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。若需要用血清替代血浆进行检测时蛋白物残余干扰反应结果

3、。配套试剂：低离子抗人球蛋白卡2 号稀释液抗体筛选标准红细胞抗原格局图操作步骤：应在用前离心，1500gX10m in,以免纤维1）取50 p l试剂红细胞悬液至低离子/抗人球卡各微管中。2）取25 p l待检血浆/血清加入各管中。3) 37C 孵育 15 min。4）离心 10 分钟。判读结果。记录。结果解释：1 、阳性（）：细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中 阴性（）：细胞沉积在管底。双相（d.p.）：既有阳性结果，同时也有阴性结果。溶血（Hemo）：红细胞溶解，作为阳性结果对待。2、抗体筛选结果：阴性表示被检血浆/血清未发现不规则抗体； 阳性表示有不规则抗体。将结果与试剂红细胞的

4、抗原格局图比对，初步确定抗体类 型，并进一步检测以鉴定抗体。交叉配血操作程序操作规程样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500gX10m in,以免纤维 蛋白残余干扰反应结果。样本准备：0.8%样本红细胞制备：取10p l压积红细胞至lml达亚美2号稀释液中。 配套试剂：低离子抗人球蛋白卡 2 号稀释液操作步骤：1）取0.8%供体红细胞悬液50 p l至低离子/抗人球卡主侧管中； 取0.8%病人红细胞悬液50 p l至低离子/抗人球卡次侧管中。2）取 25 p l 病人血浆/血清加入主侧管中；取25 p l 供体血浆/血 清加入

5、次侧管中。3）37C 孵育 15 min。4）离心 10 分钟。判读结果。记录。结果解释：1、阳性（）：细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中 阴性（）：细胞沉积在管底。双相（d.p.）：既有阳性结果，同时也有阴性结果。溶血（Hemo）：红细胞溶解，作为阳性结果对待。2、交叉配血结果：阴性表示配血成功；阳性表示配血不成功，需进一步检测。新生儿溶血症的“三项试验”操作规程样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500gX10m in,以免纤维 蛋白残余干扰反应结果。样本准备：0.8%样本红细胞制备：取10p l压积红细胞至lml达

6、亚美2号稀释液中。配套试剂:低离子/抗人球卡,2号稀释液,A、B标准红细胞,抗体筛选标准红细胞,DiaCidel 洗涤液(用前以蒸馏水1： 10稀释)，DiaCidel放散液，DiaCidel缓冲液操作步骤：红细胞直接抗球蛋白试验(DAT)1. 取新生儿脐带血，用达亚美2号稀释液(ID-Diluent2)配0.8%的红细胞悬液。2. 在低离子/抗人球卡中加入50卩1上述红细胞悬液。3离心1 0分钟，判读结果。记录。游离试验(IAT)1取新生儿脐带血，离心，取血浆。2. 在低离子/抗人球卡中分别加入50卩1 0.8%的标准红细胞。3. 各孔均加入25卩1新生儿脐带血清。4. 37C孵育15分钟，

7、离心10分钟。判读结果。记录。释放试验(IAT)1用等渗生理盐水洗涤红细胞一次，至少需要压积红细胞1ml。2 用DiaCidel洗涤液(工作浓度)洗红细胞4次。3 最后一次洗涤后，小心倾除上清液。可另用试管保留部分上清液，以检测是否 存在不规则抗体。4 将 1ml DiaCidel 放散液加至红细胞中，充分混匀。5 立即离心1分钟，转速900Xg (3000 rpm)。6 将放散液移入干净试管。7 加5滴(250p l) DiaCidel缓冲液于放散液中，混匀。若有兰色出现，表明达 到中性，即pH 6.57.5；如为出现兰色，则需再加入更多DiaCidel缓冲液(每 次一滴，边加边摇匀)。8将

8、放散液再次离心1分钟，转速900Xg (3000 rpm)。以完全清除残存细胞。9现在放散液可用于检测了(可以根据临床实际情况用A、B标准红细胞和/或 抗体筛选标准红细胞)。10在低离子/抗人球卡中分别加入50卩l 0.8%的标准红细胞。11各孔均加入25卩l放散液。12 37C孵育15分钟，离心10分钟。判读结果。记录。 结果解释：1、红细胞直接抗球蛋白试验(DAT)阳性：红细胞被致敏。阴性：红细胞未被致敏。2、游离试验(IAT)阳性：血浆中有游离抗体。阴性：血浆中无游离抗体。3、释放试验(IAT)阳性：红细胞表面有抗体包被。阴性：红细胞表面无抗体包被。孕妇血清IgG抗体水平检测操作规程样本

9、要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500gX10m in,以免纤维 蛋白残余干扰反应结果。配套试剂：低离子/抗人球卡，2号稀释液，标准红细胞（A、B和/或抗体筛选），0.2 M二 巯基乙醇液（17 M 2-Me原液加入1ml 2号稀释液中，混匀）操作步骤：1. 配制中和血浆：取母亲血浆与0.2 M二巯基乙醇液（2-Me）各100 充分 混匀。置37C水浴30分钟，以充分破坏血清中的IgM类抗体。2把孕妇的中和血浆用生理盐水倍比稀释效价1： 321： 641： 1281： 256中和血浆（M）10200200200生理盐水（M）31

10、02002002002. 取50 m的标准红细胞（用何种细胞取决于父方血型）加入低离子/抗人球卡。3. 再分别加入25 m不同效价的稀释血浆（一般为1： 64、1： 128、1： 256三 种）。4. 37C孵育15分钟。5离心10分钟，判读结果。记录。结果解释：1. ABO新生儿溶血病：美国血库协会（AABB）认为1:128滴度为有临床意义；根据 P.L.Mollison所著教材临床医学中的输血（Blood Transfusion in Clinical Medicine）， 将1:512或更高滴度作为有临床意义抗体。2. Rh新生儿溶血病：根据现代血库和输血实践第20章427页，各实验室应

11、建立自己的 滴度决定水平。18-20周检测RhD滴度，如：（1）如RhD滴度为1:32或更高，应重复检测，在20-24周行羊膜穿刺或抽脐带血进行检 测。（2）如RhD滴度为1:16或更低，应在妊娠第4-6个月，每月检测一次，第7个月至预产 期前，每2周检测一次RhD滴度。新生儿ABO血型和Rh血型鉴定操作规程样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500gX10m in,以免纤维 蛋白残余干扰反应结果。样本准备：0.8%样本红细胞制备：取10p l压积红细胞至lml达亚美2号稀释液中。 配套试剂：达亚美新生儿血型卡 2 号稀释液操作

12、步骤：1. 取新生儿脐带血或静脉血，用达亚美2号稀释液（ID-Diluent2）配0.8%的红 细胞悬液。2. 在达亚美新生儿血型卡所有6根微管中，均分别加入50p l上述红细胞悬液。3离心 10 分钟。判读并记录结果。结果解释： 1、阳性（）：细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中。阴性（）：细胞沉积在管底。双相（d.p.）：既有阳性结果，同时也有阴性结果。溶血（Hemo）：红细胞溶解，作为阳性结果对待。2、 新生儿由于免疫系统的发育不完全，体内尚不能自主形成相应的抗体。此时体内抗体多 来自母亲，反定型没有临床意义。因此，在达亚美新生儿血型卡中去掉了反定型检测， 增加了抗-AB孔和AHG

13、孑L。抗一AB可作为对抗-A和抗-B的对照监测；AHG则可进行直接 抗人球检测，初步进行新生儿溶血症的筛查。达亚美离心机(ID-Centrifuge 12S II)操作规程1. 打开机器电源开关(开关在机箱后部、电源插头上方)。2. 屏幕出现如下字幕，表示机器进入可使用状态：Ready3. 按面板上的STOP/OPEN 键，打开机器盖子。4. 将达亚美卡对称放入离心机转头内，关上机器盖子。5. 按面板左侧的 START 键，机器开始运转。6. 当屏幕出现如下字幕，机器自动进入10 分钟倒计时：1030rpm10:007. 机器发出警报声，并同时自动开启盖子。8. 取出达亚美卡。达亚美孵育器(I

14、D-Incubator 37S I)操作规程1. 打开机器电源开关(开关在机箱后部、电源插头上方)。2. 待机：预热15-30分钟，温度自动上升到37C 2C(注意在此过 程中温度会有回降)。3. 当屏幕出现如下字幕，表示机器进入可使用状态：(如未出现该字 幕，则机器不能使用，需再等待数分钟)* * Ready * *4. 掀开机器盖子，将装有达亚美卡的卡架放入孵育室内，关上盖子。5. 按面板左侧的 START(+) 键，屏幕闪动如下字幕：6. 机器自动进入15分钟倒计时。7. 机器发出警报声，表示孵育时间已到。或按 STOP/TIMER(-) 键 随时中止孵育过程。8. 掀开机器盖子，取出达亚美卡架。