免疫组化二步法

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1、EnV is ion 法免疫组化(igfir、lyvei)源理EnVision 法又称为 ELPS 法(Enhance Labelled Polymei System)o EnVision 复合物是利 用一种多聚化合物,将HRP或AP和第二抗体(抗鼠或抗兔IgG)同时标记在一个多聚化合 物上,即形成酶.多聚化合物第二抗体巨大复合物。每一个mol的复合物中约含70个mol 的HRP和10个mol的第二抗体,复合物中的HRP的绝对数量远高于其它复合物(如ABC), 本身已具备高度放大作用,因此EnVision法敏感性显著高于其他方法。复合物中存在多个 第二抗体,也增加了该复合物与特异性抗体的结合机

2、会。同时,该多聚化合物人体内不存在, 无非特异性干扰,故背景染色轻。此外,染色步骤为两步,且第二抗体孵育时较短,使该方法更省时而简便。/ A组织抗原Y -抗Y二抗O 酶试剂及材料试剂:一抗抗体名称EnVision试剂(HRP-Rabbit/mouse)即用型购于丹麦Dako公司(3)0.01moVL pH7.4 PBS;0.01mon/L TBS pH 7.8;(5)3,3二氨基联苯胺盐酸盐(DAB)二、材料:三、操作流程1. 石蜡切片常规脱蜡至水,PBS洗3X3min;2. 用pH6.0 0.0IM CB热诱导修复(微波3档20min),室温自然冷却,3. PBS 洗 3X3min;4.0.3%H2O2抑制内源性过氧化物酶20min,室温;5.PBS 洗 3X3inin;6.20%正常羊血清室温孵育30min,不洗;7. 滴加适当稀释特异性一抗37P孵育211;8. PBS 洗 3X3min;9. EnVision 试剂(KRP-R/Mzn 30min;10. PBS 洗 3X3min;11. DAB 显色 812. 苏木素衬染色,热水蓝化;13. 吹干后,树脂封片;14. 镜下观察,核紫蓝色,阳性呈棕黄色.DAB的配制称50mg DAB加入至100ml TBS中,搅拌后,过滤,加入终浓度为0.03%玦02。

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