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1、Wate rs 高效 液 相 色 谱 仪 标 准 操 作 规 程1. 目 的描 述 Wa t er s 高 效 液 相 色 谱 仪 标 准 操 作 规 程 。2. 适 用 范 围化验室3. 责 任 者化 验 员 应 严 格 遵 照 该 操 作 规 程 ,QC 主 管 负 责 监 督 本 规 程 的 实 施 。4. 定 义HPL C Hi gh Per for man ce L iq ui dC hr o ma to gra ph y, 高 效 液 相 色 谱 仪 。5. 安 全 注 意 事 项5. 1 有 机 溶 媒 有 害 健 康 ， 各 溶 剂 瓶 口 应 封 严 。5. 2 注 意 检
2、查 废 液 桶 中 废 液 应 避 光 ， 防 止 废 液 桶 满 外 溢 。6. 规 程6.1. Wat er sHPLC 的 组 成 ： 贮 液 器 ? 输 液 泵 ? 自 动 进 样 器 ? 分 离 柱 （柱 温 箱 ）? 紫 外 检 测 器 ? 控 制 及 数 据 处 理 系 统 （Mi llen niu m32 化 学 工 作 站 ）。6.2. HPL C 系 统 的 打 开 及 关 闭 顺 序6.2. 1 打 开 顺 序对于分体式：请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关，待各部分 分 别 显 示 初 始 化 完 毕 后 ， 最 后 打 开 Mi llenn ium32 化 学
3、 工 作 站 。泵 与 色 谱 工 作 站 的 连 接 ： 对 于 510 泵 ， 因 为 此 泵 与 色 谱 工 作 站 是 单 向 联 系 ， 如 要 使 泵 在 Remot e 状 态 下 由 工 作 站 控 制 ， 首 先 要 在 泵 的 键 盘 上 按 Me nu 键 ， 待 显 示 屏 切 换 至 Mo d e 状 态 下 ， 其 状 态 是 Loca ， 按 Edit/ Ent er 键 ， 在 Loca l 的L前有闪动的光标显示，按。键，Local转换成Rem ,再按Edit/E nter键， 此 命 令 已 输 入 进 去 ,最 后 按 St o p/ Ru n 键 ， 使
4、 泵 处 于 Run 状 态 这 时 泵 和 工 作 站 的 连 接 即 告 成 功 。泵 的 任 何 动 作 都 可 由 工 作 站 来 控 制 。还 应 注 意 这 一 步 工 作 在 每次开机时都要进行。对 于 Al li an ce 26 90 系 统 ： 先 打 开 Al l ia nce2 690 主 机 、 检 测 器 电 源 开 关 ， 待 初 始 化 完 毕 后 ，再 进 入 Mi ll en ni um 32 化 学 工 作 站 。对 于 流 动 相 的要 求 ：对 于 液 体 试 剂 应 尽 量 采 用 色 谱 纯 试剂 ；对 于 所用 到 的固 体试 剂 应 采 用 分
5、析 纯 试 剂 ；对 于 水 ，应 采 用 经 纯 水 机 处 理过 的 超 纯 水；流 动相 在使 用 前 一 定 要经 0. 45 mm 的 滤 膜（ 滤 膜 分 为 水 相 膜 与 有机 相 膜 ，确保 使 用正 确的 滤 膜 ， 参 见附 表 ）过 滤 、 超 声 真 空 脱 气 方 可 使 用 ， 严 禁 含 盐 的 流动 相 未经 过滤直接使用。应养成良好操作习惯：规 范 操 作 ，树 立 保 护 HPL C 整 套 系 统 的 概 念 ，尤 其 对 于 输 液 泵 、色 谱 柱 、 检 测 器 ，在 使 用 后 应 及 时 冲 洗 ，以 免 污 染 而 使 其 寿 命 缩 短 或
6、 损 坏 ，尤 其 如 操 作 者 使 用 了 含 盐 的 流 动 相 ， 更 应 注 意 清 洗 的 步 骤 ： 首 先 用 脱 过 气 的 纯 水 在 流 速 为1 ml/mi n左右冲洗3060分钟，再用含50 %以上甲醇或乙腈的水溶液以相同 的流速冲洗2030分钟左右。如 要 卸 下 柱子，在 经 过 上 述 冲 洗 过 程 之 后 ，再 经 纯 甲 醇 或乙 腈以1 ml /min的流速 冲 洗 2 0 3 0分 钟 ， 柱 子 卸 下 后 应 马 上 拧 紧 柱 堵 。流 速 的 变 化应采 用 阶 梯 式 递 增 或 递 减 的 方 式 ，启 动 泵 时 ，应 在2分 钟 之 内
7、由小流 速 慢 慢 增大到 所 需 的 流 速 ， 泵 关 闭 时 亦 然 （ 流 速 递 减 ）。切 忌流速 的 骤 变。6.2. 2 关 闭 顺 序首 先 退 出 Mi lle nn iu m 32 化 学 工 作 站 ， 再 关 闭 系 统 的 其 他 部 分 。326.3. Mi ll en n iu m 3 2 化 学 工 作 站Mi llen niu m32 色 谱 管 理 系 统 是 集 数 据 采 集 、 处 理 、 HPL C 系 统 的 控 制 、 结 果 的 管 理、报告的打印为一体的综合系统。下面就着重介绍该系统的基本操作知识。6.3.1 Mi lle nn iu m3
8、2 化 学 工 作 站 的 进 入打 开 化 学 工 作 站 ， 系 统 自 动 进 入 Pr og ra mMa na ge r 界 面 ， 双 击 Mi lle nn iu m 肖 像 ， 这 时 进 入 Mi l le nn iu m 界 面 ， 双 击 Se ss io n Mana ge r 图 标 ， 系 统 将 自 动 初 始 化 ， 以 使 工 作 站 和 HPL C 整 套 系 统 进 行 联 接 。初 始 化 后 ，按 系 统 要 求 键 入 你 的 Us er Na me 和 Pa ss wo rd ， 这 时 你 已 进 入 该 系 统 。6.3.2 Pro ject
9、的 进 入 和 建 立Pro je ct的进 入：在 Se ss i on Man ag er窗口下，击 Pr oj e ct肖像（或从 Vi e w中选择 Pr oj e ct s）, 在 其 中 有 已 建 好 的 Pr oj ec t ，双 击 你 所 需 的 Pr o je c t 肖 像 ，再 进 行 你 想 做 的 工 作 。Pro je ct的建立从 F il e 中 选 择 Ne w ， 即 显 示 Ne wPro je c t 的 画 面 。在 Pro je c t Na me 中 输 入 你 的 Pro j ec t 名 称 。在 In itia llze Pro je c
10、t 项 目 中 选 择 Cop y 中 的 filter an df ie lds 或 Met ho ds 。在 Fr o mPr oj ec t 中 选 择 要 拷 贝 的 现 存 Pr o je ct 。选 择 Tab l esp a ce si ze 。选 OK， 存 贮 并 退 出 。当 Mi llenn ium 软 件 在 建 立 一 个 新 的 Pr oje ct 时 ， 在 屏 幕 上 及 时 显 示 出 完 成 建 立 新 Pr oj e ct 的 百 分 比 。 当 达 到 100%时 ， 在 Se ssi on Man ag er 画 面 即 出 现 一 个 新 的 Pr
11、oj e ct 肖 像 。6.3. 3 收 集 数 据 的 一 般 过 程 使 用 Mi lle nn ui um32 收 集 数 据 的 一 般 过 程 如 下 ： 在 Pr oje ct 窗 口 内 建 立 收 集 数 据 所需仪器的仪器方法；建立包括此仪器方法的方法组；使用此方法组收集数据。本部分包括：建立仪器方法，建立方法组，收集样品。建立/修改仪器方法从 Se ss oi n Man age r 窗 口 ， 打 开 所 需 的 Pro je c t 。选 择 Me t ho d 按 钮 ， 现 存 的 方 法 的 肖 像 即 出 现 在 屏 幕 上 。从 命 令 菜 单 中 选 择
12、Fi le ， 然 后 选 择 其 中 的 Ne wIn str ument Me thod ， 即 出 现 Sys te mOp e n 对 话 框 。在 目 录 中 选 择 收 集 数 据 需 要 使 用 的 色 谱 硬 件 系 统 的 名 称 ，如 ：Sy ste m_ 1。按 OK，这 时 In s tr u me nt Me th od 窗 口 即 显 示 出 来 。窗口的上部分是该系统的所有仪器的肖像。用鼠标器将需要设定仪器参数的仪器部 件 激 活 ， 然 后 在 仪 器 肖 像 上 双 击 两 下 ， 即 出 现 In stru men tDi alog Bo x 画 面 。对各
13、个部件设置操作条件，或通过输入新的参数来更改以前的参数。例如：定义泵 参 数 ， 先 双 击 S IM/ PC M 的 肖 像 。 填 写 泵 参 数 ， 按 OK。当 所 有 参 数 设 置 完 成 后 ， 按 OK。 即 回 到 In st ru men tMet hod 窗 口 。 选 File 中 的Sa ve As 存 贮 仪 器 方 法 文 件 ， 如 有 需 要 ， 起 一 文 件 名 ， 按 OK 。选择F ile中的Exit，即回至U Pro je ct窗口。新的仪器方法肖像即出现在此窗口下。建立 方法组(Me tho dSe t)仪 器 方 法 编 好 后 ， 必 须 存
14、于 一 方 法 组 中 ， 才 能 在 Quick Set Co nt ro l 中 调 用 。在 Pro je ct 窗 口 下 选 方 法 肖 像 。选 F il e 中 的 Ne wMe thod Set ， 即 显 示 出 Me tho dSe t 对 话 框 。在 此 画 面 的 In s tr u me nt Met ho d 一 栏 ， 选 择 已 确 定 的 仪 器 方 法 。 其 他 项 目 可 空 着 不 填 。 然 后 选 File ， Sav eAs 。 输 入 方 法 组 名 后 ， 按 OK。选 F il e ， Exi t 。 即 退 回 到 Pro j ec t
15、 窗 口 。 新 设 置 的 方 法 组 肖 像 即 出 现 在 此 窗 口 下 。收集样品：完成以上各步骤后，即可收集样品。在 Pro je c t 窗 口 下 选 择 Q ui c k Se tC on tr o l 肖 像 。 出 现 Sy s t e mO pe n 对 话 框 。选择建立仪器方法时确定的色谱硬件系统，按0K。即出现QuickSe tCon tr o l窗口。在 此 窗 口 下的 Sa mp le Lo ad in gTab l e 中 用 鼠 标 器 按 第 一行，这 时 Mi l l en ni u m 软 件会 自 动 填 充各 项 初始 参 数 。通 过 输 入 新 值 可 更 改 表 中 的各项 参 数 ，表 中 的 瓶 号 （对于 高 效 液 相 色 谱 仪 的 进 样 表 ， 除 另 有 规 定 外 ， 按 括 号 法 安 排 进 样 顺 序 。 即 第 一 针 为 标 准 品 1作 为 系统 适 用 性 共 进 6 针 ， 要 求 RSD 不 大于2%， 随 后 为 标 准 品 2，进 样 次 数 为2 针 ，然 后 为 样 品 1 到 样 品 3， 各 进 2 针 。样 品 3 后 为 标 准 品 1 ， 依次 类 推 ，直 到 将 所 有 样 品 都 安 排 在 进 样 表 中 ）进 样 次 数 ，进 样 体 积 ， 运 行 时
