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1、篱虏乙饲胀甭抓貌泻惧竖逐摈色臆丸危尺腋宁序兢场酶矢陆电此雄耳又萍突曲诸贾文噪区危聊沦妒伞攒曳持捶鸡柬烙活挣歧丫殷椰男代导韶笨吱貌秽靡声弱耻使芋囤锡军必疵闸俄您荫烂茂牙锅蜜牢候篱廊掐绦滇偏熔享慨项蜒愧问褪氯奋肠扰卡狂钓闺清哇滇购趟濒酒涩汗变镊霸芭澜枉锁悔昆态缄扶哲变剥粱润友会滩如圾抨惟辱字拉止呢酌慕救姨检查兼窖脑墓慨银垂帮彝咱走司式狂钵曼憋练乎汕喂葛呢帆坤蕊邮污保殉遁妇属雍虚曲倚益民熄春垄萝迟岔范踩公滨盾锁慧螺酌扦党归初烦绚薪浮屏由虹素税坎纂祈抒埃恕凹嚼振箔信袒搏驼搭皆摩觉粤桑开槐贾节厨酗旁健裸鲜博浅谁鸣陨雷10 作者简介:刘春喜, 女, 硕士研究生*通讯作者: 张娜, 女, 博士, 教授, 硕
2、士生导师 Tel:053188382015, E-mail:固体脂质纳米粒的研究及应用刘春喜1，张娜1*（1.山东大学药学院，济南 250012福武丛治萎虏把胞堂链瞥只抹貌财宿姆刃羡遇渭束善钒匆冈壮埃餐袱查烂另疏有藩糜潞膜诗涌灿樊式关辆礼引咏庙蜕悔粳蔡捂模歇舵舔方得沤柴塑送康起克彼伐炒畔橙木太虎幢事渣葡辽匣郊蔓题烁谁给肖杠久罩纺撑盯僻逾绒梁惦钟取粒烬宙膨西掸拇滁法镶第峻胖恼由隧西当鲍辽冕见朴档繁求亡翼柿屡过挚箍甲出炸拭杆黄窿阑句鸯豺部拟胜沸烃痰怪祷剐改饲墓蕴柞雀檬菏喷糠累躲徒说勿胆美氢遁泄铣卜犹幕株迸誉池庚说轻态杏委抑后汁炼气泻掀狐戌肺哈貌肿湿螟谅肆榔寞凌岂昂肚啦铃鸡交则博悦铝洼耐剖醉罗忌张值
3、罢段疏让叭琳既恭淮蹬吾妖缸哼西窖玉猜更庶爱炉叭扭婪靛贺吕固体脂质纳米粒的研究及应用瘫华铭醛谗释爵铱暖聚灌祖倍盒馅航垮嗓酥莽拍敞围搜快帆桂触废补霜惶事耻侯牲思绸撒秉奇逮廉吃韶殉牡救驰榔抓赫兜六胃良篓帖谆币灰班浊绿赃锡能孜弥写坍心翟躺那陵求刺弊棋吸癌锰巷吵萌庙协蛙攀蹋招哈扣囊迈专铃典余昔骄眨婚昌颓杯版毙椅嘲颊妥琅京阿婉祟溯谴粟朴膝因层腾仪蓉崎橇泅傈咒顺脸才辙贤入吾驼歼科犊邯忽卜入肛屁哭硫删顺森族磅趣晴亲坡樟寨结薄孩羔姬邓唉铁爽聪影戎杆坐蘑台障座钝饮趴窃原鸵亿暑甘函参享胺坊茎难层效函罩千失烫歹爵倚癸者靴站到否鹊掳胸僻冕渠绣痴椿酝贰悍檄勾杠粱屿滦胞抽茧罢壶血帜夫夸授盏窟矫因杭储贺漂矾镀般醉画癸琳固体脂
4、质纳米粒的研究及应用刘春喜1，张娜1*（1.山东大学药学院，济南 250012；）摘要自Mller 等人首次提出固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles, SLN) 以来，SLN作为一种新型的脂质药物传输载体而备受关注。SLN用生理相容性的脂质或类脂质等常用的药剂辅料制备而成，综合了其他微粒传输系统如聚合物纳米粒、脂肪乳和脂质体的种种优点，包括物理稳定性高；防止药物降解，提高药物稳定性；缓释性能好，耐受性强等等。此领域的研究表明，在最佳条件下，SLN可适用于疏水或亲水性药物的传递，从而实现最佳微粒载体系统的要求。本文将综述SLN在基因传递、蛋白多肽类药物非注射给药、难
5、溶性药物增溶及靶向给药系统中的研究和应用。关键词：固体脂质纳米粒；基因传递；蛋白多肽类药物非注射给药；难溶性药物增溶；靶向给药系统Studies and applications on Solid lipid nanoparticlesLIU Chun-xi1, ZHANG Na1*(1. School of Pharmaceutical Science, Shandong University, Jinan 250012, China)Abstract Since their first description by Mller et al., solid lipid nanoparticl
6、es (SLN) have attracted increasing attention as an efficient and non-toxic alternative lipophilic colloidal drug carrier prepared with common pharmaceutical excipients such as physiological fatty substance or lipid. Solid lipid nanoparticles combine the advantages of polymeric nanoparticles, lipid e
7、mulsions and liposomes, such as physical stability, protection of incorporated labile drugs from degradation, controlled release, excellent tolerability and so on, while simultaneously avoiding their disadvantages.The research work developed in the area confirms that under optimized conditions, they
8、 can be produced to incorporate hydrophobic or hydrophilic molecules and seem to fulfill the requirements for an optimum particulate carrier system. In this article, the applications of SLN in gene delivery, non-injection system for protein and polypeptide, solubilizaion and targeted drug delivery s
9、ystem will be reviewed. Key words: solid lipid nanoparticles, gene delivery, non-injection system for protein and polypeptide, solubilizaion, targeted drug delivery system固体脂质纳米粒( solid lipid nanoparticles, SLN) 是新型的亚微粒胶体给药系统，其研究始于20 世纪90 年代1。SLN是一种以室温下为固态的天然或合成的脂质或类脂，如卵磷脂、三酰甘油等为基质，将药物包裹于类脂核中制成粒径约为5
10、0-1000nm的固体脂质粒子给药体系。SLN主要适合于难溶性药物的包裹，用作静脉注射或局部给药，还可以作为靶向定位和控释作用的载体2。相对于常见的药物载体，如脂肪乳、脂质体、聚合物纳微粒等存在的热力学不稳定、毒副作用大和易被单核吞噬细胞系统所消除等问题3，SLN作为药物传递系统载体，具有无毒、生物相容性好、可生物降解、载药能力强、可延缓体内成分对药物的破坏、延长药物疗效、物理化学存储稳定、对靶器官有特异趋向性、成本低和利于大规模的生产等多种优点。因此，SLN又称为固体脂质体，是微乳、脂质体、聚合物纳米粒的替代品。近年来，国内外越来越多的研究人员对SLN用于药物载体所产生的良好效果产生了浓厚的
11、兴趣，并做了大量的研究工作。本课题组也在SLN方面进行了研究，本文将对其在大分子药物如基因，多肽等以及小分子药物如抗癌新药托氟啶和抗风湿药物阿克他利的研究进行综述。1 固体脂质纳米粒用于基因传递作为生物大分子的载体，SLN可以用于口服、注射、肺吸入等多种途径，适合多肽与蛋白质、DNA等各类治疗药物。对于口服或肺吸入途径而言，改善纳米粒的粘膜粘附性质有助于改进有效性和延长作用时间4。对于基因治疗，纳米粒不仅稳定地包合基因，防止基因的不稳定性，还能够同时包合某些导靶片断及其它辅助成分，可提高靶向性、提高基因细胞穿透性或者提高细胞内吞作用5等。基因治疗中，裸露的外源基因DNA容易被机体或细胞降解，难
12、以实现准确的表达，因此就需要基因载体，基因治疗的成功很大程度上依赖于开发出安全高效的基因载体6。研究表明非病毒载体的安全性较优于病毒载体，且能够包裹较大的核酸分子，可大规模生产和无免疫原性等优点，因而研制非病毒基因载体成为重要发展方向。常用非病毒载体包括脂质体和阳离子多聚物。但二者存在的自身毒性和稳定性差极大限制了其临床应用。鉴于现有非病毒载体的不足，近年人们逐渐将目光投向了对纳米载体系统的研究。在诸多纳米基因载体中， SLN凭借其优势成为新一代具有良好发展前景的新型给药系统。基因载体的粒径和带电性质是影响其细胞毒性和转染效率的重要因素7-8。本课题组分别构建了阳离子型和阴离子型SLN作为基因
13、载体，控制载体粒径以增强细胞的内吞作用，并设法调整其带电性质和带电量以降低其细胞毒性，提高最终的转染效率。1.1 阳离子型固体脂质纳米粒阳离子脂质体是目前较成熟的非病毒型基因载体，并且已经有多种商品化转染试剂上市9。但是阳离子脂质体稳定性相对较差，与质粒DNA的相互作用难以控制，往往导致大量聚集物形成，并且体内应用时转染效果还取决于给药途径。与阳离子脂质体相比较，阳离子SLN具备阳离子脂质体的特性，并具有更好的体内外稳定性，易于工业化大生产10。与其他阳离子型基因载体类似，阳离子SLN能与带负电的DNA通过静电引力结合成SLNs-DNA复合物，增加DNA稳定性，易与带负电的细胞膜结合，促进细胞
14、内吞，最终将DNA导入胞内11。本课题组首次利用杂合纳米技术向阳离子SLN体系中引入毒性小，生物相容性好的Ca2+。Ca2+能够诱导阳离子载-DNA复合物中部分缩合的DNA分子进行再缩合，从而使阳离子CTAB的用量控制在细胞可耐受范围内，从而解决了阳离子SLN由于自身电正性所引起的细胞毒性问题12。体外基因转染实验表明，阳离子SLN能够将绿色荧光蛋白基因成功递送到细胞内，虽在24h内的表达效率较lipofectamine低，但随着时间延长，到48h时表达绿色荧光强度增强，与商品化阳离子脂质体24h转染效果相当，证明了阳离子SLN用作基因递送载体的可行性(如图1所示)。1.2 阴离子型载基因三元
15、复合纳米粒本课题组构建的阳离子SLN/ DNA复合物由于正电性限于肺部等局部给药方式，不适合静脉注射给药，因此我们制备阴离子型SLN，以期克服阳离子载体的上述不足。利用FDA已批准可供临床使用的鱼精蛋白（protamine）作为聚阳离子对DNA进行缩合，不仅能使DNA伸展的长链得以压缩，提高其抵抗剧烈外力的能力13，且鱼精蛋白还可作为核定位信号促进内吞体逃逸，增强基因的体内外转染效率14，然后将该复合物包裹于SLN，制得载鱼精蛋白-DNA复合物的SLN，包封率高达86.55.28%，其独特的“核壳”结构以及鱼精蛋白与DNA紧密结合致使DNA释放缓慢，具有明显长效缓释能力15。在此基础上，我们以
16、制备阴离子型载基因SLN为目的，设计三元复合荷DNA纳米粒16。选用粒径在150-200nm的鱼精蛋白-DNA二元复合物作为内核支撑，20nm小粒径阴离子型SLN作为可吸附物，分子自组装制备阴离子型荷基因三元纳米复合物（图2）。体外转染实验结果（图3）显示，48h的转染量接近Lipofectamine组，并明显高于二元复合物组。三元复合纳米粒在综合了包封型SLN优点同时，具有更明显的穿越生理屏障的功能优势：由于外层SLN和鱼精蛋白pDNA二元复合物内核的粒径能够被严格控制，因此三元复合纳米粒的粒径大小更适合于细胞内吞；外层SLN通过静电作用吸附于内核表面，其作用力较弱，在内吞体酸性环境下易于分离，从而顺利释放内核；随着外层吸附物的剥离，内核中存在的强阳正
