果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察

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1、果蝇唾腺染色体标本的制备与观察摘要：染色体是遗传信息的载体，但是除了一些特殊的染色体之外，大部分染色体体积很小，而且没有标志，难以定位。本论文以果蝇三龄幼虫为实验材料，通过解剖分离出其唾液腺，制备染色体标本，在显微镜下观察果蝇唾腺染色体的形态特征，寻找形态良好分散适中的图像仔细观察，并根据唾腺染色体上横纹的形态和排列，识别不同的染色体。前言：双翅目昆虫（摇蚊、果蝇等）幼虫期的唾腺细胞很大，其中的染色体称为唾腺染色体。这种染色体尺寸远超普通中期相染色体，又称为巨大染色体。唾腺染色体处于体细胞染色体联会配对状态，并且唾腺染色体经过多次复制而并不分开，所以又称多线染色体。多线染色体经染色后，出现深浅

2、不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征；如染色体有缺失、重复、倒位易位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。各染色体的异染色质的着丝粒部分互相靠拢形成染色中心（chromocenter）；横纹有深浅、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基因的排列。唾腺染色体广泛应用于细胞遗传学、发生遗传学、进化遗传学及分子遗传学的研究中。实验材料：实验材料：果蝇三龄幼虫药品试剂：生理盐水、盐酸、蒸馏水、改良苯酚品红染色液仪器用具：解剖镜，显微镜，镊子，解剖针，载玻片，盖玻片，吸水纸等实验方法：1.剥离唾腺：在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即

3、将化蛹的三龄幼虫，用解剖针轻取，置于载玻片生理盐水中。双手手各持一个解剖针（针尖尽量细些），在解剖镜下进行操作。一根解剖针扎住幼虫前端三分之一的部位，固定幼虫，另一根扎住幼虫头部口器部位，适当用力向外拉，唾腺腺体随之而出。（如图一）清除除了唾腺之外的部分，尤其是和唾腺紧挨着的脂肪。（如图二）解离：用小滤纸片吸去生理盐水，在剥净的唾腺组织上滴一滴1NHCI，解离1-2min，以松软组织，利于染色体的分散。2. 清洗：吸去盐酸，滴加蒸馏水，浸泡1-2min后再用滤纸片吸去蒸馏水，重复3次，最后一次浸泡20min，以洗净盐酸。3. 染色：滴加改良苯酚品红染液，染色8-10min,染色时间不可过长，否

4、则背景也着色。4. 压片：将载玻片放在平整的台板上，盖上盖玻片，盖前先吸去多余的染料，用干净的滤纸片盖住玻片，用解剖针的另一端垂直地、螺旋形由中间向四周轻轻地敲打盖玻片，使细胞分散，染色体平展，最后用两层滤纸覆盖在盖玻片上，用两个拇指垂直用力按压，注意不要使盖片移动，用力和揉动是一个方向，不能来回揉。5. 镜检：先用低倍镜进行观察，找到分散好的染色体移到视野中央，转用高倍镜进行观察。解剖针解剖针图实验结果：自己的结果:这张图不是很清晰，应该是在染色期间染色时间较短，而且下端没有完全平展开，是用解剖针敲打和压片没做好。这整图片中各条染色体分支较清晰，但是少了一条，而且明显这4条都比较短，应该是染

5、色体断裂了，压片时用力不均同学的结果:根据课本第67页图C，X染色体臂靠近末端有一个永久性的蓬突，2L臂挨着末端蓬松处的臂有明显的横纹，颜色较深，以此来区分出X和2L；2R末端无蓬突，但是有明显的横纹，颜色较深，3R最末端蓬突，且最末端有横纹，颜色较深，但是它的蓬突更靠近末端，以区别于2L；3L最末端蓬突，但蓬突近中心方向有横纹，颜色较深，以区别于2L和3R。讨论：我自己做的实验结果不是很理想，主要的问题应该是染色时间较短，所以染色体上色不足，颜色就显得很浅，看不清晰，另外，敲打时力道不够，部分染色体未能完全展开，压片时力道不均匀或者盖玻片发生了滑动，导致染色体断裂。实验我做了两次，第一次是因为在解剖镜下操作时生理盐水干了，未能及时添加生理盐水，会导致唾腺细胞死亡，然后制作出来的标本中染色体都是小碎片。