《胰岛素样生长因子在骨性类错合畸形中的表达研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《胰岛素样生长因子在骨性类错合畸形中的表达研究（9页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、胰岛素样生长因子-1在骨性类错合畸形中的表达陈允嘉1，李 艳1，王豫蓉1，秘双燕1，吴增波1，王 强1，颜 婕2 （400015重庆，重庆医科大学附属口腔医院正畸科1，400038重庆，第三军医大学第三附属医院医教科技部2）摘要 目的 研究在下颌骨发育过度导致的骨性类错合畸形患者中，胰岛素样生长因子-1（IGF-1）基因的表达，探讨IGF-1基因表达对下颌骨生长的影响。应补充相关性的分析。方法 选取骨性类错合畸形患者27例，骨性类患者（包括个别正常合）27例各多少例，应用荧光定量PCR技术和酶联免疫吸附剂测定（ELISA）技术研究下颌骨中IGF-1基因的表达变化。结果补充回归系数 RT-PCR
2、检测结果显示，骨性类错合畸形组中IGF-1 mRNA的表达量为（5.54102.0447）g/l，骨性类组中IGF-1 mRNA的表达量为（1.28210.2731）g/l，2组比较具有统计学差异（P0.05）。根据IGF-1基因光密度值与浓度关系曲线，得回归系数0.998。ELISA检测结果显示，骨性类错合畸形组中IGF-1蛋白的表达量为（84.125929.2947）g/L，骨性类组中IGF-1蛋白的表达量为（22.40644.9312）g/L，2组相比具有显著差异（P0.05）。结论 下颌骨生长量越大，IGF-1基因的表达量越高，表明下颌骨髁状突软骨生长受IGF-1基因调控。没有进行相关
3、性分析，怎能得出这个结论？关键词 骨性类错合；胰岛素生长因子-1；下颌骨；遗传因素中图法分类号 文献标志码 A通信作者 王豫蓉，E-mail：Expression of insulin-like growth factors-1 in class malocclusionChen Yunjia，Li Yan，Wang Yurong ，Mi Shuangyan，Wu Zengbo，Wang Qiang,Yan Jie.(Department of Orthodontics，Hospital of Stomatoligy，Chongqing Medical University，Chongqing
4、, 400015,China1,ministry of science and technology,Third Military Medical University,Chongqing,400038,China2)Corresponding author：Wang Yurong，E-mail：Abstract 对照中文修改Objective To approach the expression of IGF-1 between Class malocclusion and Classmalocclusion( Individual normal)and we will investigat
5、e the relationship between the expression of IGF-1 and the mandibular growth. Methods 54 patients of skeletal Class malocclusion and skeletal Class malocclusion were included, detect the expression of IGF-1 mRNA and IGF-1 protein of patients in Class malocclusion and Classmalocclusion by Real-Time p
6、olymerase chain reaction (PCR) and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) method . Results The detection result of RT-PCR method showed that the expression of IGF-1 mRNA in Class malocclusion group is (5.54102.0447)g/l ,which was significantly higher than that in Class malocclusion group. ELISA a
7、ssay showed the expression of IGF-1 protein in Class malocclusion group and Classmalocclusion group was (84.125929.2947)g/L and (22.40644.9312)g/L,respectively. There was significant deviation between the two group(P0.05) . Conclusion The more mandibular growth capacity , the higher the expression o
8、f IGF-1. So the IGF-1 played an important promotion in the growth mandibular condyloid process.Key words Class malocclusion;IGF-1;mandible;genetic factor下颌骨生长过度导致的骨性类错合畸形是临床较为常见的一类错合畸形，其病因复杂，遗传因素占主导地位1-3。下颌骨髁状突的生长改建是与下颌骨生长直接相关的要素之一，受全身因素的调节和局部生长因子的反馈作用4-5。胰岛素样生长因子-1（IGF-1）作为生长激素的介质，在机体的生长发育中发挥着重要作用，
9、尤其对于软骨生长的调节作用较为突出5-7。Suzuki等8在成熟的大鼠中研究发现，注入IGF-1基因的颞下颌关节中，髁状突软骨层的厚度增加，通过活跃成骨的过程和诱导密致骨形成的方式加速髁状突软骨内成骨的速度。IKuo Yonemitsu等9的实验证实：IGF-1基因能加速髁状突软骨成骨的速度和阻止髁状突软骨细胞凋亡，因此可将其作为观察下颌骨生长的一个指标。Yolota等10的研究发现，在大鼠下颌骨髁状突的未分化间质细胞层中检测到IGF-1基因的表达，并且证实IGF-1基因是调节细胞凋亡的一个重要内源性因素。这些研究表明IGF-1基因与下颌骨的生长密切相关，是调节软骨增殖、分化，促进软骨基质合成
10、的一个重要的生长因子，但有关IGF-1基因在下颌骨细胞增长过度导致的骨性类错合畸形人群中的表达情况尚少见报道。本项研究应用荧光定量PCR技术和酶联免疫吸附剂测定（ELISA）法分别从核酸和蛋白的水平研究IGF-1基因在骨性类错合畸形患者和骨性类错合畸形患者中的表达，探讨IGF-1基因与下颌骨生长的关系。1 材料与方法1.1 研究对象选取2008年3月至2010年10月就诊于重庆医科大学附属口腔医院正畸科54例错合畸形患者，其中包括骨性类错合畸形患者27例；骨性类，单纯牙性错合畸形患者（个别正常合）27例。实验组病例选择标准：患者为汉族人群，无异族通婚史、不良习惯、替牙障碍，颌面部损伤史、营养不
11、良，肝脏疾病、全身疾病以及其他遗传病史。实验组中上颌骨生长正常，下颌骨生长过度，类骨面型，骨性类错合畸形；存在3代或3代以上家族遗传史；磨牙近中关系；下颌不能后退至前牙对刃位；头颅侧位片示ANB-1，SNB82.4，SNA正常。对照组选择标准：中上下颌骨生长正常，骨性类关系；磨牙中性关系；头颅侧位片示前后颅底线距、颅底角、下颌角、前后面高比、上颌大小形态正常；2ANB4（包括牙性错合患者与个别正常合）。1.2 标本处理于重庆医科大学附属口腔医院检验科采取实验组和对照组新鲜血液各4ml（抗凝血2ml，无任何处理血液2ml），将2ml抗凝血立即分别分装成0.25ml个，加入TRIpure LS R
12、eagent提取试剂各0.75ml，上下颠倒混匀后置于漩涡混合器涡旋振荡混匀，室温静置10min后转移至-80超低温冰箱储存，待后续实验使用。将未经任何处理的2ml血液室温静置1h后，3500rmin离心5min，吸取上清液至干净1.5ml EP管（约500ml），封口膜封口，放置-80超低温冰箱保存备用。1.3 主要试剂TRIpure LS Reagent（RP1101）购自北京BioTeke Corporation。SYBR Premix Ex TaqTM（Perfect Real Time）（DRR081S），PrimeScript RT reagent Kit With gDNA Er
13、aser(Perfect Real Time)(DRR047S),250bp DNA Ladder Marker（D515）购自TaKaRa公司。人IGF-1 ELISA试剂盒（1R423s）购自美国RB公司。1.4 RT-PCR检测IGF-1 mRNA的表达1.4.1 RNA的提取 血液为抗凝血标本，参照TRIpure LS Reagent试剂说明书，常规提取血液中的总RNA。应用紫外分光光度仪测定D（260）D（280）的比值，若比值大于1.7，说明符合纯度要求。应用1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性。1.4.2 逆转录和PCR扩增 提取的总RNA按照TaKaRa公司RT-PCR试剂盒进
14、行逆转录和PCR扩增反应。逆转录反应的条件为42 2min；37 5min；85 5s；根据GenBank提供的信息，由上海宝生物公司合成引物，人IGF-1基因（GenBank：序列号NM000618.3），选取人GAPDH基因（GenBank：序列号NM002046）作为内参对照，同样设计引物。人IGF-1的引物：上游5-ATGTCCTCCTCGCATCTCTTCT-3，下游引物：5-ATAAAAGCCCCTGTCTCCACAC-3，扩增产物长度为138bp。hGAPDH的引物：上游5-CTTTGGTATCGTGGAAGGACTC-3，下游引物：5-GTAGAGGCAGGGATGATGTTC
15、T-3，扩增产物的长度为132bp。PCR反应体系中含有Ex TaqTM (Perfect Real Time) 10l；上下游引物各0.4l；ROX Reference Dye(50) 0.4l；模板cDNA 2l；dH2O 6.8l。PCR反应条件为95 10s；95 5s；55 30s。，共40个循环，采用实时荧光定量PCR仪自动生成扩增曲线和溶解曲线，根据曲线的情况来确定反应产物的单一性。设定阈值为0.05，分别读取各个样本的实时荧光定量PCR扩增曲线所对应的循环次数。1.5 ELISA方法检测IGF-1蛋白的表达血液采用未加抗凝剂处理的血清标本，采用双抗体夹心ELISA检测方法，严格按照试剂说明书进行操作，实验设3个复孔。向酶标板中分别加入浓度为0、0.2、0.8、2、4、8ngml的标准品25l，血清样品25l，编号并记录；再向酶标板中每孔加入25l Biotin anti IGF-1，混匀30s，37 30min；将板内反应混合液体甩净，每孔加入350l 1洗涤液，洗涤且重复3次。加入50l HRP，30s，37 30min；洗板重复3次；再分别加入50l TMB显色液，10s，37 15min。加入50l终止液，30s。
