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1、加水溶解后,定容500mL实验十一分光光度法测定火腿肠中亚硝酸盐的含量一、实验原理样品经沉淀蛋白质,除脂肪后,在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮 化,再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料, 通过测定吸光度可与标准进行比较定 量。二、试剂与仪器(1)试剂亚铁氰化钾溶液:称取10.6gK4Fe(CN)6 .3H2O 溶于水定容 100mL.乙酸锌溶液:称取11g Zn( CHCOO)2 .2H2O加1.5mL冰乙酸,溶于水定容50mL。饱和硼砂溶液:称取5g NaB4O7 . I0H2O溶于100mL热水中,冷却备用。20%盐酸:取54mL浓盐酸加水45mL。0.4%对氨基苯磺酸:称取0.4g对氨
2、基苯磺酸溶于100mL20%盐酸中。200ug/mL亚硝酸钠标准液:精密称取0.1000g经硅胶干燥24小时的亚硝酸钠(GR),5.0ug/mL亚硝酸钠标准使用液:吸取亚硝酸钠标准液 5.0mL于500mL容量 瓶中用重蒸馏水定容。(2)仪器电炉电热恒温水浴锅 玻棒漏斗铁架台烧杯(50mL、200mL、500mL 各2个);容量瓶(250ml1个);吸管(2mL,5mL,10mL,50mL各1支);比色管(50mL10 支)三、实验操作(1)样品处理称取3g左右火腿肠于50mL烧杯中,加入饱和硼砂溶液 6.3mL,以玻棒搅 匀,用70T左右的重蒸馏水约100mL将其洗入250mL的容量瓶中,置
3、于沸水浴 中加热15分钟,取出,一边转动一边加入 5mL亚铁氰化钾溶液,摇匀,再加入 5mL乙酸锌溶液以沉淀蛋白质。定容,混匀,静置半小时,除去上层脂肪,过 滤,弃去初滤液30mL,收集滤液备用。(2)绘制标准曲线吸取0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20mL亚硝酸钠标准使用液,分别置入7支50mL比色管中,各加入0.4%对氨基苯磺酸2mL, 混匀,静置3-5分钟后各加入1.00mL 0.2%盐酸萘乙二 胺溶液,加水至刻度,混匀,静置15分钟,用2cm比 色皿,以零管调零,于538nm处测量吸光度,以亚硝 酸钠含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。(3)样液测定吸取40mL样品处理液于50mL比色管中,按标准 曲线绘制步骤进行,测定吸光度,通过吸光度从标准 曲线上查出亚硝酸钠的含量(ug)。四、计算亚硝酸钠含量X X 1000I =m 40 亠 25010001000式中:X 40mL样品处理液中亚硝酸钠的含量(ug)M火腿肠的质量(g)#