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1、实验室主 题文献编号 F7临沧市第二人民医院检查科分子生物实验室标本解决（核酸纯化）原则操作程序第1页 共页第 1 版 第0次修改撰写日期:.11.0 目的：保证标本解决原则化、规范化,使不规范操作因素对实验成果导致的影响减至最小。2 合用范畴:乙型肝炎病毒核酸提取、解尿支原体核酸提取、沙眼衣原体核酸提取、PV核酸提取、HCV核酸提取、结核杆菌核酸提取、淋球菌核酸提取。3操作人:李成庭、李丽蒙、高子文 李华娇 张国华4原则操作程序41乙型肝炎病毒(NA血清）)双手戴上手套,从冰箱取出标本,将离心管依次编号。2)取出1.l离心管,相应标本编号，置于离心管架上。3)将移液器调到70l，先混匀DNA
2、提取液，再吸取70l加入到已编号的离心管中。然后吸取3l血清，加入离心管中混匀，注意每吸取一份血清标本应更换一次枪头。解决所有标本，然后将离心管插到金属浴孔内，10加热1分钟。）裂解完毕后将离心管取出,然后10000rpm离心5分钟,取上清液20l加样上机。5）收拾台面至准备状态。2 CT、UU、H A（分泌物）)双手戴上手套，从冰箱取出标本,将化验单和离心管依次编号。2)双手换上新手套,取出1.5m灭菌离心管，相应标本编号，置于离心管架上。）向有棉拭子的离心管中加入m无菌生理盐水，振荡混匀，将混悬液用移液器吸取1.0ml 加入到已编号的离心管中。10000rp离心5分钟，弃上清液,留取沉淀加
3、50微升DN提取液混匀,金属浴10加热10分钟。4）裂解完毕后取出离心管,然后10000rpm离心5分钟,取上清液2加样上机。5）收拾台面至准备状态。.结核杆菌（DNA痰液、胸腹水等）)双手戴上手套，从冰箱取出标本，将化验单和离心管依次编号。2）双手换上新手套,取出.5ml灭菌离心管，相应标本编号,置于离心管架上。3)用移液器吸取4倍体积4%NaO到痰液容器,液化3分钟，用移液器调吸取ml加入到已编号的离心管中，然后10000rp离心5分钟，弃上清,留取沉淀，用无菌生理盐水洗涤两次，沉淀加5uDNA提取液,充足震荡混匀。胸腹水、脑脊液直接混匀后，用移液器调吸取ml加入到已编号的离心管中，然后0
4、000rm离心分钟,弃上清,留取沉淀,加50ulD提取液，充足震荡混匀。然后将离心管插到金属浴孔内,10加热0分钟。4）裂解完毕后将离心管取出，然后00rm离心分钟，取上清液加样上机。5）收拾台面至准备状态。44丙型肝炎病毒RN(血清） 1) 双手戴上手套，从冰箱取出标本，将离心管依次编号。2）取出1.5l灭菌离心管，相应标本编号,置于离心管架上. 3）1.5ml无菌管加入50u蛋白酶K0l血清200ul裂解液混匀2加热10in（同步将洗脱液72预热)加入250ul无水乙醇将混合液所有吸至离心柱rpm/1min将离心柱装在新的收集管中加50u克制物清除液1rpm1mi将离心柱装在新的收集管中加
5、50ul去离子液rm/min将离心柱装在新的收集管中再加500u去离子液p/4i将离心柱装在15ml的离心管中,开盖72/2min在离心柱正上方加入2预热的洗脱液5u,盖盖1400rpm1min,离心管内即病毒核酸溶液,最佳立虽然用，如需保存，置20。注:配试剂蛋白酶K+.35ml洗脱液，混匀，-20保存CarrerN+0u内标液混匀，2保存去离子浓缩液+44ml无水乙醇裂解工作液：1人份病毒裂解液00ul arerRN4ul,现用现配（根据标本数依次增长）。PC试剂C反映液A-, CV反映液3ul，HCV反映液C-25ul混匀（根据标本数依次增长)。4乳头瘤病毒D（宫颈样本） 1) 双手戴上手套,从冰箱取出标本,将离心管依次编号后。)取出1.5ml灭菌离心管，相应标本编号，置于离心管架上.3）向有样本刷的离心管中加入2ml无菌生理盐水,振荡混匀，将混悬液用移液器吸取1.0ml 加入到已编号的离心管中。10000p离心5分钟,弃上清液,留取沉淀加50微升DN提取液混匀，金属浴0加热10分钟。裂解完毕后将离心管取出,然后100m离心分钟，取上清液加样上机。起 草 人校对 人批 准 人生效日期李丽蒙高子文李成庭115标本解决(核酸纯化)原则操作程序
