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1、小鼠基因组提取1. 从小鼠尾巴尖位置减取约0.5cm小鼠尾巴2. 1.5mlEP 管中加 600卩1 Tail buffer（ + 蛋白酶 K 20mg/ml）（蛋白酶 K: Tail buffer=l:200）65C 2hr以上（消化干净即可）。期间上下颠倒混匀几次。3. 加400卩1体积比为25:24:1的酚：氯仿：异戊醇，漩涡震荡或者剧烈颠倒混匀，直至混 合液呈现白色混浊状4. 12000rpm 离心 5min5. 将EP管小心自离心机中取出，吸取400卩1上清于一新管中6. 加1ml无水乙醇，温和上下颠倒几次7. 12000rpm 离心 5min，弃上清。8. 12000rpm 再离心
2、 5min9. 移液器吸取上清，沉淀干燥10. 用 lOOylTE buffer 溶解沉淀Tail buffer1M Tris (PH=8.0) 5ml5M Nacl0.5 M EDTA10% SDS ddH O27.5 ml25ml50mlup to 500 mlGneotyping PCR 反应体系如下小鼠基因组模板2.8卩1 lOxPCR buffer 2g1 dNTP(lOyl) 1卩1Forward primer 1卩1Reverse primer 1卩1Taq E 0.2卩1 ddH2O up to 201Gneotyping PCR 反应程序如下：1. 95 C 2min2. 95 C 15s3. 退火温度 30s4. 72C 1Kb/min2-4 35 cycles5. 72C 3min6. 16C 8延伸时间和目的基因的片段长度和Taq E的延伸效率有关,本实验室所用Taq E的延伸效率 是 1Kb/min
