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1、mindray 迈瑞文件类型技术文件机密等级MRSZ/R03N05.085.08 (3.0)内部公开文件编号W-SBYQ-*工艺代号Roche LightCycler 480 11实时荧光定量PCR系统操作与维护规程参考资料文件编号说明文件发放部门（必填）r*r*(3.0)修订记录版本ECN/CR/PCN/TCN修改内容概述修订人生效日期保密文件，知识产权属迈瑞公司所有。 页（注：此模板3.0 版开始加入 “生效时间”列，故之前修订记录中此项信息为空）Roche LightCycler 48011实时荧光定量PCR系统操作维护规程1 目的使Roche LightCycler 480II实时荧光
2、定量PCR系统能够正确和正常的使用，保证系统的正常运 行的准确性和精密度，以获得准确可靠的检验结果。2 适用范围使用Roche LightCycler 4801实时荧光定量PCR系统进行相应的临床项目检测，并经过系统维 护保养工作培训（至少已经阅读过系统操作手册和保养手册）的试剂研发工程师和厂家维修工程师。3 术语和定义31 实时荧光定量PCR技术实时荧光定量PCR技术指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个 PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR技术于1996 年产生，由于该技术不仅实现了 PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR
3、相比，它具有特异性 更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。3.2 实时荧光定量PCR系统实时荧光定量per仪，由荧光定量系统和计算机组成，用来监测循环过程的荧光。与实时设备 相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成 荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集到的数据 进行正常化处理来弥补背景荧光的差异。正常化后可以设定域值水平，这就是分析荧光数据的水平。实时荧光定量 PCR 仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件，构成 PCR-DNA/RNA 实 时荧光定量检测系统。4 职责
4、与权限上海研究院负责该系统的日常维护保养，包括每周保养，以及需要时的保养工作。厂家工程师 进行每年一次的全面保养。4.1 组织编写-（仪器设备）操作与维护规程，并安排相关人员的培训考核。4.2 保证仪器设备在计量有效期内使用，并配合完成计量相关工作。4.3 负责仪器设备的正确使用、妥善保管和精心维护。4.4 负责仪器设备的日常保养。4.5 负责仪器设备的维修、调拨、封存、报废等工作。5内容及流程5.1 安全细则5.1.1 工作人员在使用仪器设备前首先进行岗前培训，熟悉仪器设备标准操作程序，并经室负责 人考核认可。5.1.2 实验室操作仪器设备的工作人员应严格按仪器使用说明进行操作。5.1.3
5、仪器应放置在水平台上，电源电压必须与仪器要求电压一致，并连接可靠的地线。5.1.4 仪器远离水源、明火及腐蚀性物质。5.1.5 实验结束后应及时清除仪器内的样品（样品按要求进行处理）盖上机盖，作好仪器使用记 录，清洁仪器外表并注意防尘。5.2 操作指南5.2.1 启动机器5.2.1.1 机器主开关位于机器右后方。5.2.1.2 机器正面两个警示灯代表机器状态。待警示灯 （右） 由闪烁橘色灯转变成稳定橘色灯，警 示灯 （左） 由橘色转变成绿色 （约三分半钟），表示机器已经启动完成。左警示灯右警示灯机器状态橘*闪烁*橘*闪烁*正在初始化绿橘机器启动完成96/384孔盘还未放入绿橘*闪烁*96/38
6、4孔盘正在放入中绿绿机器启动完成96/384孔盘已经放入绿*闪烁*绿*闪烁*实验进行中5.2.1.3 按压机器正面上唯一的按钮，放入已经封膜完成之 96 或 384 孔盘。放置完成后，左右 两警示灯都呈现绿色。5.2.2 启动软件5.2.2.1 开启计算机，并以正确的使用者名称与密码登入 Windows5.2.2.2 开启 LightCycler 480 软件，并输入正确的使用者与密码。5.2.3 软件设定- 开启新实验5.2.3.1 软件开启后，会进入主画面。点选 “New Experiment”。bi&buii eiiL： 20DE2 F 忖CgiiilledOver/iwVersion
7、1.2.01695.2.3.2 出现实验设定窗口。任何时候需要回主画面的话，点选画面右边的按钮。Ovc-rvicw/fIjjJijj1 ijj1 ijJ1ir*1| New EjiperimMSystism A AninRun UatesReacdoii Wume Lj兰JPragmins低帕軸 1.2.0.0625My CormpulG-r (Tracaabla)FormatoProgram NameKQ5：2Step Delay (cycles卜汀：Nore审doao10士帖弓0v -o-60-7NoreaoOQ25:Z.2-71十 -o-DCiaa专 Single5.2.3.10点选各个
8、program即可设定详细温度变化步骤，请根据产品说明书来设定，利用+ 与一增加或删除步骤。需要设定的参数包含Target (C)目标温度，Acquisition Mode (荧光侦测模式)，Hold (hh:mm:ss)停留时间。Ramp Rate (C/s)为升降温速度，范围如下：Ramp Rate (C/s)Heating upCooling down96-well Block1.0 - 4.4 C/s1.0 - 2.2 C/s384-well Block1.0 - 4.8 C/s1.0 - 2.5 C/s5.2.3.11将实验步骤储存成Template以便下次进行套用。点选左下角“Save As Template”即 可把此步骤储存起来。若要进行套用时，请直接点选窗口左下角“Apply Template”，选择欲套用之实验步骤即可。Apply iTemplate厂一._.Seve AsTemplate5.2.3.12设定完成后点选“Start Run”开始进行实验。5.2.3.13跳出档案储存窗口，请输入欲储存之文件名称。5.2.4 将样品分群5.2.4.1 点选窗口左边的 “Subset Editor”。5.2.4.2 点选“New”新增新的群组，并将其命名。5.2.4.3 利用鼠标选取此群组之样品位置，点选窗口右下角“Apply” ，此时被选取的样品位
