油红O染色具体操作方法

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1、脂肪和类脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分,不溶于水而易溶于酒精、 乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上,脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化 供能。脂肪主要存积于脂肪组织中,并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。在病理检验中,脂类染色法最常用以证明脂肪变性,脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是 苏丹染料,最常用的有苏丹III,苏丹IV,苏丹黑及油红O等。脂肪被染色,实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸 附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时,对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理, 适当提高温度(37C-60C)对组织切片

2、染色效果是有好处的。脂类染色,用冰冻或石蜡切片,以水溶性封固剂封固,如甘油明胶和阿拉伯糖胶等。一、苏丹m(Sudan I)染色法:操作方法:(1) 固定于10%甲醛的组织。(2) 水洗后采用冰冻或石蜡切片。(3) 经蒸馏水后,浸染于Harris苏木素 或明矶苏木素中淡染1-2分钟。(4) 自来水冲洗。(5) 水洗后,移入70%酒精5秒钟。(6) 投入苏丹m染液中约30分钟或更长时间,置于56C温箱中。(7) 在70%酒精中洗涤5-10秒钟。(8) 洗于蒸馏水中,然后将切片移于载玻片上。(9) 切片移于玻片上,将切片周围的水分小心擦掉。(10) 甘油明胶封固。结果:脂肪呈橙红色或鲜红色或黑色,胆

3、脂素呈淡红色,脂肪酸不着色,细胞核呈蓝色。试剂配制:1. 苏丹m染液配法:将0.15克苏丹m溶解于100ml70%酒精或纯丙酮和70%酒精混合液中(各50ml),临用时 过滤,所得滤液即为饱和浓度。注:浸染时,容器必须盖好,否则酒精或丙酮挥发,染料沉淀。2. 甘油明胶配制:明胶40g蒸馏水210ml甘油250ml石碳酸结晶5 ml先将明胶浸入蒸馏水中2小时或更长时间,然后加甘油和石碳酸,加热15分钟,摇搅直至混合液均匀为止。二、苏丹V(Sudan V)染色法:苏丹V又名猩红,是苏丹m的衍生物,作为脂肪染剂,经各地实验证明,其结果优于苏丹m。其染色步骤与苏丹m染法完全相同,从略。试剂配制:将1

4、-2克猩红染剂加纯酒精70ml,10%氢氧化钠2 0ml,蒸馏水10ml,制成混合液,以微火加热,置37 C温箱中1 小时,取出冷却后过滤,12小时后即可使用。注:此液5天内失效,如此看来,浪费较大,建议配制70%酒精饱和液,或纯丙酮和70%酒精饱和液,它们使用方便,且不易失效。结果:脂肪呈猩红色,比苏丹m更为清晰。三、油红染色法:油红作为脂肪染色剂,其染色步骤简便,染色结果肯定,并且优于苏丹V。试剂配制:油红O0.5g异丙醇(含量98%)100ml此为油红饱和液,可长期保存备用。染色步骤:(1) 冻切片(2) 蒸馏水充分洗涤。(3) 油红稀释液染10-15分钟,避光、密封。油红稀释液的配制:取油红饱和液6毫升,加蒸馏水4毫升,静置5-10分钟后过滤后使用。(5) 60%乙醇镜下分化至间质清晰。(6) 水洗。(7) Marry氏苏木素复染核。(8) 水洗。(9) 甘油或甘油明胶封片。结果:脂肪呈鲜红色,细胞核呈蓝色,间质无色。注意事项:1. 油红染色时应避免试剂挥发过多,否则易形成背景沉淀。2. 60%乙醇分化,应于镜下控制至脂肪组织呈鲜红色,间质无色时为度。

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