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1、本科生毕业论文（设计）荧光法测定片剂中抗坏血酸的含量名：指导教师：院 系：化学系专 业：化学本科提交日期：2010-4-28目录摘 要 3英文摘要4引 言 51.实验部分 51.1 仪器51.2 试剂 61.3 实验方法 62 荧光底物的选择 62.1 邻苯二胺 62.2、水杨酸72.3、苯甲酸83.实验结果与讨论 93.1 荧光光谱93.2 酸度的影响 103.3 不同缓冲体系的影响 113.4 缓冲体系体积的影响 123.5 Fe3+用量的影响133.6 加入顺序的影响 143.7 时间的影响 1 53.8 温度的影响 1 63.9 苯甲酸用量的影响 1 73.10 表面活性剂的影响 17
2、3. 1 1共存离子干扰试验 1 93 . 12工作曲线的制备 1 94.样品测定结果 205.结论 20注释20参考文献21致 谢 21荧光法测定片剂中抗坏血酸的含量康玉胜指导老师；张娜（黄山学院化学化工系，黄山，安徽 245041）摘 要：基于维生素 C 本身没有荧光，苯甲酸与维生素 C 反应生成荧光物质的特性， 建立了一种测量维生素C含量的方法。在pH=6.0的NaOH邻苯二甲酸氢钾的缓冲介质中， 苯甲酸对维生素C促荧光明显，可在激发波长310nm，发射波长410nm处测其产物的荧光 强度V浓度在0-3. 5x10-屯/mL范围内其荧光强度呈良好线性关系，检测限较低，相关系数 为0.98
3、8利用本法进行回收实验与样品测定，结果令人满意，适应于片剂中维生素C的测定。关键词：荧光光度法；维生素C；苯甲酸Fluorescence spectrometry in tablets ofAscorbic acidKang YushengInstructor; Zhang Na(Huangshan University Department of chemistry and chemical engineering,Huangshan, Anhui 245041)Abstract:Based on vitamin C itself has no fluorescence, benzoic a
4、cid and vitamin C reaction of fluorescence material characteristics, establishes a measure vitamin c content. At pH = 6.0 of NaOH potassium hydrogen phthalate buffer media, promoting hydroxybenzoic acid on vitamin C can be used in fluorescence obvious, excitation wavelength 310nm, measuring the emis
5、sion wavelength 410nm at its products of fluorescence intensity .Vc concentration in the 0-3. 5 x 10-5g/mL range its fluorescence intensity is good linear relationships, the detection limit is low, the correlation coefficient 0.988. Use this law to recycle and specimens, the results are atisfactory,
6、 they are suitable for the tablets in the determination of vitamin C.Key words:fluorescence spectroscopy; vitamin C; benzoic acid引言维生素 C 是可溶于水的无色结晶，是一种分子结构最简单的维生素。由于 其防治坏血病的功能，所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。维生素 C 能保持巯 基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态，起解毒作用等。它广泛存在于植物组织中， 新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为丰 富。准确测定维生素 C 的含量，对饮食健康、医疗保
7、健都具有十分重要的意义。 近年来文献报道的测定方法1,主要有光度法2、3电化学法4、滴定法5、酶法6、 色谱法2、7等。Deutsch和Weeks曾经报道过一种检测维生素C的荧光分析法(OPDA)，并 被指定为维生素C的经典荧光分析法9。在该方法中，维生素C先被活性炭(Norit) 氧化为脱氢抗坏血酸(DHAA), DHAA再与荧光底物邻苯二胺(OPDA)结合生成荧 光产物，通过对该荧光产物的检测实现对维生素C的定量分析8。邻苯二胺本身 有很强的荧光，而且过量的活性炭会吸附一定量的维生素C，所以有人提出了一 种新的测定维生素C的荧光分析方法io、ii。基于维生素C被Cu2+氧化为DHAA， D
8、HAA进一步与苯甲酸及十六烷基三甲基溴化铵产生荧光协同增敏作用9，通过 对体系荧光强度的测定进行维生素 C 的定量分析。该方法所涉及的体系稳定性 好，但需要进行加热，且反应时间较长。本文的基本思路是，在以上实验的基础 上，尝试探索和寻找一种效果更好的氧化剂氧化抗坏血酸。实验结果表明，在不 外加氧化剂的条件下，苯甲酸与Vc在特定的酸度条件下可反应生成一种较强的 荧光物质，其荧光强度与Vc的浓度成正比，据此建立了新的荧光测定Vc的方 法。与经典的Deutsch荧光方法相比，反应底物荧光较弱，降低了背景干扰，与 孙振艳荧光方法相比，本反应不需外加氧化剂，且反应时间较短，反应条件控制 较容易。其原理可
9、以表示如下图：1.实验部分1.1 仪器荧光分光光度计(日立F-4500,天津天美科技有限公司)，分析天平(AL104,北京赛多利斯天平有限公司）1.2 试剂邻苯二胺（1,2-diaminobenzene，江阴市华亚化工有限公司）：4.0xl0-4g/mL 水杨酸（2-Hydroxybenzoic acid，宜兴市辉煌试剂厂）：4. 0x10-4g/mL 苯甲酸溶液（Benzoic acid ， BA,国药集团试剂有限公司）：1. 0x10-4g/mL 硫酸高铁氨溶液（Ammonium iron,国药集团试剂有限公司）：2. 0x10-3g/mL 维生素C（vitamin C,国药集团试剂有限公
10、司）:准确称取0.0500克,配制到100ml 容量瓶，可制得5.0x10-4g/mL的储备液（避光密封2到8C）。维生素C工作液：1. 0x10-5g/mL，使用时用去离子水由储备液逐级稀释。氢氧化钠（ Sodium Hydrate,:： 0.2mol/L硼酸（Boric Acid，国药集团试剂有限公司）：0.2 mol/L磷酸二氢钾（potassium dihydrogen phosphate;monopotassium phosphate, 上海试齐廿 有限公司:： 0.2mol/L磷酸二氢钠（sodium dihydrgen phosphate，江苏太仓化工厂）：0.2 mol/L氯化
11、钾（Potassium Chloride，中国上海试剂一厂）：0.2 mol/L盐酸（hydrochloric acid，中国宿州化学试剂有限公司）：0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾（potassium acid phthalate，汕头市西陇化工厂有限公司）：0.2 mol/L无水乙醇（absolute alcohol;anhydrous ethanol上海展云化工有限公司） 硼砂（四硼酸钠）（sodium tetraborate，中国云岭化工厂）：0.2mol/LVc 药片：湖北华中药业有限公司 上海玉安药业有限公司 南京白敬宇制药有限公司 上海信谊黄河制药有限公司规格（0.1g/粒） m
12、=0.1249 规格（0.1g/粒） m=0.1445规格（0.1g/粒）m=0.1486规格（0.1g/粒）m=0.15401.3 实验方法于10mL比色管中依次加入1.00mLVc工作液,2.5 mL buffer, 1.5mL苯甲酸, 去离子水稀释定容至刻度，测定荧光光谱。同时在久ex /久em =310nm/410处, 测定荧光强度F。同时测定试剂空白（2.5 mL buffer, 1.5mL苯甲酸）的荧光强 度 F0, F1=F-F0。2 荧光底物的选择2.1 邻苯二胺取Vc工作液（1ml） +硫酸高铁铵溶液（2ml） +缓冲溶液（2ml） +邻苯二胺（2ml）测得荧光强度F,取硫酸
13、高铁铵溶液（2ml） +缓冲溶液（2ml） +邻苯二胺（2ml）测得荧光强度F0,测得荧光值如表1。表 1 pH 值对邻苯二胺体系荧光的影响692由图1可看出邻苯二胺本身具有较强的荧光强度，而且与Vc反应生成产物 所促的荧光值很小。139615651374.167.53814771585pH FF2.2 水杨酸取 Vc 工作液（ 1ml） +硫酸高铁铵溶液（ 2ml） +缓冲溶液（ 2ml） +水杨酸（ 2ml） 测得荧光值如表 2。表 2 pH 值对水杨酸体系荧光的影响pH1689.2F32975821641978F0F- Fo= F1271.1577.32056248457.9180.71
14、08-506F-pH 图27002500230021001900170015001300F1100900700500300100-100-300-500+ FF0F1pH图2 pH 值对水杨酸体系荧光的影响由图2可以看出，水杨酸也具有很强的荧光强度，与Vc反应所增荧光值很小。2.3 苯甲酸取Vc工作液（1ml） +硫酸高铁铵溶液（2ml） +缓冲溶液（2ml） +苯甲酸（2ml）测得荧光值如下表。表3 pH值对苯甲酸体系荧光的影响pH1.267.68.4F7.3314874.8349.19F0F- Fo= F16.27347.9824.8517.641.057100.0249.9831.55F
15、-pH 图FF0FlpH图3 pH值对苯甲酸体系荧光的影响根据图3可以看出，苯甲酸体系荧光增强非常明显，故本文选用苯甲酸作为 荧光底物进行下一步研究。3.实验结果与讨论3.1荧光光谱BA用量（1ml）, buffer用量（2.5ml）, Vc用量（lm 1）不同组合的体系荧光光谱图叠加 如下图：-J-_3-Ja-J:J-Y.JBp 坊JI_ar.-a-a=/Jv-a-3sT-aF-J-a-*-JFF 亠 .UVCOOSSOC0 o a 0 9 0 9 0 -u o o o -u o o nu o o o -u o o nu LJ 4 321FD987 6R- 43 2 1l.Tc*B4*bnffBrZ_ t*M3. B A专 Bl+bTLff*r3_ tralfcrE.U酣7. Ve*lr
